INTRODUCCION

Quesunaenzima?
EnsumayoraprotenasoRNA(riboenzimas)
Seencargadecatalizarreaccionesqumicasenlosseres
vivos.
Esuncatalizadorqueayudaaqueunareaccinserealiceen
menostiempo,porquedisminuyelaenergadeactivacinpara
dichareaccin.
Noseconsumenenlasreaccionesynosealteran
Puedenserreusadasynosenecesitanengrandescantidades

ACTIVACINPROTEOLTICADELA
ACTIVIDADENZIMTICA

Proenzimas o zimgenos. Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico

que origina la liberacin de uno o varios pptidos: muchos enzimas digestivos
(quimotripsina, la tripsina pancretica Si por alguna razn se activa en el propio
pncreas, la glndula sufre un proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a
menudo mortal.
El nombre de cada enzima puede ser identificado por un cdigo numrico, encabezado
por las letras EC (enzyme commission), seguidas de cuatro nmeros separados por
puntos.
El primer nmero indica a cual de las seis clases pertenece el enzima,
El segundo se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo
El tercero y el cuarto se refieren a los grupos qumicos especficos que intervienen en
la reaccin.
As, la ATP:glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define como EC 2.7.1.2. El
nmero 2 indica que es una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el 1 indica
que el aceptor es un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un OH de la D-glucosa el
que acepta el grupo fosfato.

NOMBRESISTEMTICO

El nombre sistemtico de un enzima consta actualmente de 3

partes:
el sustrato preferente
el tipo de reaccin realizado
terminacin "asa
Un ejemplo sera la glucosa fosfato isomerasa que cataliza la
isomerizacin de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.
Muchos enzimas catalizan reacciones reversibles.
No hay una manera nica para fijar cual de los dos sentidos se utiliza
para nombrar al enzima. As, la glucosa fosfato isomerasa tambin
podra llamarse fructosa fosfato isomerasa.

ACCION DE LOS CATALIZADORES

Reaccin con catalizador

sin catalizador

Los catalizadores qumicos agilizan una reaccin qumica, formando o

rompiendo los enlaces qumicos
El comienzo de la reaccin requiere un aporte inicial de energa. Esta
energa inicial que hay que suministrar a los reactantes para que la
reaccin transcurra se llama energa de activacin (Ea). Cuanto
menor es la Ea ms fcilmente transcurre la reaccin.

Entonceslasenzimasseencargandehacermseficienteunareaccinqumica,lo
queenotrascircunstanciasseraimposible,yaqueimplicaraungrangastode
energaorequeriradecondicionesdepH,presinytemperaturaextremas.
Lasenzimashacenqueunareaccinseainstantneaocasiinstantnea.
Lasenzimassonespecficas.
Estoquieredecirquehayunaenzimaparacadaproceso.Alfinalizarlareaccinla
enzimaseliberayquedadisponibleparaotrareaccin

La sustancia sobre la que acta el enzima se llama sustrato.

El sustrato se une a una regin concreta del enzima, llamada centro
activo. El centro activo comprende (1) un sitio de unin formado por
los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato y (2) un
sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados
en el mecanismo de la reaccin
Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo
ciclo de reaccin

Mecanismos de accin enzimtica:

1.Se forma un complejo: enzima-coenzima-sustrato o substratos

Los restos de los aminocidos que configuran el centro activo catalizan el proce
Para ello debilitan los enlaces necesarios para que la reaccin qumica se lleve a
cabo a baja temperatura y no se necesite una elevada energa de activacin

.Los productos de la reaccin se separan del centro activo y la enzima se recupe

intacta para nuevas catlisis

. Las coenzimas colaboran con el proceso; bien aportando energa (ATP), electron
(NADH/NADPH) o en otras funciones relacionadas con la catlisis enzimtica

EFECTODELAMODIFICACINCOVALENTE

SOBRELAACTIVIDADENZIMTICA

Otrosenzimaspasandeunaformamenosactivaaotramsactiva
unindosecovalentementeaungrupoqumicodepequeotamao
comoelPioelAMP.Tambinsedaelcasoinverso,enelqueun
enzimamuyactivosedesactivaalliberaralgngrupoqumico.
Enlasenzimasdelasvasdegradativasdelmetabolismo,laforma
fosforiladaesmsactivaquelanofosforilada,mientrasqueenlas
vasbiosintticasocurrelocontrario.

