Receptores Celulares

Ciclo Bsico Noturno

2014

domnio externo

meio
extra-celular

receptor
domnio transmembrnico

meio
intra-celular

domnio interno

Receptores so protenas que interagem com seus ligantes,

ativando vias de sinalizao intracelulares, gerando

efeitos biolgicos.

ligante

vias de sinalizao

receptor
efeitos biolgicos

ncleo

Efeitos Biolgicos:
correspondentes ao tipo celular e natureza do ligante

ligante
extracelular
receptor

intracelular

vias de sinalizao

efeito biolgico

alterao no potencial de membrana

dilatao/contrao celular
estimulao/inibio de expresso gnica
etc....

Vias de Sinalizao
so reaes em cascata no meio intracelular,
que traduzem os sinais extracelulares,
via ativao de segundos mensageiros.

ligante
extracelular
receptor

intracelular

vias de sinalizao
efeito biolgico

Ativao
de segundos mensageiros

Ligantes
so substncias capazes de ativar receptores
e desencadear efeitos biolgicos
Peptdeos, neurotransmissores, aminocidos,
hormnios, drogas, etc..
ligante

extracelular
receptor

intracelular

vias de sinalizao

efeito biolgico

Molcula sinalizadora

TRANSDUO DE
SINAIS

CRESCIMENTO

SOBREVIVNCIA

PROLIFERAO

DIFERENCIAO

MIGRAO

Passos envolvidos na comunicao

clula-clula
(1) Sntese da molcula sinalizadora por uma
clula
(2) Liberao da molcula pela clula sinalizadora
(3) Transporte da molcula sinalizadora para a
clula alvo
(4) Interao da molecla sinalizadora com um
receptor celular na clula alvo
(5) Desencadeamento da sinalizao intracelular
(6) Alterao do metabolismo, funo, expresso
gnica ou desenvolvimento da clula alvo
(7) Remoo do sinal e consequente trmino da
resposta celular

Molculas sinalizadoras podem atuar

localmente ou a distncia
Sinalizao endcrina

Sinalizao parcrina

Vaso sanguneo

Secreo do hormnio
pela glndula endcrina no
vaso sanguneo

Clulas alvo distantes

Sinalizao autcrina

Clula secretora

Clula alvo adjacente

Sinalizao clula-clula
Sinal extracelular
Receptor

Clula sinalizadora
Stios alvos sobre a mesma clula

Clula alvo adjacente

Agentes sinalizadores
1. Peptdeos e protenas (insulina e
PDGF)
2. Esterides (estradiol, testosterona)
3. Gases solveis (NO, CO)
4. Nucleotdeos, retinides, derivados
de cidos graxos
5. Luz

Receptores Celulares
Existem 4 modelos estruturais propostos de protenas receptoras:

1 Receptores Intracelulares
2 Receptores acoplados Protena G
3 Receptores com e sem Atividade Enzimtica
4 Receptores do tipo Canal Inico

Natureza das molculas sinalizadoras

Receptores de superfcie
receptor

m. plasmtica

Hidroflicas

Molcula
hidroflica

Receptores intracelulares
Molcula
hidrofbica
carreador

Receptor intracelular

ncleo

Hidrofbicas

Hormnios esterides e seus receptores intracelulares

citoplasma

DT

DL
inibidor

DNA
Ncleo

RECEPTORES ACOPLADOS A PROTENA G

(GPCR)
Funes Biolgicas dos GPCRs
1. Odor e paladar
2. Percepo da luz
3. Neurotransmissores
4. Funes endcrinas
5. Quimiotaxia
6. Exocitose
7. Controle da presso arterial
8. Embriognese
9. Crescimento e diferenciao celulares
10. Oncognese

 Metade de todas as drogas conhecidas utilizam

como alvo os GPCRs

O projeto genoma revelou um vasto nmero de

novos GPCRs (receptores orfos - possveis
alvos para novas drogas)

Receptores acoplado a protena G (GPCR)

Porcentagem
Estimada
No genma

extracelular

intracelular
Domnios de
interao
com a protena G

A classe mais numerosa de receptores superfcie (fungos - mamferos)

