Alunas:

Dbora Martins
Filipa Furtado
Helena Orvalho
Ins Correia
Joana Rendas

Equipamentos
utilizados em
experimentao
animal
Memria
(Alzheimer)

Farmacologia II

FFUL 2015

Prof. Doutores:
Cristina Mello-Sampay
Rui Pinto
Joo Rocha
Margarida Estudante

Labirinto Aqutico de Morris

(LAM)
Este teste avalia a capacidade do animal para

a
aquisio de memria espacial, ao medir a latncia para
que o animal localize uma plataforma submersa num
tanque com gua opaca
Consiste:
Tanque circular de fibra de vidro (134
cm de dimetro e 40 cm de altura)
gua a temperatura ambiente de
252C
Dividido em 4 quadrantes
1 dos quadrantes afixado numa plataforma
(NW,SW,NE,SE)
de PVC circular (11 cm de dimetro x19,5 cm
de altura) submersa, com a parte superior
localizada imediatamente abaixo da superfcie
da gua
Farmacologia
|
FFULpara
2015
Coloca-se amido
de II milho
a gua ficar

Nas paredes internas do tanque, acima da gua, nos quatro

quadrantes, esto fixadas figuras sinalizadoras, que podem
ser usadas como pontos de referncia pelos animais
durante os treinos e/ou o teste final

Figura 1.Labirinto aqutico de Morris

O comportamento de cada animal registado por uma

cmara posicionada em cima do aparato que permite a
monitorizao das imagens
numa| sala
adjacente
Farmacologia II
FFUL 2015

Ratinhos

Colocados num dos quadrantes

aleatoriamente escolhidos

90 segundos para encontrar a plataforma submersa

Se no conseguirem so colocados na plataforma pelo
examinador, durante 30 s

Figura 2. Rato colocado sobre a plataforma de LAM

Farmacologia II

FFUL 2015

Treinos:
5 dias consecutivos 3x por dia

30s entre cada

um

Descanso nas gaiolas

durante 4 dias

Realizao do teste de
memria espacial (1 dia,
3x com intervalos 30s
entre cada sesso de
Os animais sero sempre libertados
teste) de pontos de partida
diferentes de forma pseudo aleatria e a plataforma
submersa permanecer na mesma posio (quadrante
Sudeste)
O perodo de latncia do ratinho desde sua colocao na
gua at encontrar a plataforma escondida em cada teste
medido por meio de um cronmetro digital
A cada dia de treino/teste calculada a mdia de latncia
do animal para encontrar a plataforma, a velocidade de
nado e a distncia percorrida
Farmacologia II

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Sesso de
24h aps os treinos
Teste
Ratinhos so libertados para nadar a partir
da posio Norte
Plataforma removida
O tempo de nado gasto
pelos animais no
quadrante onde se
encontrava a plataforma
na sesso de treino (no dia
anterior)

ndice de
Memria

Farmacologia II

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Estudo de alteraes
sinpticas
do
Fatias do
hipocampo
hipocampo
(ratos ee ratinhos)
ratinhos)
(ratos

Extrao
rpida e
fcil
Viabilidad
e (boas
condies)

Tcnicas
bsicas de
eletrofisiolog
ia

Memria

Avaliao da
funo e
plasticidade
sinpticas

Ratos
idosos e
Modelos
AD

Alteraes na induo:
- Potenciao a longo prazo (LT
Ratos - Depresso a longo prazo (LTD

jovens

da eficcia sinptica

- crnios mais espessos descrio do fentipo

- tecido conjuntivo mais neurolgico
resistente de animais
com alteraes
- aumento dos danos no hipocampo
durante
cognitivas
a dissecao

marcadores para deficincias cognitivas

Farmacologia II

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Estudo de alteraes
sinpticas
Protocolo
1.

2.

Preparar Fluido Crebroespinal Oxigenado Artificialmente

(ACSF) arrefecido em gelo para conservao do tecido
cerebral.
Preparar a rea de dissecao e o material necessrio,
incluindo uma guilhotina animal.

