TERCERA PRCTICA DE

LABORATORIO: MTODOS Y
TCNICAS DE ESTUDIO DE LAS
CLULAS.

CLULA
A primera instancia,
ilustres
jvenes,
debemos
reconocer
un concepto biolgico
fundamental:
la
clula.
Su
descubrimiento
representa
la
base
fundamental
de
la
comprensin
de
la
vida y seres hasta
entonces
desconocidos.

 Se trata de la unidad ms nfi ma con vida, la cual

est adaptada a un entorno especfi co de manera
dependiente a su informacin gentica.
sta, adems de dar origen a nuevos seres por medio
de una interaccin gentica o cambio de posicin en
el re-ensamblaje cromosmico; modula el periodo de
vida propia mediante una auto-supresin.

 Existe
un
continuo
abastecimiento
energticomaterial de tales estructuras mediante el ejercicio de
diversas reacciones qumicas.
Para lo anterior, las clulas son capaces de producir
macromolculas
con
estructuras
y
funciones
especfi cas.

 Asimismo, son hbiles

para la interaccin con
otras
clulas;
se
agrupan, comunican a
poblaciones
ms
lejanas la necesidad
de
un
cambio
de
comportamiento
en
otras
como
la
inhibicin o estmulo
de
secrecin,
de
expresin
gnica,
diferenciacin
y
eliminacin.

 Mediante lo anterior, puede inferirse que la clula

puede responder a variaciones fi sico-qumicas en su
entorno, as como en su interior.
La modulacin de su comportamiento se basa en la
tendencia a comportarse a favor de la supervivencia,
que a su vez implica un comportamiento adecuado a
su entorno.

 Pudo
reconocerse
mediante
su
estudio,
la
imposibilidad del surgimiento de clulas de novo,
que a su vez llevara posteriormente a la sugerencia
de la existencia de un precursor comn.
Lo anterior, queridos oyentes, es la teora evolutiva,
la cual ha sido (y ser) demostrada por mltiples
variaciones.

TEJIDOS
Los tejidos son extensos conjuntos heterogneos de
clulas conectadas directa o indirectamente por los
componentes de su medio intersticial, generalmente
redes de protenas, clulas muertas y ocasionalmente
por sales.

MTODO, TCNICA
Etimolgicamente logra apreciarse lo siguiente, odos:
camino, va; tkhne: Estatutos de un ofi cio o arte.
As, puede reconocerse al mtodo como el mecanismo
ordenado con el que se alcanza satisfactoriamente un
objetivo.
Por otra parte, la tcnica integra a los recursos
necesarios para lograrlo.

MTODOS Y TCNICAS DE ESTUDIO

DE LAS CLULAS Y TEJIDOS
El estudio de la morfologa de clulas vivas In vivo,
es aquella tcnica de observacin de clulas en un
ser vivo.
Se lleva a cabo lo anterior, analizando las variaciones
en tejidos accesibles del ser vivo.
De este modo, se reduce el proceso a la observacin
de los sucesos consuetudinarios (sin intervencin
farmacolgica o de algn otro tipo) en el mismo.

 Por otra parte, el estudio de la morfologa de clulas

vivas In vitro (Literalmente en vidrio), se basa en el
aislamiento de una poblacin de clulas en un medio
artifi cial anlogo al entorno natural de dicho tipo de
clulas exclusivamente en algunas variables.
As, se logra una experimentacin ardua mediante la
adicin u omisin de componentes intersticiales
fundamentales.

 La tcnica de observacin en microscopa ptica

puede ser hecha con una muestra sometida a anlisis
recin extrada (examen en fresco).
sta puede hacerse valer de colorantes de unin
especfi ca a ciertas molculas para identifi car su
disposicin en la clula y apreciarse mediante
microscopios que permitan observar la mayor parte
del espectro luminoso.

 Tambin para observar clulas muertas, es necesario

evitar su descomposicin, por tal, se usan especies
adecuadas como formalina, cito-spray; o bien se
irradia energa en forma de calor. Se conoce a lo
anterior como fi jacin.
La tincin adquirida ser dependiente de la afi nidad
de los componentes de la clula

 La distribucin de un tejido sobre un portaobjetos

para ser observado se denomina frotis.
El montaje de una muestra biolgica se reduce
exclusivamente a la superposicin del primero sobre
el segundo.

 La microtoma consiste en la extraccin de muestras

extremamente delgadas (De 1-5m) de tejido para su
observacin.
Esto se facilita mediante el congelamiento de la
muestra, la fi jacin y la deshidratacin de la misma.
El instrumento necesario para ello es el microtomo, el
cual tiene una serie de navajas altamente fi losas
cuya distancia se modula mediante una serie de
manipuladores.

FIJADORES

Previene los procesos de autlisis.