Mamferos: clulas olfatrias usam de 500 a 1000 diferentes GPCrs
e outras clulas usam outros 500 diferentes tipos de GPCRs para responder a
diversos estmulos

Protena G trimrica

Diferentes tipos de subunidades G

M. Plasmtica

Protena G

Mecanismo de ativao
dos GPCRs

GPCR
Molcula
Sinalizadora
Espao
extracelular

citosol

Protena G ativada

Subunidade

ativada

Protena alvo
Subunidade
ativada

Ativao da protena alvo

Pela subunidade

inativao

Reconstituio da
protena G trimrica

Protena alvo inativa

subunidades Gapresenta atividade

GTPsica = so capazes de hidrolizar
GTP em GDP

Enzima ativada

Subunidade
ativada

Substrato

Sntese de molculas mensageiras que atuam

em protenas alvo intracelulares

Enzima
substratos

Segundos
mensageiros

Protena G pode ativar ativa canais inicos

Canal de K+

Substratos alvos ativados pelos

GPCRs
Os maiores segundo
mensageiros produzidos a
partir da ativao dos GPCRs:

cAMP
CanaldeK+

PLC
IP3DAG
Ca2+PKC

Adenilato
ciclase
cAMP
PKA

Inositol trifosfato
(IP3)
Diacilglicerol (DAG)

Mecanismo de ativao
da Adenilato-ciclase por GPCRs

Molcula
sinalizadora

Adenilato-ciclase
ativada

Mecanismo de ativao
da Adenilato-ciclase

receptor
Subunidade
ativada

AMP cclico

Protena quinase A
(PKA) inativa

Protena quinase A
(PKA) ativa

Poro nuclear

Fosforila e ativa o fator de

transcrio CREB que regula
a expreso gnica

Protena quinase A
(PKA) ativa

CREB inativo

Gene alvo ativado

Transcrio
Traduo
Nova protina

AMPcclicoPKAestimulaaquebradeglicognio
masinibeasuasntese
Aumento do AMPc
Estimulao da quebra de
glicognio

Inibio da sntese de
glicognio

Enzimas fosfodiesterase
catalizam:

NH2

cAMP

AMPc + H2O AMP

A fosfodiesterase que cliva o

AMPc ativada pela PKA
Assim, o AMPc estimula a sua
prpria degradao levando a
uma rpida dimuio do sinal
gerado pelo AMPc

N
H2
5' C 4'
O
O

O
H

H 3'
P
O
O-

1'

2' H

OH

GPCR

PKA = protena quinase A

GPK = quinase glicognio fosforilase
GP = glicognio fosforilase
GS = glicognio sintase

adrenalina

Gs

= ativao
= inibio da
ativao

Adenilato-ciclase
AMPc
Fosfodiesterase
de
AMPc

GPK

Quebra do glicognio
P

GP

Glucose 1- fosfato

PKA
P

GS

citoplasma
Ncleo

CREB
Transcrio gnica

Inibio da sntese de glicognio

Algumas Respostas celulares mediadas pelo

AMP cclico

Molcula sinalizadora

Tecido-alvo

Resposta principal

Adrenalina

cardaco

Aumento da taxa e fora

de contrao cardaca

Adrenalina

muscular

Degradao de glicognio

ACTH e glucagon

adiposo

Degradao de gordura

ControledaativaodaAdenilatociclase
dependedaclassedeprotenaGtrimricaativada

Hormnio
estimulatrio

Hormnios
inibitrios

Adenilato
ciclase

Receptor
-adrenrgico

Receptor
-adrenrgico
Complexo G
estimulatrio

Complexo G
inibitrio

Efeito de exotoxinas bacterianas sobre a ativao

dos GPCRs
Toxina do clera

Interage com resduos de arginina de Gs

e inibe a sua atividade GTPsica trancando
Gs no seu estado ativo

Toxina pertussis

Interage com resduos de cistena de Gi

impedindo a sua interao com GPCR
permanecendo no estado inativo

Mecanismo de ativao da Fosfolipase C

atravs da ativao do GPCR

Mecanismo de ativao da fosfolipase C

Molcula sinalizadora
GPCR

fosfatidil inositol
bi-fosfato
Fosfolipase C-
(PIP2)

diacilglicerol

subunidade G
ativada

inositol tri-fosfato

Lmem do reticulo
endoplasmtico

protena quinase
C
(PKC)

