Dra. Ela Alvarado A.

CONTENIDO
1.

Revisin de los cidos nucleicos: organizacin, estructura y funciones.

2.

ARN : transcripcin y sntesis de protenas

3.

El gen: naturaleza y propiedades.

4.

El cdigo gentico nuclear, propiedades.

5.

El ADN mitocondrial: Caractersticas y propiedades. Mapa del ADNm.

6.

Variacin en la expresin de los genes : penetrancia y expresividad, pleitropa,

heterogeneidad gentica y expresividad de los genes y otros.

7.

Mtodos y tcnicas del ADN :

* Tcnicas de Southern Blood, PCR,
* El ADN recombinante : aplicaciones

8.

El Genoma humano : Mapeo de cromosomas, mapa gentico y mapa fsico

9.

Las mutaciones : Tasa de mutacin, mutaciones a nivel molecular, clasificacin

de las mutaciones

MODELO DE UN CROMOSOMA HUMANO

MOSTRANDO SUS NIVELES DE ORGANIZACIN

COMPONENTES DE LOS ACIDOS NUCLEICOS

BASES:
A. PURICAS
ADENINA

GUANINA

(6-aminopurina)

(2-amino-6-oxipurina)

B. PIRIMIDICAS

TIMINA

URACILO

(5-metio-2,4-dioxipiridina)

(2,4-dioxipirimidina)
CITOCINA

2-oxi-4-aminopirimidina

COMPONENTES DE LOS ACIDOS NUCLEICOS

AZUCARES
DNA contiene
desoxirribosa
RNA contiene
ribosa

FOSFATO

DESDE LOS
GENES A LAS
PROTEINAS

UNIDAD DE TRANSCRIPCION DEL ADN

(Cadena peptidica de la Globina Humana)

RNA
SPLICING

TRADUCCIN Y SNTESIS DE PROTENAS

EL CODIGO GENETICO NUCLEAR

PROPIEDADES DEL CDIGO GENTICO

1. Es universal
2. Es degenerado
3. Es lineal
4. La unin de bases es especfica
5. Es un cdigo de tripletes
6. El codn que inicia un gen el AUG (metionina)
7. Los codones de terminacin de un gen son: UUA, UAG, UGA.
8. Es variable
9. Es estable
10. Es una estructura totalmente decifrada (se basaron en la snteiss
de cadenas de polinucltidos desiguales, ej. UUU- Phe-.

EL GEN: PROPIEDADES
Capacidad de dirigir la formacin de una rplica exacta de
s mismos.
Capacidad de mutar, esto es, de sufrir alteraciones sin
perder la capacidad de reproducirse.
Capacidad de dirigir la formacin de enzimas u otras
protenas.

En cada opern se diferencian dos clases de genes

1.

Genes estructurales codifican enzimas (E1, E2, E3, ...)

2.

Gen regulador, codifica una protena represora (PR) que puede encontrarse
en la forma activa (PRa) o inactiva PRi). Agente que controla la expresin.

Adems otras regiones:

Promotor (P), zona donde se une la ARN polimerasa.
Operador (O), zona reconocida por la proteina represora activa. Cuando la PR a
se une al O, bloquea el avance de la ARN polimerasa.

VARIACIONES EN LA EXPRESION DE
LOS GENES
Penetrancia y Expresividad :
* Penetrancia : Capacidad del gen para alcanzar una
expresin.
Penetrancia reducida : Algunos individuos que
poseen el genotipo apropiado no expresan este
carcter.Ejm.Retinoblastoma (tumor ocular m.)HAD
* Expresividad : Gama de fenotipos que proceden de
un determinado genotipo.
Expresividad variable: Ejm. Neurofibromatosis tipo
I, Campodactilia, Fibrosis qustica, Osteognesis I.

RETINOBLASTOMA
( Penetrancia reducida)

EXPRESIVIDAD VARIABLE:
( Campodactilia )

EXPRESIVIDAD VARIABLE : Albinismo

 Pleitropa : (Un gen varios efectos).