COENZIMAS:
Son sustancias necesarias en
el proceso
de catlisis enzimtica. Nunca
protenas
Transportadores de electrones:

NAD+/NADH
NADP+/NADPH
FAD+/FADH2
Transportadoras de energa:

ADP/ATP
GDP/GTP

CLASIFICACINDELOSENZIMAS
Enfuncindesuaccincatalticaespecfica,los
enzimasseclasificanen6grandesgruposoclases:
Clase1:OXIDORREDUCTASAS
Clase2:TRANSFERASAS
Clase3:HIDROLASAS
Clase4:LIASAS
Clase5:ISOMERASAS
Clase6:LIGASAS

Clase1:OXIDORREDUCTASAS
Catalizanreaccionesdeoxidorreduccin,es
decir,transferenciadehidrgeno(H)o
electrones(e)deunsustratoaotro,segn
lareaccingeneral:
AH2+BA+BH2

Clase2:TRANSFERASAS
Catalizanlatransferenciadeungrupo
qumico(distintodelhidrgeno)deun
sustratoaotro,segnlareaccin:
AB+CA+CB

Clase3:HIDROLASAS
Catalizanlasreaccionesdehidrlisis:
AB+H2OAH+BOH
Unejemploeslalactasa,quecatalizala
reaccin:
Lactosa+aguaglucosa+galactosa

Clase4:LIASAS
Catalizanreaccionesderupturaosoldadura
desustratos:
ABA+B
Unejemploeslaacetacetato
descarboxilasa,quecatalizalareaccin:
cidoacetacticoCO2+acetona

Clase5:ISOMERASA
Catalizanlainterconversindeismeros:
AB
Sonejemploslafosfotriosaisomerasaylafosfoglucosa
isomerasa
fosfotriosaisomeras
gliceraldehdo3fosfatodihidroxiacetonafosfato
fosfoglucosaisomerasa
glucosa6fosfatofructosa6fosfato

Clase6:LIGASAS
Catalizanlaunindedossustratoscon
hidrlisissimultneadeunnucletido
trifosfato(ATP,GTP,etc.):
A+B+XTPAB+XDP+Pi
Unejemploeslapiruvatocarboxilasa,que
catalizalareaccin:
piruvato+CO2+ATPoxaloacetato+
ADP+Pi

REGULACINDELAACTIVIDADENZIMTICA

Unamolculadeenzimanotieneporquactuarsiemprealamisma
velocidad.Suactividadpuedeestarmoduladapor:
cambiosenelpH
cambiosenlatemperatura
Loscambiospuedenalterareldesempeodelaenzima,desactivarlaodestruirla
presenciadecofactores:algunasenzimasnecesitanactivadoresparapoder
formarelcomplejoenzimasustrato
lasconcentracionesdelsustratoydelosproductosfinales
presenciadeinhibidores
modulacinalostrica
modificacincovalente
activacinporproteolisis
isoenzimas

EFECTODELpHSOBRELAACTIVIDAD
ENZIMTICA

EFECTODELpHSOBRELAACTIVIDAD
ENZIMTICA

Losenzimasposeengruposqumicosionizables
(carboxilosCOOH;aminoNH2;tiolSH;imidazol,etc.)
enlascadenaslateralesdesusaminocidos.
SegnelpHdelmedio,estosgrupospuedentenercarga
elctricapositiva,negativaoneutra.
Comolaconformacindelasprotenasdepende,enparte,
desuscargaselctricas,habrunpHenelcualla
conformacinserlamsadecuadaparalaactividad
cataltica.EsteeselllamadopHptimo.

EFECTODELpHSOBRELAACTIVIDAD
ENZIMTICA

EFECTODELATEMPERATURASOBRELA

ACTIVIDADENZIMTICA
Engeneral,losaumentosdetemperaturaaceleranlas
reaccionesqumicas:porcada10Cdeincremento,la
velocidaddereaccinseduplica.
Lasreaccionescatalizadasporenzimassiguenestaley
general.Sinembargo,alserprotenas,apartirdecierta
temperatura,seempiezanadesnaturalizarporelcalor.
Latemperaturaalacuallaactividadcatalticaesmxima
sellamatemperaturaptima.Porencimadeesta
temperatura,elaumentodevelocidaddelareaccin
debidoalatemperaturaescontrarrestadoporlaprdida
deactividadcatalticadebidaaladesnaturalizacin
trmica,ylaactividadenzimticadecrecerpidamente
hastaanularse.

