Universidade Federal de Uberlndia Minas Gerais, Brasil.

Instituto de Cincias Agrrias ICIAG

Bacharelado em Agronomia

Produo de
Antibiticos

Integrantes: Erickson Oliveira, Guilherme Alem, Johnatan , Rodolfo Lemos; Samara Garcia; Vitor
Veloso, Orientadora: Dra. Fabiana Batista. Disciplina: Tecnologia Produtos Agropecurios.

Principais
Caractersticas

So substncias com toxidade seletiva;

Possui ao danosa aos microrganismos, sem afetar
as clulas do hospedeiro;

Usado no tratamento de doenas infecciosas;

So conhecidas cerca de 100.000 substncias,
porm somente 800 so utilizadas;

Histria
Paul Ehrlich (1854 - 1915) desenvolveu a
bala mgica atravs de experimentos com
corantes e tcnicas de colorao de
microrganismos;
1904 Foi utilizado o vermelho tripan no
tratamento do tripanossoma, causador da
doena africana do sono;
Ehrlich & Hata (1910) uso da arsfenamida
no tratamento de sfilis (Salvarsan);

Histria
G. Domagk (1935) - Vermelho Prontosil
(camundongos), e o Prontosil quando
clivado no organismo originava a
sulfanilamida (droga eficaz);
H. Florey & E. Chain (1939) Aps 43
anos da descoberta da penicilina por E.
Duchesne, conseguiram a purificao da
penicilina e testes em cobaias;

Histria
S. Waksman (1944) descobrimento da
estreptomicina (Streptomyces griseus);
1953 Isolamento de microrganismos
produtores: Cloranfenicol, Neomicina,
Terramicina e tetraciclina;
A partir de 1953 a indstria investiu
milhares de dlares na busca de novas
drogas antimicrobianas.

Processo de
Investigao de Novas
Desacelerao na
taxa de realizao de
Drogas
novas pesquisas;

Altos Custos
(10 - U$20 milhes)
2,6 % das novas
drogas usadas para
fins teraputicos
(1965). Atualmente
apenas 1%.
8-10 anos de
pesquisa;

Importncia de Novas
Pesquisas
Aprimoramento dos
antibiticos naturais
Maior atividade;
Menor toxicidade;
Menores efeitos
colaterais
Maior espectro de
ao;
Melhores
propriedades
farmacolgicas.

Fig: Recente surto de E. coli, na Alemanha,

cepas resistentes antibiticos.

Importncia de Novas
Pesquisas
Aumento na
Resistncia Mltipla e
Cruzada:
Desenvolver
resistncia simultnea
a mais de um
antibitico, que
possuam o mesmo
modo de ao.

Fonte: Adaptado de Madigan et al.,

Brock Biology of Microorganisms, 2003.

Princpios de um Agente
Antimicrobiano
Ser ativo frente ao
patgeno in vivo;
No deve produzir
reaes indesejveis,
ou seja, deve ser
relativamente atxico
para fagcitos,
clulas, tecidos e
rgos do corpo;

Princpios de um
Antibitico

No deve precipitar
as protenas do soro;

Ser solvel em gua

ou soro fisiolgico;
Ser relativamente
estvel;
No deve hemolisar o
sangue.

Fig.: Dano causado s hemceas durante a

hemlise.

Princpios de um
Antibitico

A potncia varia com a

massa;

Nvel srico varia com

a via de absoro;
O antibitico deve ser
ingerido periodicamente
de modo a manter a
concentrao mnima
letal ao patgeno.

Fonte: Uerj.

Aplicaes
Agentes teraputicos;
Antitumorais
(citostticos);
Contra doenas das
plantas:
Tratamento de sementes
Cultura do arroz.

Conservantes de
alimentos (ex: nisina
contra os clostrdios).
Estimulantes do
crescimento animal;
Ferramentas na
bioqumica e biologia
molecular.

Fig: Validamicina (validacin, Produto

comercial.

Antibiticos Contra
Antibiticos
e seu
Microrganismo
Usos
Doenas
em
Plantas
grupo qumico
Blasticidina S
(nucleosdeo)

Streptomyces
griseochromogenes

Fungicida do arroz
contra Piricularia oryzae

Polioxina (nucleosdeo)

Streptomyces cacaoi

Fungicida de uso
mltiplo

Prumicina (nucelosdeo)

Streptomyces
kagawaensis

Fungicida contra
espcies de Botrytis e
Sclerotinia

Cicloheximida
(aminocido)

Streptomyces griseus

Fungicida para folhas,

txico para animais de
sangue quente e tem
uso na colheita.

