COMPLEJO MAYOR DE

HISTOCOMPATIBILIDAD:
MR1 NEFROLOGIA: JUAN PABLO ARAUJO ZUIGA

El MHC codifica tres clases de

molculas principales
MHC es un conjunto de genes dispuestos
dentro de una tira continua de DNA en el
cromosoma 6 en seres humanos. Este se
denomina complejo HLA en el ser humano.

Las molculas MHC clase I y clase II

comparten caractersticas estructurales
y ambas participan en el procesamiento
y la presentacin del antgeno.
Al contrario las molculas de clase III a
cuyos lados se encuentran las regiones
clase I y clase II codifica molculas
crticas para la funcin inmunitaria pero
tienen poco en comn como las
molculas clase I o II.

REPRESENTACION ESQUEMATICA REGION HLA

N Engl J Med 2000, 343(10)

Locus gentico (brazo corto del cromosoma 6) que codifica para los
antgenos de histocompatibilidad

Molculas del
MHC

CLASIFICACIN

CLASE I

Posee

es

CLASE
CLASE II
II

Se encuentra en

Macrfagos
Macrfagos y
y linfocitos
linfocitos B
By
y
T
T estimulados
estimulados por
por
antgenos
antgenos

Codificados por el locus:

HLA-A, -B y -C

Codificado por el locus

HLA-D

Cadena ligera

Glucoprotena
transmembran
a

-2microglobulina

Reconocido por

Linfocitos T
CD8
De la
Subpoblaci
n citotxica

CLASE
CLASE III
III

Poligni
co

Polimrf
co

Codifica
Codifica protenas
protenas
del complemento
del
complemento y
y
citocinas
citocinas

Varios genes
para cada
clase de
molcula

Estructur
al-mente
diferentes

Se encuentra en

Todas las clulas

excepto los hemates

Cadena pesada

Control de la
respuesta
inmunitaria
Cadena pesada
(a)
a1: abierto
a2:
plegado

Marcadores de "lo propio" (el yo

inmunolgico).
Intervienen en la educacin tmica de los
linfocitos T
Presentan los pptidos antignicos para la
activacin de los linfocitos T
Variabilidad
gentica

Funcin

Codifica
protenas para
procesar
antgenos

Cadena ligera
(b)
b1 y b2
son
plegadas
Reconocidos por

Linfocitos T
CD4
Regulador,
productor de
toxinas

TAP
TAP

como

LP
LP

Genes se
heredan como
haplotipo
Bloque de genes ,
poco
entrecruzamiento

NNEngl
EnglJJMed,
Med,vol
vol343(10)
343(10)

Patrones de Expresin

HLA clase I: se expresan en casi todas las clulas nucleadas

HLA clase II: expresin restringida. Se encuentran en los Linfocitos

B, Linfocitos T activados, clulas dendrticas, clulas tmicas
epiteliales. Las clulas endoteliales pueden ser inducidos para que
las expresen.

MOLECULAS DEL CMH

CAPACIDAD DE ASOCIAR
PEPTIDOS
Y PRESENTARLOS
EN LA SUPERFICIE CELULAR

INTERACCION PEPTIDO Y MOLECULA HLA CLASE I

N Engl J Med 2000, 343(10)

N Engl J Med 2000, 343(10)

MOLECULAS HLA CLASE I Y

II
CLASE I
Heterodimero

CLASE II
Heterodimero

44 kDa y 12 kDa

32 kDa y 28 kDa

Practicamente en todas

LB, Macrofagos

las celulas
Presenta a LT CD8+
Une peptidos de 8-10
residuos

C Dendriticas, LT act
Presenta a LT CD4+
Peptidos de 12- 25
residuos

TABLA 2 : CARACTERISTICAS DE PEPTIDOS QUE UNEN A MOLECULAS

HLA CLASE I Y II .
CARACTERISTICA
LONGITUD DEL PEPTIDO

CLASE I
8-10

CLASE II
12-25

FUENTE DE DEGRADACION
DE PROTEINAS

CITOPLASMATICA

ENDOSOMAL/
LISOSOMAL

POSICIONES DE ANCLAJE DE
CADENAS LATERALES MAS
FRECUENTES
INTERACCIONES CONSERVADAS

P2 y P8 (P9)