Canal de Ca+2

calmodulina

Inativa

ativa

Ca/calmodulina
Quinase
ativa

Mecanismo de ativao da Calmodulina quinase (CaM-quinase)

Domnio inibitrio
Protena fosfatase

Inativa
Domnio
cataltico

calmodulina

Ca+2/calmodulina

Auto-fosforilao

Ativao
total

Ativa

GPCR
Fosfolipase C
IP3

DAG
PKC

Ca

+2

Calmodulina
Proliferao celular
Calmodulina
Quinase
CaM-quinase abundante nas sinapses
Importantes para a memria

Sinalizao induzida pela luz em clulas

Fotorreceptoras bastonadas da retina

Bastonete da retina

Luz

citosol
Disco
lmem

Fosfodiesterase
inativa

Fosfodiesterase
ativa

Membrana
plasmtica
dos
bastonetes

rodopsina
Diminui a conc.
De GMPc
Fechamento do canal inico
aumenta a conc. Adaptada ao escuro
de GMPc

abertura do canal inico

Principais classes de protena G trimrica

e seus efetores
Classe da
protena G

Efetor alvo

2 mensageiro

Ex. de receptores

Gs

Adenilato-ciclase

AMPc (aumento)

Receptor -adrenrgico,
Receptor para glucagon,
serotonina, vasopressina

Gi

Adenilato-ciclase

AMPc (diminuio)

Receptor -adrenrgico,
receptor acetilcolina

Canal de K+
AMPc (aumento)

Receptores de olfato

Golf
Gq
Gt

Adenilato-ciclase
Fosfolipase C
GMPc
fosfodiesterase

IP3 e DAG
(aumento)
GMPc (diminuio)

Receptores 2adrenrgico
Rodopsina (receptores
de luz)

NO signaling
The Nobel Prize in
Physiology or
Medicine 1998
"for their discoveries concerning nitric oxide as a signalling
molecule in the cardiovascular system"

Robert F.
Furchgott

Louis J.
Ignarro

Ferid Murad

USA

USA

USA

SUNY Health
Science Center
Brooklyn, NY,
USA

UCLA School of
Medicine
Los Angeles, CA,
USA

University of Texas,
Health Science
Center
Dallas, TX, USA

1916 -

1941 -

1936 -

 xido ntrico (NO)

-

Diversas

atividades

biolgicas

(funciona

como

mensageiro)
NO sintases (NOS)

Arginina
+
O2

NOS 1 ou NOS neuronal

NOS 2 ou NOS endotelial
NOS 3 ou NOS induzida

NOS
(nNOS, eNOS, iNOS)

Citrulina

NO

Ca+2

segundo

Lmem do vaso
sanguneo

acetilcolina
GPCR

Fosfolipase C

Clulas
endoteliais

Clulas da musculatura lisa

Relaxamento da
musculatura lisa

Estimulao
sexual

Guanilato
ciclase

Relaxamento
da
musculatura lisa

fosfodiesterase
Ereo

NO
Guanilato ciclase
GMP
GTP

GMP cclico

GMPc
Fosfodiesterase

PKG

Relaxamento da
musculatura lisa

1 - Receptores com atividade quinase intrnsica

Receptores tirosina quinase (RTK)
(Receptores de fatores de crescimento)

Receptores serina/treonina quinase

(Receptores da famlia TGF-)

2- Receptores sem atividade enzimtica

(Receptores de citocinas)

Evoluo e diversidade dos RTK

RTK so encontrados em organismos to primitivos como
porferos (Geodia cydonium) e cnidrios (Hydra vulgaris)

Porferos

Geodia cydonium

Cnidrios

Hydra vulgaris

eumetazoa
Parazoa
700 milhes

Receptores tirosina quinase

Mecanismo de ativao dos Receptores Tirosina Quinase

Monmeros
inativos

Dimerizao

trans-fosforilao

pY

pY

pY

pY

pY

pY

Domnio cataltico

Conformao do loop de ativao dos RTK

e mecanismo de autofosforilao

Hubbard, Stevan R. 1997

Ligante estabiliza a formao de dmeros ativos

Ligante estabiliza a formao de dmeros ativos

PPP-

-P
-P
-P

Transduo do sinal

PPP-

-P
-P
-P

?
COMO O SINAL TRANSDUZIDO APS A
FOSFORILAO DO RECEPTOR?