EFECTODELOSCOFACTORESSOBRELA

ACTIVIDADENZIMTICA

Aveces,unenzimarequiereparasufuncinlapresenciade
sustanciasnoproteicasquecolaboranenlacatlisis:loscofactores.
LoscofactorespuedenserionesinorgnicoscomoelFe++,Mg++,
Mn++,Zn++etc.Casiunterciodelosenzimasconocidosrequieren
cofactores.Cuandoelcofactoresunamolculaorgnicasellama
coenzima.
Cuandoloscofactoresylascoenzimasseencuentranunidos
covalentementealenzimasellamangruposprostticos.
Laformacatalticamenteactivadelenzima,esdecir,elenzimaunida
asugrupoprosttico,sellamaholoenzima.
Laparteproteicadeunholoenzima(inactiva)sellamaapoenzima.

CINTICA ENZIMTICA
En reacciones no enzimticas
La velocidad de reaccin incrementa con las
concentraciones
En reacciones catalizadas enzimticamente
La velocidad solo incrementa con las concentraciones
hasta que alcanza un cierto valor lmite (saturacin
del enzima por el substrato):
V max.
Velocidad mxima
La mayor parte de las enzimas siguen estas
pautas de comportamiento cintico!

EFECTODELASCONCENTRACIONES
SOBRELAACTIVIDADENZIMTICA

Lavelocidaddeunareaccinenzimticadependedela
concentracindesustrato.LaFiguramuestralavelocidadde
unareaccinenzimticaa6concentracionesdistintasde
sustrato.
Adems,lapresenciadelosproductosfinalespuedehacerquela
reaccinseamslenta,oinclusoinvertirsusentido.

CINTICAENZIMTICA

Estudialavelocidaddelasreaccionescatalizadasporenzimas
Estosestudiosproporcionaninformacindirectaacercadelmecanismodela
reaccincatalticaydelaespecifidaddelenzima.
Lavelocidaddeunareaccincatalizadaporunenzimapuedemedirsecon
relativafacilidad,yaqueenmuchoscasosnoesnecesariopurificaroaislar
elenzima.
LamedidaserealizasiempreenlascondicionesptimasdepH,temperatura,
presenciadecofactores,etc,yseutilizanconcentracionessaturantesde
sustrato.Enestascondiciones,lavelocidaddereaccinobservadaesla
velocidadmxima(Vmax).Lavelocidadpuededeterminarsebienmidiendola
aparicindelosproductosoladesaparicindelosreactivos.

CINTICAENZIMTICA
Alseguirlavelocidaddeaparicindeproducto(ode
desaparicindelsustrato)enfuncindeltiemposeobtiene
lallamadacurvadeavancedelareaccin,o
simplemente,lacinticadelareaccin.Amedidaquela
reaccintranscurre,lavelocidaddeacumulacindel
productovadisminuyendoporquesevaconsumiendoel
sustratodelareaccin.Paraevitarestacomplicacinse
procedeamedirlavelocidadinicialdelareaccin(v0).

Representando la velocidad inicial de la reaccin enzimtica a diferentes concentraciones de

sustrato (resto de condiciones constantes), se demuestra que sta alcanza un valor mximo.

EFECTODELOSINHIBIDORESSOBRELA
ACTIVIDADENZIMTICA

Ciertasmolculaspuedeninhibirlaaccincatalticadeun
enzima:sonlosinhibidores.
Estosinhibidoresbienpuedenocupartemporalmenteelcentro
activoporsemejanzaestructuralconelsustratooriginal
(inhibidorcompetitivo)obienalteranlaconformacinespacial
delenzima,impidiendosuuninalsustrato(inhibidorno
competitivo).Incompetitivo:seunealaenzimaparainactivarla,
cuandostasehaunidoalsustrato

Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).
Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica
De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:
I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo
II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.

Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,

con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E+I

EI

ES + I

ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:

E+I

Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva
(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva
(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Anticompetitiva

Por tanto, en la inhibicin competitiva,

1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la

Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)
2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy
altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor
3. Cuanto ms pequeo sea el valor de Ki mayor ser la potencia
del inhibidor competitivo.

Representacin directa
Inhibicin competitiva

120

100

80

60

40

20

0
0

20

40

60

80

100

120

Inhibicin competitiva -Representacin recproca doble

1 /v

0 .0 7
0 .0 6

1/Vmax

0 .0 5
0 .0 4

-1/Km

0 .0 3
0 .0 2
0 .0 1

1 /s

0 .0 0
-0 .3

-0 .2

-0 .1

0 .0

0 .1
0 .2
0 .3
-1/(K
(1
+
i/K
m
i))

0 .4

0 .5

0 .6

Inhibidores
competitivos

Succinato deshidrogenasa
COO-

FAD

FADH2

COO-

CH2

CH

CH2

CH

COOSuccinato

SDH

COOFumarato

COOCH2
COOMalonato
COOC

CH2
COOOxalacetato

Anlogos de Estado de Transicin: Captopril

R
HN

CH COO-

C O
R'

C H
NH

HO C
C
O

Zn2+
Estado de transicin
de la ECA

CH COO -

C O
H3C C H
H C
H
S

Zn2+

Captopril

Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente
- Su accin no se describe por una constante de equilibrio Ki,
sino por una constante de velocidad ki:

E+I

- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los

inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.
- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.

Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados

Organofosfricos
Ser CH CH2

H3C

OH

Ser CH CH2
H3C
F

CH 3
CH
P

CH
H3C
CH 3

DFP:
diisopropil
fluorofosfato

CH3
CH

O P

CH
H3C
CH3

- Actan sobre enzimas sernicas

- nicamente sobre la Ser activa
- Insecticidas: Parathion, Malathion
- Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
- Neurogases

Ligandos de coordinacin de metales

Es el caso del ion cianuro, CN-

Se fija con gran afinidad a la sexta posicin de coordinacin

del Fe hemnico, impidiendo toda modificacin posterior.
Por ello acta sobre sistemas de Fe hemnico con la sexta
posicin de coordinacin libre, como la citocromo oxidasa,
de lo que deriva su elevadsima toxicidad

Substratos suicidas
(Inhibidores activados enzimticamente)
- Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera
especfica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos
- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la
molcula en una especie qumica muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola
- Tienen por tanto (a) la especificidad del inhibidor competitivo
y (b) la potencia de los inhibidores irreversibles

Modo de accin de los inhibidores suicidas

E+I

EI

EI*

E + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un

inhibidor competitivo convencional
2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I
en una especie altamente reactiva I*
3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola
de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.

Ejemplos de inhibidores suicidas, 1

- Sistema de la -lactamasa bacteriana
La utilizacin masiva de antibiticos -lactmicos (penicilinas,
sus derivados semisintticos y cefalosporinas) ha conducido a
la aparicin de resistencias a los mismos.
Los microorganismos resistentes a estos antibiticos lo son por
producir una enzima, la -lactamasa, que inactiva a los antibiticos -lactmicos.

Penicilina (activa)
S

R CO NH

CH3
CH3

N
O

COO-

-Lactamasa

R CO NH
O C HN
O-

CH3
CH3

COO-

c.peniciloico (inactivo)

Muy a menudo los preparados de penicilinas o penicilinas

semisintticas se formulan aadiendo un inhibidor suicida
de la -lactamasa, el cido clavulnico
O
C

N
O

CH 2OH
H

-Lactamasa

COO

C
O

C
O-

HN

CH2OH
H

COO-

c.clavulnico

CH CH 2
Ser

HN

CH 2OH
H

COO-

Esta molcula
reacciona con la
serina activa de la
-lactamasa,
produciendo su
inactivacin

Ejemplos de inhibidores suicidas, 2

- Sistema de la monoamino oxidasa (MAO) cerebral
Los estados depresivos, en general, estn relacionados con un
descenso en la concentracin de neurotransmisores adrenrgicos
(dopamina, noradrenalina, etc.) en determinadas regiones del
cerebro.
Una de las enzimas encargadas de la degradacin de estos
neurotransmisores es la monoamino oxidasa (EC 1.4.3.4).
Por tanto, la inhibicin de la monoamino oxidasa se emplea como
teraputica de los estados depresivos. Se han desarrollado muchos
inhibidores suicidas de la MAO

