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MECANISMOS

REGULADORES Y
FERMENTACIONES
INDUSTRIALES
I.
II.
III.
IV.
V.
VI.
VII.

REGULACION Y COORDINACION DEL METABOLISMO


MICROBIANO
INDUCCION
REGULACION CATABOLICA
REGULACION POR RETROALIMENTACION
REGULACION DE LA SINTESIS DE RNA POR
AMINOACIDOS
REGULACION
POR
EL
ESTADO
O
CARGA
ENERGETICA
REGULACION POR CONTROL DE LA PERMEABILIDAD

REGULACION Y COORDINACION DEL


METABOLISMO MICROBIANO
UN MICROORGANISMO QUE CRECE SIGUE EL SIGUIENTE
PROCESO METABOLICO
almidn
1. Rompe
molculas de alto
peso molecular
glucosa, 6C

2. Introduce
en
la
clula
derivados ms pequeos
3. Los degrada a
ms pequeas

molculas

4. Los convierte en unidades


monomricas

piruvato, 3C

Amino cidos,
nucletidos, vitaminas,
carbohidratos y
cidos grasos.

Protenas,

coenzimas,
cidos nucleicos,
Mucopptidos,

QUE IMPLICA TODO ESTE PROCESO METABOLICO ?


Produccin
de
cientos
de
enzimas
coordinadamente para evitar el caos.

que

actan

500 reacciones metablicas se conectan con la va glucoltica y


el ciclo del cido ctrico.
Cada reaccin requiere una enzima determinada

QUE
POSEE
LA
CELULA
COORDINADAMENTE ?
Mecanismos de control,
qumicas.
Por lo tanto:
de metabolitos

PARA

ACTUAR

que regulan las reacciones

Una clula ideal no tiene produccin excesiva

EXISTEN
MICROORGANISMOS
MAL
REGULADOS QUE
PRODUZCAN EN DEMASIA DETERMINADOS
METABOLITOS ?
SI
Esto ha permitido que existan microorganismos
mal regulados en determinadas rutas bioqumicas
y por lo tanto produzcan en demasa determinados
metabolitos.
!!!!

Estos
microorganismos
interesan .!!!!!

nos

PODEMOS
PROVOCAR
QUE
UN
MICROORGANISMO BIEN REGULADO
PRODUZCA UN DETERMINADO COMPUESTO
ALTERANDO SUS
MECANISMOS REGULADORES ?

INDUCCION

I.

INDUCCION
ENZIMAS CONSTITUTIVOS
Enzimas siempre presentes entre la enorme cantidad de
enzimas que un microorganismo es capaz de producir .

ENZIMAS INDUCIBLES
Enzimas no presentes, o lo estn en cantidades mnimas y
que ante la presencia de una sustancia (sustrato), la clula
aumenta enormemente su cantidad.

INDUCTOR
Sustancia que incrementa la sntesis de novo de las

enzimas inducibles

INDUCCION

Forma de regulacin de la expresin de genes,


slo cuando el apropiado sustrato del
enzima est presente.
Muchas enzimas catablicas [la mayor parte
industriales] son inducibles.
EL MECANISMO DE LA INDUCCCION
[En los procariotas]:

Protenas represoras controlan la


transcripcin gnica
comienza . . .

Cuando la protena represora y la


enzima RNA polimerasa se unen fuertemente
a regin operadora y regin promotora

Si est presente la protena represora : la


RNA polimerasa no puede actuar, no
producindose la transcripcin.
Si no est presente la protena represora :
la RNA polimerasa se une, producindose
la transcripcin.

La protena represora reconoce un


ligando especfico y esta unin activa la
transcripcin al disminuir la afinidad de la
protena represora por su secuencia de
DNA especfica (operador).

INDUCCION NEGATIVA
(control negativo)

Regulacin,
en
cual
el
gen/es
(operon)
est
reprimido, en condiciones
normales

OPERN Lac DE Escherichia coli :


SINTESIS DE ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN GLUCOSA
Y GALACTOSA.