P-

-P P

P-

-P

P-

-P

Amplificao do sinal

COMO ESSAS PROTENAS INTERAGEM COM

O RECEPTOR ATIVADO?

P-Ty

Ty

-P

P-Ty

Ty

-P

SH2
Reconhecem resduos de tirosina fosforilada

Domnios SH2 so mdulos compactos (~100 a.a)

Quinase Src

Vrus do sarcoma avirio

Domnios SH2 so encontrados em um grande

nmero de protenas envolvidas em sinalizao

SH2

Quinases
Protenas adaptadoras
Protenas do citoesqueleto
Fatores de transcrio

SH2
Cada domnio SH2 reconhece fosfotirosinas no
contexto dos a.a que ladeiam o resduo fosforilado
(1-6 a.a C-terminal)
SH2

NH2 -pTy-X-X-Z-B-S-T- COOH

ESPECIFICIDADE

Domnios proteicos em transduo de sinais

SH2

PH

1-6 aa
NH2-pTy-X-X-Z-B-S-T-COOH

SH3
-P-X-X-P-XReconhecem protenas ricas
no aa prolina

Fosfolipdeo
PIP3

14-3-3
-R-S-X-pS-X-PSerina fosforilada

...

enzimas
adaptadores
Proteinas
plataforma
Fatores de
transcrio
Protenas do
citoesqueleto

Sinalizao Ras-ERK/MAPK
Protenas Ras so membros de uma superfamlia de
proteinas G de baixo peso molecular
Esto ancoradas na membrana plasmtica atravs de
ncoras lipdicas
So reguladas por fatores de troca de guanina (FTGs) e
por protenas ativadoras de GTPases (PAGs)

Pi

Ras GDP

PAG acelera a
atividade basal
GTPse
de Ras
H2O

FTG promove a
dissociao de GDP
GTP se liga
espontnemamente

Ras GTP

GAP Ras
PPP-

Raf

GDP
GDP

-P
-P
-P

GTP

GRB2

MEK -P

SOS
ERK -P

P- ELK1
Proliferao
Sobrevivncia
Diferenciao

PIP2
PIP3
PPP-

-P
-P
-P

PI3K

BAD

IKK

PDK1

FRKH

Controlam a sobrevivncia celular

AKT

PIP3
PIP2
PPP-

PIP2

-P PI3K
-P
-P

PTEN

PIP2

Receptores serina/treonina quinase

Receptores de TGF-
Crescimento
Diferenciao
Sobrevivncia
Desenvolvimento

Mecanismo de ativao do receptor TGF

Receptor do tipo II

Receptor do tipo I

quinase

quinase

quinase

FKBP12 FKBP12
-P
Smad-R

PPP
Smad-R Smad-4

Receptores que no apresentam

atividade quinase intrnsica

Olli Silvennoinen, 2004

JA
K
JA
JAK K

Stat
P- P-

Stat

P
P

Stat
Stat

-P-PStat

P
P

Stat

K
JA

K
JA JAK

P
P

Stat

Stat

Mecanismos de inibio da ativao

1- Ligao de antagonistas
SPITZ
Se liga ao receptor mas
no induz a sua ativao

EGFR
PP-

-P
-P

ARGOS

3- Desfosforilao

(Fosfatases )

PP-

-P
-P

Protenas fosfatases desfosforilam o

Receptor inibindo a transduo do sinal

4- Inibio por endocitose

P
P

P
P

Aps a sua ativao, receptores podem

ser endocitados e degradados nos
lisossomos

5- Degradao por ubiquitinao

-UB
PP-

-P
-P
Proteosoma

Receptor TGF-

quinase

-P

quinase

Hepatcitos

Smad-R Smad-4

APOPTOSE

Hepatcitos
Receptor TGF-

Receptor de insulina

PIP2
PIP3
PPP-

quinase

quinase

-P

Smad-R

-P
-P
-P

PI3K

Inibio da apoptose
Smad-4

PDK1

AKT

Mecanismos de ativao
e inibio
Receptores

Transduo do sinal

1. Receptores tirosina quinase

2. Receptor serina/treonina quinase
3. Receptores sem atividade quinase
intrnsica

Domnios de reconhecimento

Como as clulas usam esse repertrio de vias de

sinalizao conhecidas para transduzir respostas
biolgicas especficas

1.

