Universidade Federal de Viosa

campus Rio Paranaba

CROMATOGRAFIA EM PAPEL
Alunas:
Isadora de Oliveira - 0039
Adriene Aparecida - 1200
Milena Moura - 1666
Beatriz Alves - 2440

Seminrio apresentado
como partes das
exigncias da disciplina
QAM-311

Introduo
Tcnica simples;
Pequena quantidade de amostra;
Boa capacidade de resoluo;
Separao e identificada de composto polares
com antibiticos hidrossolveis, cidos orgnicas
e ons metlicos.
2

 classificada como de partio lquido-liquido;

Separao e distribuio depende da solubilidade;
Geralmente a gua utilizada como fase mvel e
papel(celulose)como fosse estacionaria.

 A forma mais simples de CP a cromatografia

ascendente(por capilaridade).

Figura 1: http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm
4

Figura 2: http://www.biomedicinabrasil.com/
5

 Mistura de componentes coloridos;

Misturas incolores.

Figura 3: http://www.farmacognosiaws.no.comunidades.net/
6

 Procedimento

Figura 4:http://cromatografiafametro.blogspot.com.br/
7

 A anlise qualitativa de uma substncia realiza-se

atravs da cor da mancha e de seu fator de

retardamento,

Rf,

determinado

atravs

expresso:

Rf=

, ( )
,( )

da

Rf,

um

valor

caracterstico

de

uma

determinada substncia, desde que observem as

caractersticas do papel, a qualidade e quantidade

da

fase

mvel,

temperatura,

volume

concentrao da substancia aplicada.

Consideraes sobre a cromatografia

Amostras da ordem de microgramas e miligramas.

Resoluo depende da concentrao e do dimetro da

mancha aplicada.
A anlise pode demora minutos ou at horas.
Fcil eluio das substncias.
Fase mvel saturada com gua.
No se usa substancias corrosivas.
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 Papel:

Tira retangular

ou folha circular, uniforme em

composio e superfcie.
Papel de uso especial: Papel acetilado, Papel
impregnado, Papel carregado, Papel de fibra de
vidro, Papel tratado, Papel recoberto por adsorvente.

11

12

 Fase mvel:

Varivel de maior efeito, com anlise da natureza

qumica, viscosidade e polaridade.

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14

 Efeitos da temperatura:
Temperatura controlada e constante, dependente
de cada amostra.

Pode-se controlar com o preparo de uma soluo-

padro semelhante a amostra, com analise junto a

amostra
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 Cromatografia em papel com fase normal:

Papel saturado ou tratado com fase estacionria
polar e desenvolvimento fase mvel apolar.

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Cromatografia: fase normal e reversa

Fase estacionria aquosa
Papel saturado com vapor de gua.
Fase estacionria no aquosa
Papel embebido em soluo de acetona e
dimetilformamida.

17

18

 Cromatografia em papel com fase reversa:

Papel tratado com substncias hidrfobas em

solventes orgnicos.
Fase mvel polar

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TCNICA DA CROMATOGRAFIA EM
PAPEL

Amostra dissolvida em solvente voltil (ter etlico,

clorofrmio, acetato de etila, acetona, etanol);
Quanto menor a quantidade de amostra, maior a

possibilidade de uma boa resoluo;

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 Preparam-se

solues

padro

qualitativamente

semelhantes as das amostras a serem analisadas e

em concentraes diferentes, essas solues so
aplicadas no papel, desenvolve-se o cromatograma, e

revela-se pelo agente cromognico, e ento verificase qual a diluio mnima dos padres que pode ser
detectadas a partir da reao cromognica.
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FIGURA II-2 : Exemplos da aplicao de padro, para determinao da concentrao mnima detectvel, usando
padres a e b, e o volume da amostra ideal para as analises, com as amostras c e d.
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MTODOS PARA DETECTAR AS

SUBSTNCIAS SEPARADAS

Mtodos

Qumicos:

A soluo

reveladora

borrifada sobre o papel usado na cromatografia,

sendo cada amostra uma mistura de substncias

como ons inorgnicos, carboidratos e inseticidas.

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 Mtodos Fsicos: O papel, quando tratado com

soluo de fluorescena , destaca as manchas
tornando-as amarelo-esverdeadas, brancas ou
azuis. As substncias que absorvem a luz UV

aparecem como manchas escuras sobre um fundo

fluorescente azulado.
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 Auto-radiografia:
correspondentes

as
aos

manchas
compostos

separadas

radioativos

so

fotograficamente detectadas mantendo-se o papel

seco, depois do desenvolvimento, em contato com um

filme de raios X em uma cmara escura.
Contadores de cintilao lquida: a mancha contendo
composto radioativo extrada do papel e adicionada
de solues de cintilao para posterior anlise
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 Mtodos biolgicos e enzimticos: Os mtodos para

localizar antibiticos por bio-autografia baseiam-se na

inibio do crescimento de certos microorganismos.
Localizao

de

amilases:

Desenvolve-se

cromatograma, borrifa-se o papel com soluo de

amido, incuba-se cerca de 24 horas temperatura
controlada e depois se borrifa com soluo de iodo.
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Anlise Qualitativa

Na cromatografia em papel, a anlise qualitativa realizada

normalmente em funo do e da cor apresentada
diretamente.
Quando a substncia for desconhecida, depois da tcnica
de separao, deve ser eluda do papel e submetida a uma
tcnica instrumental adequada.
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Anlise Quantitativa

Deve-se primeiramente fazer a anlise qualitativa;

Anlise pode ser feita diretamente no papel ou

depois de extrada dele;

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Anlise quantitativa diretamente

sobre o papel
COMPARAO DA INTENSIDADE DAS CORES
REVELADAS;
Comparao da intensidade da cor e tamanho das
manchas, observa-se o que mais se aproxima, resultado
semiquantitativo e com margem de erro de 20%.

29

 REA DA MANCHA;
Depois do cromatograma pronto, deve-se recortar a
rea da mancha, pesar e construir um grfico da

massa em funo do logaritmo das quantidades da

substncia presente na mancha.

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 ANLISE DENSITOMTRICA;

Utiliza-se um densitmetro na amostra e na

substncia padro;
Densitmetro:
sm
(lat
densit(ate)+o+metro) 1 Instrumento
destinado a medir a densidade ptica. 2
Instrumento, comumente foteltrico ou
visual, para medir a densidade
fotogrfica, mediante a luz transmitida
ou refletida.3 Aparelho medidor de
densidade da tonalidade, usado no
controle de fotolitos e provas, tanto
para preto e branco como para cores.
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Anlise quantitativa sobre extrao da

substncia

Faz-se o cromatograma normalmente, aplica-se

um agente cromognico para formao do
derivado colorido. Extrai-se esse derivado e faz-se
a leitura em espectrofotmetro e compara-se o
resultado com o da curva de calibrao;

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Aplicaes da cromatografia em papel

til da separao e identificao de compostos
polares, substncias hidrfilas, como antibiticos
hidrossolveis, cidos orgnicos e ons metlicos;
til para acompanhar a sequncia da reao qumica
ou a separao de componentes de uma amostra;

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Concluso

Embora tenha sido substituda pela cromatografia em

camada delgada de celulose em muitas aplicaes,
devido a maior eficincia, a cromatografia em papel

ainda bastante utilizada no controle de qualidade

de compostos raiomarcados e outas aplicaes que
envolvam compostos radioativos.
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Referncias bibliogrficas

COLLINS,
C.H.,
BRAGA,
G.L.,
P.S. Fundamentos de cromatografia.
Editora da UNICAMP, 2006. 452p

35

BONATO,
Campinas: