Universidade Federal de Pelotas

CDTec
Graduao em Biotecnologia
Genmica II
Prof. Fabiana Seixas

Aplicaes de Eletroforese
Capilar
Carlus Augustu, Gabriel Urtiaga,
Hugo Furtado.
Junho/2011

Definio
O fenmeno
denominadoEletroforese definido
como sendo a migrao de espcies
carregadas eletricamente, que ocorre
quando as mesmas so dissolvidas
ou suspensas em um eletrlito,
atravs do qual umacorrente
eltrica aplicada.

Origem
Esta tcnica de separao foi
desenvolvida pelo qumicoArne
Tiseliuspara o estudo
deprotenasem soro e por este
trabalho ele ganhou oprmio
Nobelem 1948.

Utilizao na Biotecnologia
Separao de substncias por
diferenas de cargas e por diferenas
de tamanho, utilizando a eletroforese
em gel, de agarose ou poliacrilamida.

Eletroforese em gel

Eletroforese Capilar

Eletroforese Capilar
Variedades de modos de separao
Diversidade de compostos passveis de
anlise
Por que capilares?
Dissipao eficiente do calor
Campos eltricos elevados
Alta Eficincia
Alta Resoluo
Baixo Tempo

Eletroforese Capilar de Zona

em Soluo Livre
ons inorgnicos, compostos
orgnicos de baixa massa molecular
e biomolculas com alguns milhares
de daltons
Migrao:
Fluxo Eletroosmtico
Fluxo Eletrofortico

Eletroforese Capilar de Zona

em Soluo Livre
Fluxo Eletroosmtico
Camada Fixa e Camada mvel

ons arrastam molculas de gua

Fluxo

Eletroforese Capilar de Zona

em Soluo Livre
Fluxo Eletrofortico
Depende da carga do analito

Fluxo Eletrofortico Resultante

Depende da velocidade de migrao do
analito
Depende do fluxo eletroosmtico
Todas as espcies do analito migram no sentido
do fluxo eletroosmtico (maior velocidade)

Eletroforese Capilar de Zona

em Soluo Livre
O tempo para percorrer o capilar at o
detector chamado Tempo de
Migrao
Tempo de Migrao depende da
Mobilidade Eletrofortica do composto
Mobilidade Eltrofortica:
carga/massa(raio)

Eletroforese Capilar de Zona

em Soluo Livre

Eletroforese Capilar de Zona

em Soluo Livre

Eletrocromatografia Micelar
Compostos Neutros
F. eltrofortico resultante = F.
eletroosmtico
No h discriminao espacial e
temporal
Agentes tensoativos micelas

Focalizao Isoeltrica
Capilar
Compostos anfteros
Carga varia em funo do pH
Carga do meio regula mobilidade
eletrofortica

Criao de um gradiente de pH
Etapas:
Focalizao
Mobilizao

Isotacoferase Capilar
Sistema de eletrlito heterogneo
Eletrlito Lder
Eletrlito Terminal

Ex.: Ction:
Eletrlito lder deve ter mobilidade
eletrofortica superior da amostra.
Eletrlito Terminal de ter mobilidade
menor.

Isotacoferase Capilar
Estabelecimento de zonas de
amostras
Velocidade geral de migrao igual
do Lder.

Eletroforese Capilar em Gel

Razes
carga/massa(raio)
muito prximas
entre os solutos
amostrados!!
Mobilidades
Eletroforticas
tambm muito
prximas!!

Eletroforese Capilar em Gel

Oligonucleotdeos; fragmentos de
DNA; Protenas de alta massa
molecular
Razo carga/massa no varia com o
aumento da massa molecular
Soluo: Tamanho

Eletroforese Capilar em Gel

Separao baseada na diferena de
tamanho das molculas dos analitos
Maior ou menor facilidade com que os
analitos de diferentes tamanhos migram
atravs de uma matriz polimrica
porosa
Matriz: Gel

Eletroforese Capilar em Gel

Gis:
Estrutura porosa rede polimrica
Estruturas delicadas
Mudam morfologicamente com alteraes
de temperatura, pH, fora inica e
concentrao do meio.

Mais usado: Poliacrilamida

Obrigado.