Kasugamicina
(aminoglicosdeo)

Streptomyces
kasugaensis

Fungicida para arroz

contra Piricularia oryzae

Validamicina
(aminoglicosdeo)

Streptomyces
hygroscopicus

Fungicida contra
Rhizoctonia

Grupos Microbianos
Produtores de
Antibiticos
Grupo Taxonmico

N de
Antibiticos

Actinomicetas

4200

Fungos

1600

Outras
Bactrias

950

Fonte: Biotecnologia Industrial, V3, 2001.

B
C

A Aspergillus sp; B Bacilos sp.; C Penicillium sp

Classificao
Os antibiticos podem ser classificados
de acordo com:
Espectro antimicrobiano;
Mecanismo de ao;
Cepa produtora;
Forma de biossntese;
Estrutura qumica.

Classificao de acordo com

o Espectro de Ao

Fonte: (Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003)

Classificao de acordo
com o Mecanismo de
Inibidores da sntese da parede celular;
Ao
Penicilinas e celafosporinas.
Inibidores da sntese de DNA e RNA;
Actiomicinas.

Inibidores da sntese de protenas;

Aminoglicosdeos.

Alteradores de permeabilidade da M.
citoplasmtica;
Polimixinas.

Classificao de acordo
com a Estrutura
Qumica

Biotecnologia Industrial, 2005.

Grupo dos Lactmicos

Lbeis em meio cido;
Inativados pela hidrlise do
anel -lactmico com
penicilinase;
Baixa toxicidade;
S 0,5 -2% dos pacientes
desenvolve alergia;

Inibidores da
transpepitidase;
bloqueio da sntese de
parede celular bacteriana
(peptidoglicano).

Fig.: -Lactmicos com anis em

destaque.

Mecanismo de Ao Lactmicos

Fonte: (Adaptado de Atlas, R.M., Principles of Microbiology, 1997)

Efeitos de Antibiticos
-Lactmicos
B

Escherichia coli: [A] morfologia normal

[B] morfologia aps 30 min contato com ceftazidima (celafosporinas)

Classificao de acordo
com a Estrutura
Penicilina
Qumica
Penicillium chrysogenum;

Interfere na sntese da
parede de peptdeoglicano
e leva Lise celular;
Amplo espectro de ao;
DSTs, infeces trato
intestinal e meningite.

Penicilina G e V.
Fig. A Estrutura da penicilina; B Produto comercial base de penicilina.

Classificao de acordo
com
a
Estrutura
Cefalosporinas
Cephalosporium acremonium;
Qumica
A

Antibitico bactericida;

Possui Anel Beta-lactamico;

Controle de Gram(+) e Gram(-)
Cocos e Escherichia coli,
respectivamente.

Interrompem a sntese de
Peptdeoglicano
Causa diarria e nuseas.

Fig.: A Antibitico base de cefalosporina; B Staphylococus aureus

Penicilina

Penicilinas Semisintticas
Mais estveis;
>Resistncia -lactamase;
>Atividade antimicrobiana;
Hidrolisao da Penicilina Natural 6-APA;
Adio de precursores
cidos da cadeia lateral;
Penicilina V, adio c. Fenoxiactico.
Penicilina G, adio c. Fenilactico.

Biossntese e
Regulao
L-cistena
L-valina;
c. -aminoadpico
(-AAA)

Produo da Benzipenicilina a
partir c. Fenilactico
reagindo com c. aminoadpico

Condensao
num tripptido A
(L-- aminoadipil)
cisteinilvalina

O tripptido ciclizado e forma-se a

isopenicilina N
Primeiro composto com atividade microbiana

Biossntese e
Regulao

Inibidores da sntese de penicilina

Lisina, retroinibio da homocitratosintase*
*enzima envolvida na sntese de -AAA.

Concentrao de Fosfato;
Glicose, represso catablica
Prefere-se a lactose para o processo de
fermentao.

Desenvolvimento de
Cepa Fatores
Qualidade da Cepa;
Interferentes
Screening;
Tcnicas recombinao
do DNA.

pH;
Em torno 6,5.

Temperatura;
25 27C.

Oxignio
Aerbios;
Aerbios facultativos.

Agitao;

Fig: Fermentador utilizado para produo

de antibiticos.