Previene la contaminacin del tejido por bacterias o
por hongos
Los tejidos fi jados no cambian signifi cativamente de
forma y/o volumen
Los tejidos fi jados permiten una correcta y clara
tincin de los mismos
Los tejidos fi jados deben en lo posible mantener las
mismas caractersticas de los tejidos vivos, por lo
tanto, los fi jadores mantiene la estructura celular con
la menor variacin posible

 Mal fi jado

Buen fi jado

FIJADOR FSICO Y QUMICO

FIJADORES FISICOS: Los fi jadores fsicos como por
ejemplo, la congelacin, detienen por medio de la
congelacin de la clula todos los procesos que la
pueden daar.
FIJADORES
QUIMICOS:
En
la
fi jacin
qumica
interviene
una
serie
compleja
de
reacciones
qumicas, tales como reacciones que estabilizan las
protenas mediante un cambio estructural. Las
protenas solubles se unen a las del citoesqueleto
mediante el fi jador y se transforman en insolubles.
Asimismo, producen la inactivacin de ciertas
enzimas celulares, responsables de la autlisis
celular.

COLORANTES
Son compuestos orgnicos, generalmente ionizados,
capaces de interactuar con molculas especfi cas de
los seres vivos; lo cual resulta auxiliar en la
observacin de los mismos.
Al reaccionar con otras molculas o tomos cargados,
sucede un cambio estructural con el cual existe una
oscilacin en la posicin de un electrn compartido
entre tomos de la molcula (resonancia elctrica), lo
cual, produce la liberacin de energa en forma de
fotones ante la incidencia de energa.

 Colorantes naturales.Los colorantes naturales son

extractos de tejidos, utilizados principalmente para
analizar niveles estructurales mayores a la clula,
anexndose a materia ionizada dentro de la muestra
y alterado su naturaleza de absorcin-refl exin de luz
al oxidarse.
Colorantes artifi ciales. Son indicadores cido-base,
los cuales son adquiridos mediante una intervencin
humana para la sntesis. Al existir una cesin o
aceptacin de pares de electrones, sucede algo
anlogo a lo anterior. Ejemplo de ellos, son: Azul de
metileno, verde de metilo.

 Los colorantes bsicos, como se puede apreciar,

pertenecen a la categora de los colorantes sintticos
y actan con los cidos o sales cidas del medio en
que se encuentran.
Los colorantes cidos actan de manera igual que los
bsicos, lo que cambia que acta con las bases o
sales de la misma estirpe, del medio que se
encuentran.

 Los colorantes neutros son sales que se alteran

estructuralmente en medios tanto cidos, como
bsicos.
Los colorantes indiferentes no forman sales pues no
son inicos ni dependen de la acidez para un cambio
estructural.

 Coloracin
ortocromtica.
Es
aquella
que
exclusivamente
magnifi ca
la intensidad de luz con la
misma longitud de onda de
la muestra.
Coloracin metacromtica.
Es aquella que cede su
propio color a la muestra.

MTODOS DE COLORACIN
Directa. Cuando se ejerce una interaccin carente de
intermediarios entre el colorante y la muestra; se
refi ere al primero con dicho trmino.

Indirecta. Aquellos que requieren de un mordiente,

materia dispuesta entre el colorante y la muestra en
su anexin; formando en conjunto la laca.

 Progresiva. En este mtodo se aade el colorante, no

tie la muestra rpidamente, sino que el proceso es
lento para que podamos modularlo y optimizar la
intensidad de color.

Regresiva. Ahora tenemos un exceso de color, as que

requerimos de un tercer compuesto denominado
diferenciador para retirar el colorante no deseado.

 Simple. Solo se requiere de un colorante para nuestra

muestra.
Combinada. Consiste en la aplicacin, a una muestra
de tejido u rgano, de varios colorantes con la
fi nalidad de destacar, mediante colores diferentes,
estructuras especfi cas que forman parte de ella.

 Panptica. Presenta la peculiaridad de ser un mtodo

de inmersin, donde el frotis se sumerge en la
solucin colorante durante un tiempo determinado.
Pancrmica. A diferencia de la anterior, se colocan
simultneamente todos los colorantes necesarios,
previamente mezclados.

TCNICAS DE TINCIN

Electro-adsorcin
Adsorcin por tincin
Coloracin por medio fsico
Coloracin qumica

 Debido a la indisolubilidad de la inteleccin de las

unidades estructurales fundamentales de la vida y su
observacin; as como su entorpecimiento usual, es
necesaria la introduccin de materia que provoque un
efecto visual.
Se logra as, analizar la disposicin de sus organelos,
adems de cambios fsicos y qumicos que suceden
ante su actividad interna, con otras clulas y con su
medio

TCNICAS DE TINCIN