HO
HO

Noradrenalina
CHOH CH2 NH2

O2 + H2O

Monoamino
oxidasa
NH3 + H2O 2
HO
HO

CHOH CHO

Dihidroxifenilglicol

La MAO es una flavoprotena:

tiene un grupo prosttico
flavnico (FAD) fundamental
para la catlisis. Los inhibidores
suicidas de la MAO inactivan
al cofactor FAD.

H 3C

S H 2C

N,N dimetil
propargilamina
(pargilina)

NH
N

HC C CH N

Flavina

CH 3

CH 3

H 3C

Inhibicin suicida de la
MAO mediante Pargilina
E

N+

CH CH

H 3C

CH

H3C

S H2C

N
R

Flavina modificada

O
NH
NH

MODULACINALOSTRICADELA
ACTIVIDADENZIMTICA

Hayenzimasquepuedenadoptar2conformaciones
interconvertiblesllamadasR(relajada)yT(tensa).Reslaforma
msactivaporqueseunealsustratoconmsafinidad.Las
formasRyTseencuentranenequilibrioR<==>T
CiertassustanciastiendenaestabilizarlaformaR.Sonlosllamados
moduladorespositivos.Elpropiosustratoesamenudoun
moduladorpositivo.LasmolculasquefavorecenlaformaRpero
queactansobreunaregindelenzimadistintadelcentroactivoson
losactivadoresalostricos

FIN

MODELOCINTICODEMICHAELIS
MENTEN

Losestudiossistemticosdelefectodelaconcentracin
inicaldelsustratosobrelaactividadenzimtica
comenzaronarealizarseafinalesdelsigloXIX.Yaen
1882seintrodujoelconceptodelcomplejoenzima
sustratocomointermediariodelprocesodecatlisis
enzimtica.En1913,LeonorMichaelisyMaudMenten
desarrollaronestateoraypropusieronunaecuacinde
velocidadqueexplicaelcomportamientocinticodelos
enzimas.

EFECTODELpHSOBRELAACTIVIDAD
ENZIMTICA

Lamayoradelosenzimassonmuysensiblesalos
cambiosdepH.
Desviacionesdepocasdcimasporencimaopordebajo
delpHptimopuedenafectardrsticamentesuactividad.
Ej,lapepsinagstricatieneunpHptimode2,laureasa
lotieneapH7ylaarginasalotieneapH10.Como
ligeroscambiosdelpHpuedenprovocarla
desnaturalizacindelaprotena,losseresvivoshan
desarrolladosistemasmsomenoscomplejospara
mantenerestableelpHintracelular:Losamortiguadores
fisiolgicos.

Estructura del ATP: es un nucletido

compuesto por la adenina (base
nitrogenada), un azcar (ribosa) y tres
grupos fosfato.

Resumen de factores que afectan a la velocidad de reaccin

* Concentraciones de: Enzima (actividad enzimtica)
Substrato
Activadores
Inhibidores
* pH
* Temperatura
* Composicin y fuerza inica .
Actividad enzimtica
Medida de cantidad de enzima presente en el medio
de reaccin.
U.I. Cantidad de enzima que cataliza la formacin de
de un mol por minuto en condiciones prefijadas de antemano.
Catal : cantidad que cataliza 1 mol de substrato/segundo
1 UI =nano
16,67catales
= 6x=10
1 U.I. = 16.67
1 catal
67
x U.I.
107 U.I.
ncatal ; 1 catal

CINTICAENZIMTICA
Losprincipiosgeneralesdelasreaccionesqumicasse
aplicantambinalasreaccionesenzimticas.Poreste
motivo,antesdeempezarconlacinticaqumica,sevana
repasaralgunosconceptosbsicosdecinticaqumica.
Acontinuacin,sedescribirnlossiguientesconceptos:
Cinticaenzimtica
ModelocinticodeMichaelisMenten
ClculodelaKMylaVmaxdeunenzima
Actividadenzimtica

MODELOCINTICODEMICHAELIS
MENTEN