AUSENCIA DE LACTOSA: protena represora est unida


al operador, bloqueando el acceso de la RNA polimerasa
a su regin de unin (promotor),
impidiendo la
transcripcin

PRESENCIA DE LACTOSA: sta se une a la protena


represora desligandola del operador permitiendo el
acceso de la RNA polimerasa al promotor activando la
transcripcin
La lactosa es un inductor natural del opern Lac de
Escherichia coli.

OPERN Lac DE Escherichia coli :


SINTESIS DE LAS ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN
GLUCOSA Y GALACTOSA.

OPERN Lac DE Escherichia coli :


SINTESIS DE LAS ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN
GLUCOSA Y GALACTOSA.

OPERN Lac DE Escherichia coli :


SINTESIS DE LAS ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN
GLUCOSA Y GALACTOSA

INDUCCION POSITIVA
( control positivo )
Mecanismo alternativo de la regulacin negativa:

Es la regulacin por medio de


activadoras de la expresin gnica.

protenas

En este caso la protena activadora


unin de la RNA polimerasa.

facilita la

Estas protenas activadoras,


al igual que las
protenas
represoras,
se
unen
a
ligandos
especficos (inductor) pero en este caso se
incrementa la afinidad de la protena activadora
por el DNA con lo que se activa la transcripcin.

Si la protena activadora (Ej. CAP )


halla presente:

se

La RNA polimerasa se une y tiene lugar


la transcripcin

Si la protena activadora (Ej. CAP ) no se


halla presente:
La RNA polimerasa no se une y no tiene
lugar la transcripcin

Este tipo de control gnico recibe el

Controles positivos y negativos de la


transcripcin del ADN en mRNA.

MANIPULACION, A NIVEL DE SINTESIS, DE


LA PRODUCCION DE UNA ENZIMA
Podemos manipular, a nivel de sntesis,
la produccin de un enzima bien sea:
1.

Introduciendo inductores autnticos o


anlogos. isopropil -d-galactsido es
el mejor inductor del operon lac

2.

Por mutacin del gen regulador (el que


codifica para la protena represora)
inactivando la protena represora.

3.

Por mutacin del operador con lo que


la protena represora no presentar
afinidad por l.

REGULACION CATABOLICA
Represin Catablica
(Efecto de la Glucosa)

MECANISMOS REGULADORES Y
FERMENTACIONES INDUSTRIALES

III. REGULACION CATABOLICA


SUPONGA A LA BACTERIA Escherichia Coli
CRECIENDO EN UN MEDIO CON VARIAS
FUENTES DE CARBONO
QUE SUCEDERIA ?
1.

La bacteria podra sintetizar enzimas para


degradar todas las fuentes de carbono
presentes.
Esto supondra un enorme derroche de energa
al
sintetizar
protenas
que
no
son
estrictamente necesarias.

La bacteria lo que hace es sintetizar el sistema


enzimtico para la utilizacin del mejor
sustrato, reprimindose la sntesis de los
otros sistemas enzimticos.

REPRESION POR CATABOLITO :


EFECTO GLUCOSA

La glucosa fu el primer sustrato


estudiado que ocasionaba represin
catablica

Por lo que tambin se le llama efecto


glucosa, aunque no es el nico
sustrato que produce este efecto.

Slo cuando se agota el primer


sustrato se sintetizan enzimas para
la utilizacin del siguiente.

Efecto de la glucosa en la expresin de las protenas codificadas


por el opern lac

El transporte de glucosa al
interior de la clula inhibe a la
enzima adenilato ciclasa que
es la que produce el AMPc.
Debido a que el papel del
complejo CAP-AMPc es encender
la transcripcin, este tipo de
control se considera como
CONTROL POSITIVO.

