R EA C C I N EN C A D EN A D E

LA P O LIM ER A S A
(P C R )

 1980

nico procedimiento para

amplificacin :
clonacin gnica.

En 1983 Kary Mullis de Cetus Corporation

Nueva tcnica para

amplificar ADN en un tubo de ensayo

PCR: Permite amplificar los fragmento de

ADN miles de millones de veces en el
transcurso de unas pocas horas.
Pueden utilizarse cantidades pequeas o una

sola molcula

BaseReplicacin
Molcula
de PCR depor
ADN
ADN polimerasa

 Cada una de las dos cadenas de

nucletidos pueden servir de molde.

La cantidad de ADN se
duplica con cada replicacin.
Inicio de sntesis en el molde es

determinado por los cebadores:

Fragmentos cortos de ADN (17-25
nucletidos) complementarios al molde.
Cebador diferente para cada cadena.

 Con cada ciclo, la cantidad de ADN

objetivo se duplica; de modo que ste

aumenta en forma geomtrica:

Facilitacin
ADNCambios
polimerasa
de PCR
de temperatura
estable a
rpidos

A ctualm ente PCR se utiliza en lugar de clonacin,

pero tiene lim itaciones:
1

A N LIS IS D E LA S
S EC U EN C IA S D E A D N

Secuenciacin delAD N .
Consiste en determinar la secuencia

de bases en el ADN.
Permite leer la informacin gentica

en el ADN
informacin
acerca de funcin
y estructura
del gen

H ibridacin in situ

Las sondas de ADN pueden

utilizarse para determinar la
ubicacin cromosmica de un
gen o la localizacin celular de
un ARNm

 El ADN o ARN se visualiza mientras esta

en la clula.

 Actualmente sondas unidas a colorantes

fluorescentes que se observan por

microscopa.
Es posible utilizar simultneamente varias

sondas de colores distintos para secuencias o

cromosomas distintos.
Tambin puede utilizarse para determinar la

distribucin en los tejidos de ARNm

Cmo la expresin del gen
vara
segn el tipo celular

Footprinting delAD N

Determina las secuencias

de ADN importantes que
sirven para la fi jacin de
protenas.

 La posicin del

footprinting
identifica los
nucletidos
fijados por la
protena.

M utagnesis
Mutagnesis dirigida:
Proceso para estudiar la funcin
del gen creando mutaciones en
localizaciones especficas para
poder estudiar los efectos de las
mutaciones en el organismo.

 La secuencia cortada es reem plazada por un

oligonucletido con secuencia m utada.
Elxito depende de sitios de restriccin que
fl
anquean secuencia por ser alterada.

MUTAGENESIS
DIRIGIDA POR
UN
OLIGONUCLEOTI
DO

M apeo G nico
Se utilizan marcadores genticos.
Un grupo de marcadores analiza:
Polimorfismo
Polimorfismo de
de longitud
longitud de
de fragmentos
fragmentos de
de
restriccin
restriccin (RFLP).
(RFLP).

Son las variaciones en los fragmentos producidos

cuando las mol de ADN son cortadas con la misma
enzima de restriccin.

Base: uso de
diferencias
genticas que
producen diferencias
fenotpicas
observables

La mayora de los
rasgos
estn influidos por
ambiente
y genes
mltiples.

Rasgos con base

gentica para el
uso de mapeo es
limitado.

Fingerprinting delAD N

(huellas

delAD N )
Es el uso de secuencias de ADN
para identificar a personas
individuales
Algunas partes del genomas son muy
variables
cada secuencia del ADN
de una persona es nica

En las prim era tcnicas se utilizaban enzim as

de restriccin:

 Las sondas detectan regiones muy

variables por lo que la posibilidad de

que el ADN de dos personas
produzcan el mismo patrn de
bandas es bajo.
Actualmente utilizan secuencias de

ADN llamadas:
Microsatlites o nmero variable de
repeticiones en tndem (VNTR)