* Genes pleitrpicos: Efectos fenotpicos mltiples

causados por un solo gen mutante o por un par de
genes.
- Sndrome de Marfn (mutacin de un solo gen
produce patologa en ojos esqueleto y sistema cardio
vascular) Cromosoma 15q (gen codificador de la
fibrilina).
- Fibrosis qustica: ( puede afectar glndulas
sudorparas pulmones y pncreas).Cromosoma 7q31
- Anemia de clulas falciformes.(eritrocitos ,hueso y
bazo)

PLEITROPIA : S. de Marfan

 Heterogeneidad gentica : (Varios genes un solo

efecto)
* Osteognesis Imperfecta : ( AD y AR) Mutacin de genes causa
estructura anormal de la triple hlice del procolgeno.
Codificado por 2 genes ( crom.17 y otro en el crom.7 ).
Sndrome de Waardenburg :(sordera profunda infantil con
alteraci pigmentarias causados por diferentes genes recesivos en
diferentes loci.(padres recesivos tienen hijos de3 tipos : todos
sordos, todos oyentes y otros sordos y oyentes).
Heterogneidad en las diferentes distrofias musculares:
- Duchenne y tipo Becker ligados a X,
- Distrofia muscular risomlica AR ,
- Distrofia muscular facioescpulo humeral AD.
(con formas frustradas, unas ms severas que otras.)

HETEROGENEIDAD GENETICA:
(varios genes un solo efecto) Osteognesis I

HETEROGENEIDAD GENETICA
( S. de Waardenburg )

HETEROGENEIDAD :
(En las distrofias musculares)

CARACTERES INFLUIDOS POR EL SEXO :

( expresados en ambos sexos y con frecuencias diferentes)

Fenotipo
Calvicie

Diferencia sexual
AD en v Gran exceso en varones

Genetica

AR en m

Hiperplasia
suprarrenal congenita

AR

Se reconoce mas a
menudo en mujeres

Hemocromatosis
Hipogonadismo
Miopa limitada a las
mujeres

AD
AD

Exceso en varones
Limitado a varones
Limitado a mujeres

Pubertad precoz

AD

Limitado a varones

AR

CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO

( Pubertad precoz )

Nios afectados son mas altos que los de su edad, pero pronto interrumpen su
crecimiento y son bajos). Difcil de diferenciar de la HR ligada a X.

CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO

(S. de Feminizacin testicular)

Frmula cromosomica : 46, XY

Tipo de herencia: AR ligado a X

EDAD Y EXPRESION DE LOS GENES:

Muchos genes actan antes del nacimiento o en las primeras
fases del desarrollo
Cuando el nio comienza su vida independiente puede ser
afectado: fenilcetonuria, galactosemia (enfermedades metab.)
Corea de Huntington : HAD, locus 4p 16.3, Gen CAG 30-35
(premutantes). repeticiones de 35 a 40 (mutantes).

ADN MITOCONDRIAL (ADN mt)

PROPIEDADES DEL ADNmt

Doble hlice pequea de 16,579 pb.
Forma circular, contiene 37 genes para 22 ARNt.
Sus codones de terminacin no estn codificados por el
propio ADNmt. Parece que codifica solo algunas
protenas mitocondriales.
Las enzimas implicadas en su replicacin, transcripcin y
traduccin son codificadas por genes nucleares.
Tiene distribucin asimtrica de G y C generando:
Una cadena pesada (H) rica en G
Otra cadena ligera (L) rica en C.

DIFERENCIAS CON EL ADN NUCLEAR

UGA

Codifica para triptofano y no

para terminacin

AUA

Codifica para metionina en

vez de isoleucina

AGA y AGG

Actan como codones de

terminacin en vez de
codificar arginina.

AUA y AUU

Actan como codones de

inicio junto a AUG

A=ATPasa; CO=Citocromo oxidasa; Citb=Citocromo b, ND=NADH-coenzima Q

reducasa; OH, OL=Orgen de la replicacin de las cadenas H y L; 12S, 16S=ARNr,
N/C=Regin no codificadora, ll=ARNt.

TECNICA DEL SOUTHERN

ELECTROFORESIS DE ADN

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA

(PCR)

Para amplificar cuanto se quiera, segmentos especficos de ADN situados

entre los primers que se colocan a ambos lados de la zona que se quiera

ADN RECOMBINANTE
La tcnica del ADN recombinante son mtodos que permiten
cartografiar los genes humanos sin necesidad de conocer la
naturaleza del gen ni el producto del mismo. Consiste en la
reunin artificial de molculas de ADN o parte de esas
molculas que no se encuenran juntas en la naturaleza y
provienen de diferentes organismos.
Se agrupan en dos reas principales.
1. Las tcnicas del clonado del ADN
2. Los mtodos de anlisis del ADN

REQUISITOS BSICOS PARA CLONAR ADN

1. Un mtodo que permite colocar juntos a porciones de ADN
procedentes de distintos organismos.
2. El empleo de una forma de autoreplicacin del ADN conocido
como vector de clonacin que se une a un trozo de ADN que se
va ha clonar.
3. El traslado de un vector que lleva una porcin de ADN al interior
de una clula donde tiene lugar la replicacin.
4. Un mtodo para identificar las clulas que contiene cualquier
porcin deseada del ADN.