El AMPc se une a una protena de


unin llamada CAP o CRP. El
complejo AMPc-CAP y no la
protena CAP por s sola, es capaz
de unirse a un sitio en los
promotores
de
los
operones
sensibles a la represin catablica.
La unin con el complejo hace al
promotor ms eficiente, por lo
tanto se llevarn a cabo ms
procesos
de
iniciacin
de
la

REPRESION POR CATABOLITO:


DE CARBONO REPRESORES

FUENTES

La combinacin de la induccin y
represin
aseguran
una
economa
celular notable ya que slo se sintetizan
los enzimas indispensables.
Evitando el uso de fuentes de carbono
represoras en el medio de cultivo se
puede aumentar la produccin de
enzimas
sensibles
a
la
represin
catablica.
Por ejemplo:
usando manosa en el
crecimiento
de
Pseudomonas
fluorescens var. cellulosa se produce

REGULACION
POR
RETROALIMENTACION

IV. REGULACION POR RETROALIMENTACION


REGULACION DE RUTAS ANABOLICAS O DE BIOSINTESIS

En contraste a las rutas catablicas que suelen estar


reguladas por el sustrato inicial.

Como ocurre en los dos sistemas de regulacin ya


descritos: Induccin y Regulacin catablica

Las rutas anablicas o de biosntesis suelen estar


reguladas por el producto final

Como es el caso de la retroalimentacin

Las rutas anablicas o de biosntesis suelen estar reguladas por el producto final
Como es el caso de la retroalimentacin (feedback)

sustrato
inicial

producto
final

Ribosoma
INDUCCION

mRNA

represin

DNA
Las rutas catablicas suelen estar reguladas por el sustrato inicial.
Como ocurre en los dos sistemas de regulacin : Induccin y Regulacin
catablica

Existen dos tipos fundamentales


de
regulacin
por
retroalimentacin:
4.1.
Inhibicin
retroalimentacin

por

4.2.
Represin
retroalimentacin

por

4.3.
Regulacin
retroalimentacin
en
ramificadas

por
rutas

4.1.

INHIBICIN
RETROALIMENTACIN

POR

Es un fenmeno en el cual un metabolito,


generalmente el metabolito final de una
secuencia metablica Inhibe la accin de una
enzima anterior que, generalmente, es la
primera de la secuencia.

INHIBICIN POR
RETROALIMENTACIN
MATERIAL INICIAL
Enzima A

Primer intermediario
Enzima B

Segundo intermediario
Enzima C

Tercer intermediario
Enzima D
PRODUCTO FINAL
LA ACTIIVIDAD DE LA PRIMERA ENZIMA DE LA VIA ES INHIBIDA POR EL PRODUCTO
FINAL CONTROLANDOSE SI LA PRODUCCION DEL PRODUCTO FINAL

Inhibicin por retroalimentacin


El inhibidor es el producto final y no un derivado en contraste
con el sistema clsico de inhibicin por competicin
El inhibidor (producto final) no se parece ni en tamao, ni en
forma, ni en carga al sustrato.

Por lo que se llama inhibicin alostrica.

En la inhibicin por competicin:


El inhibidor se asemeja al sustrato y compite por el sitio activo
del enzima (Inhibidor Isostrico).

Las
ENZIMAS
generalmente :
Estn formados
subunidades.

ALOSTRICOS

por

dos

ms

Una de las cuales lleva el centro


activo (sitio de unin al sustrato); y

La otra el sitio de unin al inhibidor

Cuando el inhibidor se une a su centro,


se distorsiona la conformacin del
enzima impidiendo la unin del enzima

Como es posible qu un producto final


inhiba la actividad de una enzima que acta
sobre un sustrato muy poco relacionado con
el ?
ENZIMA ALOSTERICA: Mecanismo de inhibicin enzimtica por efecto alostrico

Sitio alostrico
Efector alostrico

Sitio de unin con el sustrato


Sustrato

Cambio de conformacin sn sl sitio


de unin con el sustrato.
Se inhibe la reaccin enzimtica

La reaccin enzimtica procede

El sustrato no
se puede unir

Cuando el efector se combina con el sitio alosterico, se altera la conformacion


de la enzima que el sustrato ya no se puede unir

Regulacin de la sntesis de lisina por


retroalimentacin

4.2.

REPRESIN
RETROALIMENTACIN
La represin por retroalimentacin
fenmeno muy comn.