Tools and materials used for brain dissection

A, paper towel
B, scalpel blade
C, Beebee scissors
D, bone rongeurs (for rats)
E, bone rongeurs (for mice/rats)
Farmacologia II

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Estudo de alteraes sinpticas

Protocolo (cont.)
3. Eutansia do rato, utilizando mtodos aprovados.
4. Decapitar o rato imediatamente antes da primeira
vrtebra cervical.
5. Fazer rapidamente uma inciso comeando no osso nasal
at ao occipital.
6. Cortar o osso frontal do crnio e separar os ossos do
crebro.
7. Extrair o crebro, cortando os nervos cranianos intactos.
8. Submergir no ACSF.
9. Limpar a rea e descartar a carcaa.
10. Extrair o hipocampo.
11. Seccionar o tecido cerebral em fatias usando um
micrtomo vibratrio.
Farmacologia II

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Estudo de alteraes sinpticas

Protocolo (cont.)
12. Transferir para uma cmara de conservao.

Custom brain slice holding chamber

A, macrochamber
B, lid
C, H 2 O reservoir
D, microchamber
E, ACSF delivery tube

13. Extrair
e
registar
respostas
sinpticas
(estao
de
F, O2 delivery tube
electrofisiologia para estudo
do meio extracelular em fatias
G, port for temperature control
cerebrais, registos patch-clamp
imagiologiainsert
por fluorescncia).
H, nettedemicrochamber
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Estudo de alteraes sinpticas

Farmacologia II

Hippocampal slice illustration

and extracellular waveforms
A, Cartoon of a transverse
hippocampal section used in
electrophysiology experiments.
B, Electrical stimulation of the
Schaffer collaterals.
C, Overlapping representative
extracellular waveforms recorded
in response to nine different
stimulus intensity levels in a
"healthy"
(left
panel),
"unhealthy", and "hyperexcitable"
slice. Healthy slices respond
dynamically across this stimulus
range. Unhealthy slices show
poor plasticity. Hyperexcitable
often labile and
| slices
FFUL 2015are
affected by LTD/LTP stimulation.

Estudo de alteraes sinpticas

Representative electrophysiology experiments performed on acute slices from mid-aged

mice and aged rats
Panels A-B show data collected from mice treated with a control construct or a Reagent A. The slice
treated with Reagent A exhibits a marked leftward shift in the curve (A) indicative of greater
synaptic strength. The Reagent-A-treated slice also shows robust and stable LTP (B) after the
delivery of stimulus, while the control slice exhibits deficient LTP, typical of this animal model.
Panels D-F show data collected from two aged rats that received chronic intrahippocampal
perfusions of vehicle or a Drug A. Basal synaptic strength was relatively unaffected by drug
treatment (D). However, Drug A was very effective at preventing the induction of LTD (E).
II
|
FFUL
2015 from individual slices before (pre)
Panels C and F show representativeFarmacologia
EPSP waveforms
recorded

Labirinto de Barnes

h = 60
cm

Farmacologia II

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Farmacologia II

FFUL 2015

Farmacologia II
|
FFUL 2015

(memria a curto e longo

prazo)

Testes
(4 experimentaes/dia)

Ensaios

Teste da esquiva passiva

Utilizado para avaliar a aprendizagem e
memria em modelos de distrbios do
SNC em roedores;
Os indivduos aprendem a evitar um
ambiente com estmulos negativos

Farmacologia II

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Teste da esquiva passiva

A cmara est dividida em dois
compartimentos, um iluminado e
um escuro, com uma porta entre
eles.

Um dos compartimentos d
pequenos
choques
aos
ratinhos para que estes
aprendam a associar certas
propriedades da cmara a
maus estmulos.
Farmacologia II

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Teste da esquiva passiva

Procedimento:
Dia 1: os animais podem explorar ambos os
compartimentos;
Dia 2: um dos compartimentos d choques;
Depois: os ratinhos so colocados no
compartimento sem estimulo;
Ratinhos com a
memria intacta

No entram no
compartimento
que d choques!
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Teste da esquiva passiva

Desvantag
ens

Vantagens

Procedimento
rpido
o
Memria a curt
e a longo prazo

Ambiente de
stress

Sensvel para
s
ratos e ratinho
No requer
jejum dos
animais

Farmacologia II

a
No distingue
memria
contextual da
memria
emocional

FFUL 2015

Bibliografia

B. Sunyer, S. Patil, H. Hger & G. Lubec - Barnes maze, a

useful task to assess spatial reference memory in the
mice
J.M. Walkera, S.W. Fowlera, D.K. Millera, A.Y. Sunb, G.A.
Weismanc,d, W.G. Woode, G.Y. Sunb,c, A. Simonyic, T.R.
Schachtmana - Spatial learning and memory impairment
and increased locomotion in a transgenic amyloid
precursor protein mouse model of Alzheimers disease

Farmacologia II

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