N y C TERMINAL

P1, P4, P6 y P9

A LO LARGO DEL
PEPTIDO

INTERACCION

RETICULO
ENDOPLASMICO

COMPARTIMENTO
ENDOCITICO

CHAPERONAS

CALRETICULINA,
TAPASINA, TAP

CADENA INVARIANTE
HLA-DM

COMPLEJO MAYOR DE
HISTOCOMPATIBILIDAD

POLIGENICO
Varios genes MHC clase I y clase II codifican
diferentes tipos de molculas MHC

POLIMORFICO
Variacin mayor de 1% en un locus, en una
poblacin de individuos.

Polimorfismo del MHC

Variacin >1% en un locus, en una poblacin
Cada variante polimrfica es llamada alelo

No de
polimorfismos

3005
1546

Clase I

Clase II

2365
121

1848
3
A

23

32

69

DR
DP DQ

NUMERO DE ALELOS HLA

NO CLASICOS 2006
LOCUS
HLA-E
HLA-F
HLA-G
HLA-DMA
HLA-DMB
TAP-1
TAP-2
MICA
MICB
DOA
DOB

ALELOS
8
20
23
4
7
7
4
60
25
12
9

NOMENCLATURA
SEROLOGICA:
Antigenos y subtipos o split
BIOLOGIA MOLECULAR
Grupos de alelos y alelos
Alelo:aquel cuyo gen se ha secuenciado
Uso de * para gen secuenciado

CLASIFICACION
SEROLOGICA

Los Antgenos son designados con nmeros

Existen subtipos de antgenos:

A-19: A-29, A30, A31, A32, A33, A74

B-15: B62, B63, B75, B76, B77
DR3: DR17, DR18
Ej:HLA-A23(9) 23 SUBTIPO

9 ANTIGENO

NOMENCLATURA ALELOS HLA

HLA
HLA-DRB1

REGION HLA Y PREFIJO PARA UN GEN HLA

LOCUS HLA PARTICULAR

HLA-DRB1*13

GRUPO DE ALELOS QUE CODIFICAN ANTIGENO DR13

HLA-DRB1*1301 ALELO HLA ESPECIFICO

HLA-DRB1*130102 ALELO QUE DIFIERE EN UNA MUTACION SINONIMA

DESIGNACION DE ALELOS HLA.

EJEMPLOS
ALELOS HLA
SEROLOGICA
A*0101 al 0102
A*0201 al 0213
A*0301 al 0302
A*2301
B*0701 al 0704
B*0801 al 0802
B*1401
B*1402

ESPECIFICIDAD
A1
A2
A3
A23(9)
B7
B8
B14
B65(14)

DESIGNACION ALELOS HLA.

EJEMPLOS
ALELOS HLA-DR
DRA*0101 al 0102

ESPECIFICIDAD
SEROLOGICA
-

DRB1*0101 al 0104

DR1

DRB1*1501 al 1504

DR15(2)

DRB1*1601 al 1606

DR16(2)

DRB3*0101
DRB3*0201 al 0202
DRB3*0301

DR52
DR52
DR52

ESQUEMA GENES HLA CLASE II

CLASE II
locus

DP

CLASE III
DQ

DR

CLASE I
C'

gen

cadena

DP /DP

DQ /DQ

DR /DR

 Fenotipo: antgenos o alelos

identificados
Genotipo: antgenos o alelos
identificados asociados a un
cromosoma
Requiere estudio familiar
Haplotipo: combinacin de alelos
en un cromosoma
Desequilibrio de ligamiento

ENFERMEDADES ASOCIADAS
A HLA

ENFERMEDAD DE BEHETS
HLA-B51
ESPONDILITIS ANQUILOSANTE HLA-B27
DIBETES MELLITUS INSULINO HLA-DR3
DEPENDIENTE
HLA-DR4
HLA-DQ8
ARTRITIS REUMATOIDE
HLA-DR4
DERMATITIS HERPETIFORME
HLA-DR3
PENFIGO VULGAR
HLA-DR4
MIASTENIA GRAVIS
HLA-DR3 HLA-B8
ESCLEROSIS MULTIPLE
DR2
NARCOLEPSIA
HLA-DQB1*0602/ DQA1*0102
ENFERMEDAD CELIACA
HLA-DQB1*0201/ DQA1*0501