Desenvolvimento de
Cepas
Objetivos:
Aumento rendimento
Eficincia na recuperao
do produto;

P. Notatum (Flaming);
1943- P. chrysogenum
NRRL 1951.
Por mutagnese estirpe
WisQ176.

Fig.: Cepas de P. crysogenum

Agentes Mutagnicos
Screening de
mutante;
At anos 60;
Raio x;
Radiaes curto;

Atualmente
Nitritos;
Agentes Alquilantes;
Nitrosoguanidina.

Outros meios de
desenvolvimento de
Fuso de protoplastos;
Cepas
Aumento de rendimento de 8%;
Superior obtido por mutao ou seleo.

Tecnologia de DNA recombinante;

No muito usada em P. chrysogenum.

Mtodos de Produo
Processo submerso de fermentao;
Fermentadores de 40-200mil litros.

Processo aerbico;
Absoro volumtrica de Oxignio de 0,40,8mM/L-min;
Velocidade de aerao requerida entre 0,51,0 vv;

Faixa de temperatura tima de 25-27C.

Fluxograma de
Produo

Mtodos de Produo
O inoculo se inicia utilizando esporos
liofilizados*;
*Manuteno cuidadosa das cepas;
Formao de agregados (Pellets) e
concentrao de esporos;
Etapas de crescimento.

Mtodos de Produo
Fermentao tpica de penicilina
Tempo de crescimento de 40 horas
Tempo de duplicao de 6 horas

Baixa aerao do cultivo em crescimento

critica;
Alimentando o meio com diferentes
componentes a produo se estende por
at 120 160 horas.

Mtodos de Produo
Componentes de um meio de cultura:
Nitrognio ( gua de milho ou farinha de soja);
Carbono (lactose);
Vrios tampes;
pH mantido constante a 6,5.

Adio do precursor;
cido fenilactico;
Produo Penicilina G.

Biomassa g.L-1,
carboidratos, amnio e
penicilina (g.L-1 x 10)

Mtodos de Produo
Fermentao contnua;
Dificultado pela instabilidade das cepas de
produo.

Adoo do sistema enche e retira;

Retira-se 20-40% da fermentao;
Alimenta-se com soluo fresca de nutrientes;
Repete-se esse procedimento por at 10 vezes,
sem reduo do rendimento.

Mtodos de Produo
Teor de penicilina excretada de menos
de 1%;
Se encontra unida ao miclio

Separa-se por filtrao;

Recuperao do produto por meio:
Extrao continua em contracorrente do caldo
de fermentao
Rendimento de 90%

Cefalospo

Biossntese e Regulao
Precursores:
-(-aminoadipil)-l;
Cisteinil-d-valina;
Isopenicilna-n.

Transformao de cadeia lateral;

Formao de penicilina N;
Enzima racemase.

Hidroxilaao controlada por uma dioxigenase

deacetilcefalosporina C;

Biossntese e Regulao
O ponto final da via biosinttica em fungos
dada pela acetilaao da cefalosporina C;
A produo de cefalosporina regulada
pelo fosfato, pelo nitrognio e regulao
catablica do carboidrato;
A adio de lisina a baixas concentraes
favorece a produo de cefalosporina.

Desenvolvimento de
cepas

Realizado com a cepa original de Brotzu,

C. acremonium, utilizando mutao,
seleo e tcnicas parassexuais;
Mutantes reguladores resistentes a
enxofre tem uma produo superior de
cefalosporina;
Recombinao parassexual em
C.
acremonium de difcil acontecimento.

Desenvolvimento de
cepas
Fuso de protoplastos de diferentes
cepas tem um aumento de 40% na
produo de cefalosporina, melhor
crescimento e esporulao;

Processo de Produo
A fermentao da cefalosporina similar a
da penicilina;
Utiliza-se meios como macerado de milho,
extrato de carne, sacarose, glicose e
acetato de amnio;
Processo descontinuo alimentado usado
nas fermentaes, condio semi-continua
de nutrientes.

Processo de Produo
pH de 6 a 7;
Temperaturas entre 24 e 28 C;
Na fase de crescimento necessrio alta
velocidade de aerao;
A sntese qumica de cefalosporina pode
ser feita por expanso do anel da
penicilina;

Bibliografia
BORZANI, W.; LIMA, A,U.; AQUARONE,
E.; SCHMIDELL,W.; Biotecnologia
industrial, vol. 3, p. 101-120. So Paulo,
2001.
http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/anti
bioticos/antibioticos.html. Acessado em
08/11/2011, s 01:31.