Benemrita Universidad

Autnoma de Puebla
GENTICA MICROBIANA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
TEMA: Vehculos de Clonacin

ndice
Definicin de ADN
recombinante
Clonacin Gentica
Vectores de
clonacin

Definicin de ADN
recombinante
Es una molcula de ADN formada por la
unin de dos molculas de diferente
origen.

unin in vitro de
ADN

Dos organismos diferentes

que no se encuentran juntos

Introducir
ADN
recombinan
te

Modificaci
n gentica

Adicin de
un nuevo
AND

Modificaci
n de rasgos
existentes

LINEARICE
N LOS
VECTORE
S

ADN
RECOMBINA
NTE

MULTIPLICA
RSE
HERRAMIENT
AS

ADN
cromosmic
o

COPIA DE
PLSMIDO
RECOMBINANTE

BACTERI
A

DIVISIN Y
FORMACIN DE
UN CLON

APLICACIONES

Ind
ba ustria
c
aelim teria alim
: s en s pa ent
a
c
i
ari
tic
ra
m
u
a:
i
q
p
o
y
s
r
o
.
a
c
du se u
i
r
i
t
c
u
cir
san
du
c
o
a
r
c
m
p
olo
el
far
ra
a
a
a
n
a
r
i
i
ran
p
l
a
r
u
s
p
s
st
a
i
s
n
u
r
i
tes

d
e
r
o
t
l
e
In
c
t
p
a
n
i
b
m

e
e
usan ncias d o por ej
a
sust re, com
b
ho m

Agricultura y ganadera: produccin

de plantas y animales transgnicos.

Med
i
mol cina: t

e cu
lar y cnicas
de d
tera
ia
pi a
gn gnosti
ica.
co

CLONACIN GENTICA
Tipos de clonacin

Clonacin molecular
Clonacin celular
Clonacin de
organismos
Clonacin de
organismos de
manera artificial

CLONACIN
Es el procedimiento de obtener una poblacin de varios individuos
genticamente homogneos a partir de uno solo mediante
reproduccin asexuada.

Extraer
una parte
del AND
Mtodo
mas
conocido
Clonaci
n
molecul
ar

Instarlo
donde
sea
convenie
nte

clonacin

fragmentaci
n

ligacin

seleccin

Transfecci
n

De una
sola clula
se forma
una cierta
poblacin

Clonaci
n
celular
Agente
mutagnic
o

Su uso a
partir de
aros o
cilindros de
clonacin

Clonacin
de
organismo
s

Caracterst
ica
fundament
al

Reproducci
n
asexuada

amebas

Misma
informaci
n gentica

Se produce
una copia
de un
organismo
ya
existente

CLONACIN DE ORGANISMOS DE MANERA

ARTIFICIAL
encontramos don tipos de clulas las cuales participan
activamente en la clonacin de manera artificial
La primera de ellas es la que dona su
material gentico (ADN)

la segunda es
la que lo recibe

Se basa en que el citoplasma del ovocito receptor tenga las cualidades

necesarias para reorientar el control gentico de la clula donadora
para poder crear el nuevo organismo.

electrochoques se
fusionan
ambas clulas

son los encargados de

incitar al desarrollo de
la
nueva clula formada

injertada en el tero de la
hembra donde se le
permite un ambiente apto
para su crecimiento.

VECTORES DE
CLONACIN
Plsmidos
Fagos
Csmidos
BAC
PAC
YAC

Vectores de clonacin

Aquellos que permiten mantener el

ADN exgeno en la clula
hospedadora.
especificidad de la clula husped

DIFIEREN

tamao de los insertos que pueden transportar

nmero de copias que producen

nmero y tipo de genes marcadores

que contienen

PLSMIDOS
primeros
primeros
vectores que
vectores
que se
se
desarrollaron
desarrollaron

proceden
proceden de
de
molculas de
molculas
de
ADN
ADN de
de doble
doble
cadena
cadena
extracromosmic
extracromosmic
as
as

pBR322,
pBR322, pUC18,
pUC18,
pBluescript
pBluescript

CARACTERISTIC
AS

Portan
Portan
fragmentos
fragmentos
pequeos
pequeos de
de
ADN
ADN pasajero,
pasajero, de
de
entre
entre 0,1
0,1 y
y8
8 kb
kb

se
se replican
replican
autnomamente
autnomamente
dentro
dentro de
de las
las
clulas
clulas
bacterianas
bacterianas

Tienen un origen de replicacin (ORI).