LABORATORIO DE
TRASPLANTES DE ORGANOS

TRASPLANTE
ES LA TRASFERENCIA DE CELULAS, TEJIDOS
U ORGANOS VIVOS DE UN DONANTE
A UN RECEPTOR CON LA INTENCION DE MANTENER
LA INTEGRIDAD FUNCIONAL DEL MATERIAL
TRASPLANTADO EN EL
RECEPTOR

TIPOS DE
TRASPLANTE
POR
EL LUGAR
-

ortotpico: se transfere a una zona anatmica

normal (corazn, crnea)

heterotpico: se transfere a una

anatmica distinta (rin en fosa ilaca)

zona

TIPOS DE TRASPLANTE
POR RELACION GENETICA

- Autoinjerto (autlogo): transferencia del propio

tejido de un lugar a otro (injerto seo, piel)
- Singnico (isoinjerto): entre gemelos idnticos
- Aloinjerto
(homoinjerto):
entre
miembros
genticamente distintos pero de la misma
especie
- Xenoinjerto (heteroinjerto): entre miembros de
especies diferentes

TIPOS DE
TRASPLANTES
POR EL TIPO
DE DONANTE
-

Vivo relacionado: hermanos, padres

Vivo
no
relacionado:
internacionales

Cadavrico

registros

nacionales,

PRUEBAS HLA Y
TRASPLANTE
Cuando se trasplanta un tejido se transfere Ag
diferentes para el receptor y esto induce
respuestas inmunes de tipo humoral y celular
que conducen al rechazo del trasplante

PRUEBAS HLA Y
TRASPLANTE
La

gravedad
mediante:

del

rechazo

puede

reducirse

Pruebas de compatibilidad entre el donante y

receptor

Administracin de esteroides para disminuir la

respuesta humoral

Inhibicin de la respuesta inmune celular con

Ciclosporina A

FUNCION BIOLOGICA DE LAS

MOLECULAS DE
HISTOCOMPATIBILIDAD
Las molculas del CMH estn implicadas en la regulacin de la
respuesta inmune. El reconocimiento de Ag extraos requiere la
presentacin del Ag procesado por parte del CMH en la
superficie celular y una ulterior interaccin intercelular

PROCEDIMIENTOS EN EL
LABORATORIO DE
HISTOCOMPATIBILIDAD
TOMA DE MUESTRA
1.- Sangre desfbrinada
Linfocitos totales

HLA clase I

2.- Sangre anticoagulada

Linfocitos B
3.- Suero

HLA clase II
panel inmunolgico

SEPARACIONDE LINFOCITOS
TOTALES
Separacin por gradiente de densidad
eritrocitos

1.093 1.096

granulocitos

1.087 1.092

linfocitos

1.077

plaquetas

1.040

SEPARACION DE LINFOCITOS B
Perlas inmunomagnticas con Ac anti-linfocitos B
Consiste en microesferas paramagnticas que tienen adheridas en su
superficie anticuerpos monoclonales especficos para HLA clase II que
se encuentran en los linfocitos B (CD19) y luego de ser sometidos a un
campo magntico van a ser separados de los dems elementos celulares

SEPARACION DE
LINFOCITOS B
Perlas inmunomagnticas con Ac
anti-linfocitos B

SEPARACION DE
LINFOCITOS B
Perlas inmunomagnticas con Ac antilinfocitos B

PRUEBA DE LA MICROLINFOCITOTOXICIDAD
Es una reaccin Ag-Ac dependiente de complemento.
Se enfrentan los linfocitos cuyo HLA se quiere determinar con una
batera de antisueros especficos (anti HLA).
Si los linfocitos poseen el Ag reconocido por el Ac se formar un
complejo Ag-Ac el mismo que en presencia de C activar la cascada
con el consiguiente dao de la membrana celular