POR

es

un

Regula la sntesis de aminocidos y nucletidos


pricos y pirimidnicos.
Por ejemplo:
Si existe un nivel alto del aminocido triptfano
en el medio de cultivo, el microorganismo no va
a gastar energa sintetizando los enzimas
implicados en la biosntesis de triptfano.

ESTA REGULACIN SE LLEVA A CABO


MEDIANTE EL PRODUCTO FINAL
EN ESTE CASO TRIPTFANO, QUE
IMPIDE QUE LOS GENES QUE CODIFICAN
PARA
ESOS
ENZIMAS
NO
SE
TRANSCRIBAN EN RNA MENSAJERO.

EL OPERN TRP EN Escherichia


coli
En Escherichia coli el opern trp
est formado por:

Un promotor
Un operador, y
Cinco genes que codifican para
los enzimas implicados en la
sntesis de triptfano.

EL OPERN TRP EN Escherichia


coli
El GEN REGULADOR codifica para una
protena represora inactiva que no se
puede unir al operador por lo que la RNA
polimerasa
se
une
al
promotor
sintetizndose las enzimas.
Por el contrario, si el triptfano est
presente y no se necesita ms, la
protena represora se une al triptfano y
se convierte en su forma activa, la cual se
une al operador bloqueando la unin de
la RNA polimerasa al promotor e
impidiendo la sntesis de los enzimas.

4.3. REGULACIN POR RETROALIMENTACIN


EN
RUTAS
RAMIFICADAS:
VIA
BIOSINTETICA
Inhibicin por retroalimentacin

PROLINA
ACIDO GLUTAMICO
ARGININA

Inhibicin por retroalimentacin

Existen tres tipos de regulacin por


retroalimentacin en rutas ramificadas:

a)

Isoenzimas o Diferencial

b)

Concertado

c)

Acumulativo

a. Isoenzimas o Diferencial
E
D
A

Varios enzimas diferentes (denominados isoenzimas)


catalizan la reaccin inicial estando cada uno de ellos
inhibido por un producto distinto.

Concertada
E
D
A

Distintos productos se unen para inhibir


una nica enzima.

c. Acumulativa
E
D
A

F
H

Distintos productos inhiben en distinta


proporcin a una nica enzima.

A
la
hora
de
microorganismo
industrial:

utilizar
un
a
nivel

El ms fcil de desregular sera


el concertado.

Por lo que,
se tiende a usar
aquellos microorganismos que
utilizan este sistema.

Es el caso de Corynebacterium
glutamicum para la produccin
de lisina (aminocido deficitario
en vegetales).

MECANISMOS REGULADORES Y
FERMENTACIONES INDUSTRIALES
V. REGULACION DE LA SINTESIS DE RNA POR
AMINOACIDOS
Escherichia coli un "control global"
Regular la sntesis de RNA en los casos de crisis
metablica

La mayor parte de ejemplos de


regulacin
vistos
responden
a
condiciones nutricionales especficas:

Presencia de un disacrido, o

Ausencia de un aminocido en el medio.

Escherichia coli un "control global"


Regular la sntesis de RNA en los casos de crisis
metablica

Hace ms de 20 aos se descubri en


Escherichia coli un "control global" :
Cuando se transferan las clulas de
un medio rico a un medio pobre se
paraba
la
sntesis
de
RNA
disminuyendo
la
sntesis
de
protenas.
Esta observacin indica que las clulas
bacterianas pueden regular la sntesis
de RNA en los casos de crisis

Actualmente se sabe que SE


INHIBE sntesis de rRNA y tRNA
bajo esas condiciones:
Cuando se ACUMULAN dos
guaninas
polifosfatos
(ppGpp y pppGpp) las
cuales son sintetizadas por
la enzima Rel A

CUANDO FALTA UN AMINOCIDO, EN LA


SNTESIS DE PROTENAS

El correspondiente tRNA se encuentra en el


ribosoma sin su grupo aminoacil.

Provoca que la enzima Rel A sintetice pppGpp


a partir de GTP (que se utiliza como fuente de
energa en muchos pasos de la sntesis
proteica).