ENZIMAS DE RESTRICCION
Bacterias de donde se obtienen y secudncias de ADN que reconocn
(incluye el sitio donde lo rompen)
ENZIMA

BACTERIA

ROMPIMIENTO (*)
5
3

Alul

Athrobacter luteus

AG*CT

Mspl

Especies de Moraxella

GC*CC

Hinfl

Haemophilus influenzae Rf

G*ANTC

BamHl

Bacillus amyloliquefaciens H

G*GATCC

EcoRI

Escherichia coli RY13

G*AATTC

Pstl

Providencia stuartii

CTGCA*G

A=Adenina; C = Citocina; G = Guanina, T = Timina, N = cualquier base

VECTORES DE CLONACIN
Agentes transportadores, son pequeas molculas de ADN
con capacidad de autorreplicacin que se utilizan para
transferir segmentos de ADN extraos entre clulas
husped.
PRINCIPALES VECTORES DE CLONACION
1.

PLASMIDOS

2.

FAGICOS

3.

COSMIDOS

4.

CROMOSOMAS ARTIFICIALES (YACS)

PLASMIDOS

Son organismos muy sencillos que se encuentran en el

citoplasma de las clulas bacterianas.

Molculas de ADN circular de tamao menor que un

cromosoma.

Frecuentemente contienen 1 2 genes que codifican

resistencia a los antibiticos.

Fueron los primeros vectores de donacin fciles de aislar y

purificar, pueden ser reintroducidos en una bacteria por
transformacin.

El plsmido ms usado es el pBR322, contiene genes que

codifican a la ampicilina y a la tetraciclina y muchos sitios de
restriccin.

METODOS DE INTRODUCCION DEL VECTOR

1. Transformacin

La clula capta molculas de ADN que se encuentra en el medio

externo, las introduce en su interior y las incorpora a su genoma

Ocurre espontneamente en ciertos tipos de bacterias y se

consigue artificialmente sometiendo a la clula bacteriana a
tratamientos fsicos y qumicos.

2. Transduccin.
Consiste en introducir el ADN en una clula hospedadora mediante un
virus
Se observa:
(1) El virus se aproxima a la
bacteria llevando un
genoma con el gen que le
interesa donar.
(2) El virus se pone en
contacto con la bacteria
donde se forma un poro.
(3) El virus inyecta su ADN al
interiror de la clula
bacteriana.

Mtodos de introduccin del vector.

El siguiente paso ser
introducir el vector de
clonacin que contiene el gen
que se quiere clonar en la
clula hospedadora.
Existen varios mtodos que
dependern del tipo de clula
fundamentalmente. En
bacterias se realiza mediante
estos procesos:

Elgenesinsertadoconuna
finaagujafabricadaporlos
cientficos.

CROMOSOMAS ARTIFICIALES

Transportan grandes cantidades de material gentico. Por

esto son muy tiles en la secuenciacin del genoma.

Cromosoma artificial de levadura: (YACS)(Yeast artifitial

chromom
* Es uno de los ms utilizados.
* Los segmentos de ADN contienen todos los elementos
necesarios para propagar un cromosoma en levaduras.
* Contienen fragmentos de ADN de 100 a 2000 kb de tama
pueden introducirse en clulas de S. cereviciae y sern
replicados juntos con los cromosomas verdaderos.

 Cromosoma artificial bacteriano:(BAC)(Bacterial artificial

chromome)
* Es un vector de donacin alternativo, basados en
plsmidos de fertilidad de E. Coli.

* Facil de reproducir y manipular, no sufre

recombinacin con la misma faciliad de los YACS.

* Se insertan un fragmento de ADN foraneo hasta de 30

kb de longitud mediante electroporacin.

APLICACIONES DEL ADN

RECOMBINANTE
1. RFLP (Polimorfismos de longitud de los fragmentos de
restriccin)
2. CARTOGRAFIA DE LOS PROCESOS HEREDITARIOS
3. PROYECTO GENOMA HUMANO
4. DIAGNOSTICO DE LOS PROCESOS HEREDITARIOS
5. TERAPIA GENICA

ANALISIS DE LOS RFLP

Son variedades de la longitud de los fragmentos de ADN

generados por una endonucleasa de restriccin.

Se heredan en forma codominante.

Los RFLP se usan como marcadores de genes o cromosomas

especficos.

El fenotipo depende de la obtencion de los fragmentos de ADN

que son de diferentes tamaos.