Esta reaccin se evidencia incorporando un colorante de

exclusin vital. Las clulas lisadas incorporan el colorante y
las clulas que no poseen el Ag permanecern intactas

TECNICA DE MICROLINFOCITOTOXICIDAD
5 ul parafina lquida
1 ul antisuero especfico
1 ul suspensin celular
Reposo 30 a T ambiente
5 ul complemento
Reposo 60 a T ambiente
Coloracin
Lectura e interpretacin

COLORACION DE LINFOCITOS AISLADOS POR

GRADIENTE DE DENSIDAD
Se agrega un colorante de exclusin vital como la Eosina Y que tiene
la propiedad de penetrar en las clulas cuya membrana celular ha
sido daada (cl. muertas) y no en aquellas clulas que mantienen
su membrana intacta (cl. vivas).
Se utiliza Microscopio de Contraste de Fase de Objetivos Invertidos.
- Clulas muertas: - membrana celular daada
- ingresa el colorante
- aumentan de tamao
- opacas y oscuras
- Clulas vivas:- membrana celular intacta
- no ingresa el colorante
- mantiene su tamao
- refringentes

COLORACION DE LINFOCITOS AISLADOS POR

PERLAS INMUNOMAGNETICAS
Se utiliza una mezcla doble de colorantes fluorescentes.
Se utiliza Microscopio de Fluorescencia.
Naranja de acridina

490 nm 535 nm fluorescencia verde

Bromuro de etidio

490 nm 605 nm fluorescencia roja

-Clulas vivas:
-Clulas muertas:

verde
roja

CELULAS VIVAS ( REACCION NEGATIVA )

CELULAS MUERTAS ( REACCION POSITIVA )

INTERPRETACION
Clulas muertas
0 10 %
11 20 %
21 50 %
51 80 %

SCORE
1
2
4
6

Reaccin
Negativo
Negativo
Dudoso
Positivo

dbil
81 100 %

Positivo

Se obtiene una especificidad tipificacin antignica cuando la

cantidad
de clulas muertas supera el 50% (puntaje 6 8)

MICROLINFOCITOXICIDAD
SCORE 1

MICROLINFOCITOXICIDAD
SCORE 2

MICROLINFOCITOXICIDAD
SCORE 4

MICROLINFOCITOXICIDAD
SCORE 6

MICROLINFOCITOXICIDAD
SCORE 8

PANEL INMUNOLOGICO
Esta prueba nos permite categorizar el
comportamiento inmunolgico del paciente, es
decir, clasificarlo segn su nivel de respuesta
en tres grupos:
no respondedores:
respondedores:
hiperrespondedores:

0%
< 50 %
> 50 %

Panel Anticuerpos Anti

HLA

Panel Anticuerpos Anti HLA

0/48 = 0%
No Respondedor

12/48 = 25%
Respondedor

16/48 = 33%
Respondedor

40/48 = 83%
Hiper
Respondedor

SEROTECA
La seroteca es de suma importancia porque nos
permite contar con los sueros de los pacientes en
lista de espera para un eventual operativo de
trasplante con donante cadver, adems nos
permite realizar estudios retrospectivos.
Los sueros sern preservados en pequeas
alcuotas a T entre -20 a -60C, debidamente
identificado y organizados en cajas.

Ejemplo:
Paciente: Antonio Pinto Pineda
Fecha: 14.12.2008
Caja N 15 posicin D5
A

1
2
3
4
5
6
7
8

CROSS MATCH
Es la prueba para identificar Ac citotxicos especficos
en el receptor contra los Ag de sus posibles donantes
El suero del receptor se hace reaccionar con los
linfocitos del donador y se sigue la tcnica de
microlinfocitotoxicidad

CROSS MATCH

La presencia de tales anticuerpos se ha asociado a rechazos

hiperagudos acelerados, por lo que una prueba cruzada positiva se
considera una contraindicacin para llevar a cabo el trasplante.

CROSSMATCH
TRASPLANTE RENAL
Crossmatch Negativo

Procede trasplante

Crossmatch Positivo

Contraindicacin