Este pppGpp por medio de una pirofosforilasa


llamada Gpp lo convierte en ppGpp que a su
vez inhibe la sntesis de rRNA y tRNA
permitiendo
nicamente
la
sntesis
de
aminocidos.

CUANDO EXISTEN NIVELES ACEPTABLES


DE AMINOCIDOS
El ppGpp por medio de una 3'
fosforilasa llamada Spo T se convierte
en el intermediario normal GDP
GTP
El mecanismo por el cual se activan unos
mRNA (los implicados en la sntesis de
aminocidos) y otros se inhiben no se
conoce de momento.
Este mecanismo, preciso y rpido,
protege a la bacteria de un crecimiento
deficiente

MECANISMOS REGULADORES Y
FERMENTACIONES INDUSTRIALES
VI. REGULACION POR EL ESTADO O CARGA
ENERGETICA
ESTADO ENERGETICO DE LA CELULA
Existe una ecuacin emprica mediante la cual se
puede determinar el estado energtico de una
clula:
E=

[ATP] + 1/2 [ADP]


--------------------------------[ATP] + [ADP] + [AMP]

Cuando el valor de E es alto:


biosntesis
Cuando el valor de E es bajo:
biosntesis

indica que no hay


indica que

hay

puesto que se est

ESTADO ENERGETICO DE LA CELULA


Se ha comprobado que una clula en
fase
logartmica
de
crecimiento,
metabolismo primario, presenta un
valor de E = 0,5.
Sin embargo, en fase
tiene un valor de E = 0,8.

estacionaria

En
fase
estacionaria
cambia
drsticamente el metabolismo celular
pasando al metabolismo secundario.
Los motivos por los cuales ocurren
estos cambios no se conocen, aunque
deben ser mltiples debido al gran
nmero de reacciones metablicas
donde actan el ATP, ADP y AMP.

VII. REGULACION POR CONTROL DE LA PERMEABIL

La membrana citoplasmtica controla el paso


de los nutrientes al interior de la clula, as
como hacia el exterior de la clula.
Existen cuatro mecanismos
transporte de nutrientes.

que

regulan

el

1.- Difusin pasiva


2.- Difusin facilitada
3.- Transporte activo
4.-

Transporte
grupo

por

translocacin

de

1. Difusin pasiva

Molculas de H2O y algunos nutrientes


liposolubles pasan libremente a travs
de la membrana hasta equilibrar
concentraciones.

No hay consumo de energa.

2. Difusin facilitada

Los nutrientes se unen a una


protena
transportadora
para
atravesar la membrana pasando
de mayor a menor concentracin.

No hay consumo de energa.

3. Transporte activo

La mayor parte de los nutrientes son


transportados
mediante
este
mecanismo.

Este proceso permite concentrar, en el


interior
celular,
altos
niveles
de
nutrientes
necesarios
para
las
actividades metablicas.

Hay consumo de energa.

El ATP distorsiona el sitio de unin a la


protena transportadora dificultando a la
molcula la salida de la clula.

4. Transporte por translocacin de


grupo

En este tipo la protena transportadora


es una enzima que aade un grupo
fosfato del cido fosfoenolpirvico al
nutriente durante el transporte.

Este nutriente alterado ya no es capaz de


unirse a la protena transportadora por lo
que se acumula dentro de la clula.

Inhibicin feedback
Generalmente, el control de actividad de las enzimas es por encendido o apagado de las
enzimas y est asociado con enzimas alostricas durante la inhibicin de feedback:
Cuando los productos en una va aumentan, ellos mismos producen feedback a la
primera enzima de la va y cierran la sntesis de los productos finales e intermedios.

Vas ramificadas
Feedback acumulativo: ni F ni H pueden reducir separadamente por
completo la actividad de e1, posiblemente cada uno puede lograr una
reduccin parcial pero juntos pueden pararla totalmente.

Feedback secuencial: F y H provocan feedback en e4 y e6


respectivameante provocando la acumulacin de D.
D entonces produce feedback sobre e1.

Feedback multivalente: ni F ni H por separado producen efecto


alguno en e1 pero juntos tienen actividad inhibitoria.