Se sirven de las enzimas de la clula

bacteriana para replicarse, pero
contienen genes reguladores de la
replicacin
Pueden transferirse por conjugacin
de una bacteria a otra, puesto que
poseen genes tra (transferencia) y
genes mob (movilidad)
stos no estn presentes en los
plsmidos usados como vectores,
pues no interesa que se transfieran
de una clula a otra

primer plsmido utilizado en biotecnolog

Diseado en 1977 por Bolvar

y Rodrguez
un gen de resistencia a la
ampicilina (ampr)
y otro de resistencia a la
tetraciclina (tetr)

Dianas de restriccin:
EcoRI, PstI y BamHI

Fagos
Bacterifago O Fago lambda
Se conoce la secuencia completa de
sus
48.502 pares de nucletidos y la
funcin de
sus genes
El tercio central del cromosoma
contiene genes que son requeridos
para la
lisogenia

virus complejo de ADN lineal bicatenari

ciclo ltico

Parte central (de aproximadamente15

kb) del cromosoma puede ser cortada
con enzimas de restriccin y
substituida por un fragmento de ADN
forneo

Molcula resultante de ADN

recombinante puede ser
empaquetada en las cabezas del fago
in vitro.

ciclo lisognico

virus se inserta en un
punto
concreto del genoma
de la
bacteria.

virus se replica
cuando lo
hace la bacteria
su genoma a las
rplicas de
E. coli.
ciclo ltico
se producen
partculas
virales

Bacteria hospedadora
es
lisada

liberadas al medio

Genoma
Genoma
del
del fago
fago
lambda
lambda

Cpside
slo hay
hueco para
50 kb,

Cartografia
do y
secuenciad
o
completam
ente

Eliminar
partes no
tiles del
genoma

Vector

Introducir
el ADN
exgeno

ADN vrico

ADN pasajero

Dos tipos de vectores

vectores de insercin

vectores de sustitucin

vector de insercin gt10

vectores de sustitucin

Dos sitios de restriccin

se sustituye toda la regin

prescindible del genoma del fago por
el ADN de inters
molculas exgenas de
mayor tamao (de hasta
20-25 kb).

Flanquean el segmento de
ADN que es sustituido por el
ADN que se va a clonar.

Genoma del fago

enzima de restriccin

Tres fragmentos

brazo izquierdo, brazo derecho y regin stuffer

Permiten la introduccin de insertos

de ADN de hasta 45 kb

Csmidos
un
plsmido

segmentos del genoma de un

bacterifago como el fago

U CONTIENE UN CSMID
plsmido

El origen de replicacin y genes

marcadores de resistencia a
antibiticos

Gen lacZ

Orgenes de
replicacin para
fagos como el
M13

Fago

Extremos Cos

Emplean para la recircularizacin del mismo

SuperCos
Dos sitios cos, entre los cuales se
sita la diana de restriccin Xba I
Un origen de replicacin (ori).
Un sitio de clonaje mltiple (MCS), es un
polylinker que no interrumpe ningn
gen marcador, incluye la diana de
restriccin BamH I.
Dos genes marcadores: uno de
resistencia a ampicilina y otro de
resistencia a neomicina
SV40 ori: origen de replicacin del
virus animal SV40, usado para
replicar el vector cuando se introduce
en clulas animales.

MO SE PRODUCEN LOS CSMIDOS RECOMBINAN

Enzima de
restriccin
BamHI
Evita que
el
plsmido
se
circularice
de nuevo

Cortar el
vector y
linealizarl
o

Extremos
5' OH

Emplea la
enzima
fosfatasa
alcalina
Hidroliza
los grupos
P de los
extremos
5'

BAC

cromosoma artificial bacteriano

Usado para clonar fragmentos de ADN de

300 kb de tamao medio

BA
C
PAC
s

BA
Cs

BAC
Plsmido factor-F

Genes

(factor de fertilidad)

Escherichia coli
oriS: origen de replicacin

rep: control de la
replicacin del
plsmido
parA, parB, parC: genes implicados
en el mantenimiento de un nmero
bajo de copias (1 o 2) del plsmido en
la bacteria.

Integrarse en el
cromosoma bacteriano y
es responsable de la
conjugacin bacteriana.

No proceden del factor-F

sitio reconocido
por la enzima
recombinasa,
permite linealizar
el vector

Minigen lacZ con un polylinker (MCS)

en su interior.

gen de resistencia
al cloranfenicol

PAC
Cromosomas artificiales
bacterianos derivados del fago P1
Alojan menos cantidad de ADN
pasajero
permiten el
empaquetamient
o in vitro

Intervienen en la
circularizacin del
vector

Un origen de replicacin

Gen marcador
de resistencia a
la canamicina

Gen marcador sac

implicado en el
metabolismo de la
sacarosa

sitio de clonaje mltiple

YAC
mayor capacidad (hasta 2 Mb)

son ms inestables

cromosoma
artificial de
levaduras

Son utilizados en construccin de

genotecas genmicas

ADN que se inserta puede

proceder de dos regiones
distintas del genoma

Origen de replicacin (ori) de tipo plasmdic

BACTERIAS
Gen marcador de resistencia a
ampicilina (ampr).
CARACTERISTI
CAS
Secuencia de replicacin de levaduras (SRA).
TRP
LEVADURA

Genes
marcadores de
seleccin

metabolismo
URA

Gen marcador de insercin sup

adenina

Centrmero permite la segregacin

durante la divisin celular

Dos secuencias
telomricas (TEL),
procedentes de un ciliado
del gnero Tetrahymena