O que determina o mecanismo de ao dos receptores?

A ligao do ligante especfico ao stio de interao do receptor

2. Cite os diferentes tipos de receptores de superfcie. Como se caracterizam estas molculas?
Podem ser do tipo GPCR, com atividade quinase, sem atividade quinase, receptores canais e receptores
intracelulares. Receptores so protenas especializadas, que reconhecem ligantes de forma especfica.
Uma vez que os receptores de membrana so protenas intrnsecas (inseridas na estrutura da
membrana), eles apresentam trs domnios (regies) estruturais distintos: um domnio extracelular,
capaz de reconhecer os diferentes ligantes, um domnio transmembrana e um domnio citoplasmtico,
que na maioria das vezes executa uma funo sinalizadora para o interior celular, liberando segundomensageiros (substncias que vo traduzir a ordem dada pelo primeiro-mensageiro ou ligante.
3. Ligantes podem atravessar a membrana citoplasmtica?
Sim, desde que sua estrutura seja permevel membrana celular e que seu alvo de interao (receptor)
esteja localizado no interior da clula (citoplasma ou ncleo)
4. A insulina pode ativar receptores? Qual a sua funo
Sim, a insulina ativa o receptor de insulina levando a sua autofosforilao e ativao de uma via de
sinalizao intracelular que induz o transporte do carreador de glicose para a membrana para posterior
captao da glicose.
5. Alguns hormnios conseguem atravessar a membrana?
Sim, desde que sejam molculas pequenas, hidrofbicas e lipossolveis.

6. Explique a ao nuclear decorrente da ativao de receptores hormonais.

Os receptores hormonais so na sua maioria intracelulares e funcionam como fatores de transcrio
responsveis pela ativao gnica. Em geral, na ausncia do hormnio (ligante), o receptor encontra-se inativo
devido a interao com uma protena inibitria que impede a interao do receptor com o DNA. A entrada e
ligao do hormnio ao receptor intracelular, induz uma mudana conformacional no receptor que dissocia a
protena inibitria permitindo a ligao do receptor ao DNA levando a expresso gnica e conseqente sntese
protica.
7. Em receptores acoplados protena G, o que faz com que a subunidade ative a unidade efetora?
A subunidade alfa ativada pela dissociao das subunidades beta e gama que constituem a protena G
trimrica. A ativao da subunidade alfa-GDP induzida pela troca de GDP por GTP

em conseqncia da

interao da subunidade alfa com o receptor GPCR ativado.

8. O mesmo ligante pode ter diferentes aes em diferentes clulas? Justifique.
Sim, isso vai depender da concentrao do ligante, do nvel de expresso do receptor na clula alvo, bem como
da expresso de componentes intracelulares de sinalizao ativados aps a interao ligante-receptor. Alm
disso, alguns ligantes podem ter afinidade por mais de um tipo de receptor que podem desencadear diferentes
vias de sinalizao podendo levar a diferentes efeitos biolgicos finais.
9. O que so vias sinalizadoras?
So componentes intracelulares (protenas e segundos mensageiros) que levam a ativao em cascata de
protenas regulam diversas funes celulares tnto ao nvel citoplasmtico como nuclear, regulando o
metabolismo, expresso gnica, etc.
10. O que uma quinase e qual a sua relao com o ATP?
As protenas quinases (PK) so enzimas que catalisam a fosforilao de protenas por meio da transferncia de
um grupo fosfato de ATP para resduos de tirosina (Tyr), treonina (Thr) ou serina (Ser). As protenas quinases
compem a maior famlia de protenas nos seres eucariontes e um componente fundamental da cascata de