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Estudios preliminares de la formacin de

complejos insolubles entre pectinasa de A.


1*
1
1 2**
niger
y
alginato
Pablo, Faccendini ; Gonzalo, Tulin ; Diana, Romanini
.

1 rea Fsico-Qumica -Dto Qumico-Fsica - Facultad Cs. Bioq. y Farm. - Universidad Nacional de
Rosario (U.N.R.)
2 Instituto de Procesos Biotecnolgicos y Qumicos Rosario (IPROByQ) CONICET- U.N.R.
*
pablo_faccendini@yahoo.com.ar
**
dianaromanini@hotmail.com
Introduccin
Las pectinasas son un conjunto de enzimas que
catalizan la degradacin de sustancias pcticas de la
pared celular de las plantas. Se utilizan en las industrias
alimenticias para clarificar jugos de frutas, vinos,
vinagres, jarabes y gelatinas. La poligalacturonasa (PG),
EC 3.2.1.15, cataliza la hidrolisis del enlace 1-4 del
cido poligalacturnico para producir poligalacturonatos
de menor peso molecular [1].
La formacin de complejos insolubles entre protenas y
polmeros inicos de cadena flexible (PE) ha surgido
como una alternativa a aplicarse en distintas reas de la
biotecnologa con el fin de contribuir a la industria en la
purificacin de protenas o en la inmovilizacin de
enzimas en biorreactores [2], entre otras aplicaciones.
La interaccin entre una protena y un PE de carga
opuesta depende de las condiciones del medio como pH,
temperatura, fuerza inica y por la relacin molar
ptima de la protena y el PE. Cambiando las
condiciones del medio como el pH se puede redisolver el
complejo y disociar el PE de la enzima de inters [3].

0,7

ptima de
precipitacin fue 0,375 milimoles de
PG por gramo de ALG. El complejo
enzima-polmero es insoluble en el
rango
de pH 1,85 a 5,60 y
0,8

0,6

Abs 420 nm

Resultados
discusin
La
relacin
molar

Abs 420 nm

0,6

0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0

0,4

El objetivo de este trabajo fue analizar las variables


fisicoqumicas del medio que conducen a la formacin
de complejos insolubles entre PG y el alginato (ALG) de
sodio como punto de partida del diseo de una
estrategia bioseparativa de dicha enzima a partir de
cultivos de Aspergillus niger.

Materiales y mtodos
Los diagramas de solubilidad de los complejos PG/ALG
y de cintica de formacin se realizaron midiendo
absorbancia a 420nm.
La precipitacin del complejo se realiz mezclando
alcuotas de ambas especies a diferentes relaciones
entorno a la ptima.
Las
actividades
enzimticas
se
determinaron
cuantificando azcares reductores con el reactivo de
DNS [4]. La reaccin enzimtica se llevo adelante a 40
C durante 15 min utilizando pectina al 1% en citrato
50 mM pH= 4,2. La unidad enzimtica se defini como
la cantidad de enzima
produce
1 mol de
de extremo
Laque
mejor
recuperacin
reductor por minuto. actividad en el precipitado se
consigui utilizando ALG al
0,004% m/V, PG de 0,19 mg/mL
en solucin tampn HAc/NaAc 50
mM, de pH=3,00; el pH de
20 C
30 C
redisolucin ptimo fue 6,00. El
40 C
porcentaje de actividad
recuperada fue del 50% a
temperatura ambiente.
200
300
400
500
Tiempo (s)

0,2

0,0
0

20

40

60

80

100

120

140

Cintica de formacin de los


complejos PG/ALG, a 20 C el
complejo
madura
a
los
120
segundos.
PG

Volumen acumulado ALG 0,1% m/V (L)

0,8

T =20
C pH
=3,0

AL
G

0,6

Abs 420 nm

100

Objetivo

PG
T =20
C pH
=3,0

0,4

0,2

PG/AL
G

PG
T =20
C pH
=6,0

Pectina 1
%
pH 4,2
T =40 C
15 min

DNS
T =100
C
10 min

0,0
1

pH

Conclusiones
Los resultados obtenidos han demostrado que la
formacin del complejo insoluble entre la PG y ALG
involucra un alto nmero de molculas de enzima
unidas por molcula de polmero, lo que hace a esta
metodologa una estrategia apta para la purificacin de
PG a partir de un cultivo de A. Nger con bajo impacto

Bibliografa
[1] D. Biscaro Pedrolli, A. Costa Monteiro, E. Gomes, E. Cano
Carmona. The Open Biotechnology Journal, 3 (2009) 9-18.
[2] A. Lali, N. Aruna , J. Roshnnie , T. Devika. Proc. Biochem. 35
(2000) 777-785.
[3] J. Breccia, B. Mattiasson, F. Sieriz. J Biotech 61 (1998) 219-223
[4]presente
G. L. Miller.
Analytical
Chemistry.
31(3)
(1959)
426-428
El
trabajo
se realiz
en el marco
del
proyecto
de
investigacin Desarrollo de mtodos de obtencin de enzimas que
combinan metodologias novedosas aplicables a escala industrial"

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