Los fragmentos de RFLP se usan para cartografiar un

determinado cromosoma empleando hbridos de cromosomas
humanos en distintas combinaciones.

Los RFLP son de diferentes longitudes en diferentes personas

que pueden reconocerse por la movilidad alterada de los
fragmentos en la electroforesis.

CARTOGRAFIA DE LOS PROCESOS

HEREDITARIOS
Para asignar un gen en un determinado cromosoma, es necesario:
* Una gran familia a cuyo travs se haya transmitido un proceso
hereditario.
* Una coleccin de RFLP (almenos 1 de cada cromosoma humano)
PROCEDIMIENTO:
* Anlisis del rbol genalgico para averiguar el tipo de herencia
del defecto gentico y para identificar a los afectados.
* Pruebas a cada miembro de la familia para averiguar el modelo de
herencia de los marcadores de RFLP especificos de cada cromoso.

PROYECTO GENOMA HUMANO

OBJETIVO: Determinar la localizacin de los genes que contiene el
GH y analizar la estructura de esos genes a nivel de la secuencia de
los nucletidos.
PROCEDIMIENTO:
* Construir un mapa gentico de alta resolucin de cada uno de los
cromosomas.
* Utlizando porciones del mapa genetico se elabora un mapa fsico
de alta resolucin.
* A partir del mapa fsico se obtendr una serie de secuencias
yuxtapuestas del ADN clonado.
* Se determinar la secuencia de cada uno de esos clones y la
secuencia de los nucleotidos conservados en un banco de datos de
un ordenador.

EL GENOMA HUMANO

El mapa genetico humano como resultado del estudio conjunto de la investigacin

pblica y privada con los 30,000 genes en los 23 pares de cromosomas

APLICACIONES MEDICAS DE LA
INGENIERIA GENETICA
* Produccin de protenas de utilidad medica (como la
somatostatina, la insulina, la hormona del crecimiento
humano, los interferones).

* Utilizacin de plantas desarrolladas mediante ingeniera

gentica para producir vacunas orales.

* Vacunas sintticas (por ejm: vacunas contra el paludismo y la

rabia) mediante tcnicas recombinantes.

CLONACION DE MAMIFEROS (OVEJA DOLLY)

1986: se autorizan las pruebas

clnicas de la vacuna contra la
hepatitis B obtenida mediante
ingeniera gentica.
1987: propuesta comercial para
establecer la secuencia completa
del genoma humano (proyecto
Genoma),
compuesto
aproximadamente por 100.000
genes.
1989:comercializacin
de
las
primeras mquinas automticas
de secuenciacin del ADN.
1994:
se
comercializa
en
California el primer vegetal
modificado genticamente (un
tomate)
1997: Clonacin del primer
mamfero, una oveja llamada
Dolly

cM

MAPA GENETICO
DEL CROMOSOMA 1

Marcadores genticos: Son variedades

moleculares obtenidos por tecnicas de
ADN recombinante

MAPA FISICO
DEL CROMOSOMA 1
1,990

CROMOSOMA -1 1,995

MUTACION
Definicin: Es todo cambio en el material gentico que se debe a la
variacin gentica de los seres humanos y de otros organismos.

Tipos:
Microscpica,
Submicroscpica (mutaciones de punto) sustitucin de una
base por otra en el DNA.

Deteccin:
Cmo se produce una mutacin?
1.- En organismos inferiores se pueden disear experimentos.
2.- En el genoma humano son indirectos y deducibles por inferencia
(basndose en el Arbol Genealgico)

TASA DE MUTACIN
Definicin: Nmero de veces que se producen alelos mutantes
encada locus y en cada generacin.
Frecuencia: En humanos es de 10-5 10-6 gametos por generacin
Se deben diferenciar :
1.- Mutaciones recientes ,
2.- Mutaciones pre-existentes que se producen en el pasado, y
permite un fenotipo normal porque:
2.1- Existen genes mutates al fenotipo normal heredado por
uno de los padres.
2.2- Las mutaciones dominantes no siempre tienen el 100%
de penetrancia, por tanto algunas veces no se expresan.
2.3- Las mutaciones dominantes se detectan fcilmente

2.4 - Las mutaciones que el propio individuo acumula durante su

existencia:
* Por mutacin expontnea, debido a mecanismos normales
en la duplicacin o reparacin del DNA.
* Por mutgenos: fsicos, qumicos y biolgicos. Ejm.
Radiaciones que producen transiciones o tranversiones,
desaminacin y metilacin.
Estudios realizados demuestran que las mutaciones son
fenmenos raros en el GH observados en 1/ 1000,000 de copias
que genera 6-7 millones de genes mutantes en cada generacin.
Disminuye por factores como:
* Naturaleza redundante del cdigo gentico,
* Carcter recesivo de la mayoria de las mutaciones,
* Tasa de muerte temprana que se asocia a muchas
enfermedades hereditarias.

MUTACIONES A NIVEL MOLECULAR

Las mutaciones en la molcula del ADN han aportado pruebas

que existe una unin directa entre el gen, la proteina y el
fenotipo.

Las mutaciones pueden aparecer expontneamente como

consecuencia de un error en la replicacin del ADN o como
resultado de cambio de los tomos en la base de los
nucletidos.

La mutacin por cambio de lectura produce una modificacin

en la lectura de los cdones que suelen acarrear alteraciones
espectaculares en la estructura y funcin de los pptidos
elaborados.

FACTORES QUE AFECTAN A LA FRECUENCIA DE

MUTACIONES EN LOS GENES :
Variaciones se deben a:
1.- Tamao del gen: DMD 2000,000 de Pb .

NF1 2,000 aa = 300,000 Pb

2.- Secuencia de los nucletidos: Xfrgil CGG se repiten
de 6 50 veces en no afectados y en afectados > de 50.
3.- Modificaciones qumicas expontneas:Ej. HbA y Hb S

FRECUENCIA DE MUTACIONES EN EL SER HUMANO

Rasgos

Acondroplasia
Aniridia
Retinoblastoma
Osteogenesis imperfecta
Neurofibromatosis
Enfermedad poliquistica renal
Sindrome de Marfan
Sindrome de Von-Hippel-Landau
Distrofia Muscular de Duchenne

Mutantes/milln Frecuencia
de gametos
de la
mutacin
10
2.6
6
10
50-100
60-120
4-6
<1
50-100

1 x 10 -5
2.6 x 10 -6
6 x 10 -6
1 x 10 -5
0.5-1 x 10 -4
6-12 x 10 -6
4-6 x 10 -6
1.8 x 10 -7
0.5-1 x 10 4

Secuencia de los ocho primeros aminocidos de las cadenas

de la HbA y HbS. En posicin 6 la HbS tiene Val en lugar
de Glu, lo que se debe al cambio de un nucletido del codn
GGA en la HbA por GUA en la HbS.
Codn

Aminocido

HbA
GUU
CAU
UUA
ACU
CCU
GGA
GAA
AAA

Codn

Aminocido

HbS
Valina
Histidina
Leucina
Treonina
Prolina
Acido glutmico
Acido glutmico
Lisina

GUU
CAU
UUA
ACU
CCU
GUA
GAA
AAA

Valina
Histidina
Leucina
Treonina
Prolina
Valina
Acido glutmico
Lisina

CLASIFICACION DE LAS MUTACIONES

1. Respecto a su mecanismo de Produccin
1.1 En punto Susticiones o
Transiciones

Cambio de una base prica o

pirimidica por otra prica o
pirimidica.

Transversiones Cambio de una base prica por una

pirimidica o visceversa.
1.2 Fuera de Adiciones
fase
Deleciones o
inserciones

Se adiciona 1, 2 o mas bases.

Se suprimen 1, 2 o ms bases.

2. Respecto a su Expresin
2.1 Letales

La preencia de la mutacin es incompatible con

la vida.

2.2 Subletales

El cambio producido por la mutacin permite la

vida pero se presentan alteraciones estructurales
o funcionales.

2.3 Condicionales El efecto de la mutacin solo se observa en

determinadas condiciones, es decir por
exposicin a farmacos.
2.4 Somaticas

El cambio por la mutacin afecta a algunas

estructuras del organismo

2.5 Geneticas

La mutacin altera la informacion genetica de los

gametos y los descendientes.

3. Respecto al efecto que producen en el organismo que las

presenta
3.1 Positivo

Confieren al organismo una nueva ventaja

respecto a su ambiente, una mayor facilidad de
adaptacin o nuevas aptitudes respecto a otro.

3.2 Negativo

Pueden restar capacidades de sobrivencia, de

adaptacin o estructura. Son los ms frecuentes.
Ej. Producen los padecimientos hereditarios
(autosmicos recesivos).

3.3 Neutro

Pueden o no conferir cambios.

MUTAGENOS
1. FISICOS
* RADIACIONES
- Radiaciones ionizantes (rayos X, rayos , , , etc)
- Luz ultravioleta
2. QUIMICOS (Tabaco, alcohol, alquitran, etc)
3. BIOLOGICOS
* Virus (retrovirus)