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temario

DIAPO 1
Concepto-generalidades
DIAPO 2
Mtodos diagnsticos------fundamentos
DIAPO 3
Interpretacin de mtodos (sensibilidad, especificidad, controles)
DIAPO 4
Protocolos y modificaciones
DIAPO 5
Conclusiones
DIAPO 6
Imagen comparativa e interpretacin

Mtodo para la identificacin de amiloide:

rojo congo alcalino
Concepto y generalidades
Amiloidosis es una enfermedad caracterizada por depsito de material amorfo,
eosinfilo, predominantemente extracelular. Aparecen como depsitos
desprovistos de estructuras a microscopa de luz y que se tien con eosina. Se
ve en procesos patolgicos predominantemente extracelular.

En general, su composicin es heterognea, dependiendo del tipo de amiloide,

localizacin, origen, antigedad, etc. Para determinar la antigedad se considera
principalmente el tamao.

Los mas comunes de estudiar son:

AL: amiloide light. El precursor es una cadena liviana lambda completa de Ig.
AA: derivado del precursor amiloideo srico, protena producida por el hgado
(es una prealbmina), es una protena nica y tpica que secreta el hgado. Casi
siempre es secundaria a algn proceso crnico.

Mtodo para la identificacin de amiloide:

rojo congo alcalino

Mecanismo de accin:
El mtodo del rojo congo es una reaccin selectiva porque:

El rojo congo es un colorante de estructura lineal, que por medio de puentes de

hidrgeno se une a la fibrilla de amiloide. Esto se realiza gracias a la presencia
de grupos OH en distancias determinadas y peridicas en la molcula del
amiloide.

La coloracin que se obtiene es de color rojo ladrillo y, a microscopa de

polarizacin es birrefringente. La estructura plegada de la fibrilla de
amiloide, en su mayor o menor expresin, determina la intensidad de la
birrefringencia ( directamente proporcionales).

El permanganato de potasio elimina la unin inespecfica favoreciendo slo las

uniones puentes de hidrgeno. ya que permite separar los tipos de amiloide del
amiloide AA, ya que ste no se tie y, por lo tanto, no da la birrefringencia.

Mtodo para la identificacin de amiloide:

rojo congo alcalino
Interpretacin de mtodos (sensibilidad, especificidad, controles)

Rojo congo alcalino

Localizacin sustancia a identificar

(+)

Comparacin con control

Rojo ladrillo suave

Intensidad reaccin

(++)

Especificidad reaccin

(+)

Mtodo para la identificacin de amiloide:

rojo congo alcalino

Protocolos y modificaciones

Protocolo (Carson)

Protocolo de Bennhold (AFIP)

Protocolo Modificado

Desparafinar, Hidratar hasta agua

destilada
hematoxilina de Harris con cido
actico 2 min
H2O corriente varios minutos
Colocar solucin de sal alcalina 20
min.
Colorear en solucin Rojo congo 20
min.
Alcohol absoluto 3 cambios 5 a 6
pasadas OH 96
Deshidratar en OH 100, Aclarar y
Montar.

Desparafinar, Hidratar hasta agua

destilada
Colorear con solucin Rojo congo
filtrado durante 1h
H2O destilada
Diferenciar en solucin de sal
alcalina.
H2O corriente 5 min
hematoxilina de Mayer 5 min
H2O corriente 5 min
Deshidratar en OH 96, 100 Aclarar
en xilol 2 cambios y Montar.

Desparafinar, Hidratar
hematoxilina de Harris 5 min
H2Od 3 baos
Colocar solucin de OH alcalino 20
min.
Colorear en solucin Rojo congo 20
min.
Deshidratar en OH 100, Aclarar y
Montar.
Resultados: Sustancia amiloide de
color rojo ladrillo.

Mtodo para la identificacin de amiloide:

rojo congo alcalino
Conclusiones
En el corte de tejido humano existen evidencia de amiloide, ya que era un foco
de lesin amiloidea. Control (+). Para la identificacin concreta debera
mirarse con polarizacin, dando birrefringencia. La posibilidad de que la
reaccin haya dado negativa por culpa de errores tcnicos fue descartada
parcialmente gracias al control positivo que se empleo.

Se esperaria:

Resultados: Sustancia amiloide de color rojo ladrillo.

Fibras elsticas, lmina basal y en estructuras fuertemente acidoflicas como
los grnulos citoplasmticos de los eosinfilos y clulas de Paneth tambin se
tien de color rojo.

Mtodo para la identificacin de amiloide:

rojo congo alcalino

Imagen comparativa e interpretacin

Mtodo para la identificacin de

glicoprotenas de la lmina basal:
metenamina de plata.
Materiales y mtodos
En la realizacin de esta tcnica, se emplearon cortes de Rion humano,
los que haban sido fijados en formalina. Estos tejidos se deshidrataron
en una escala ascendente de alcoholes, se colocaron en xilol como
lquido intermediario (3 baos), y se incluyeron en parafina. Se
realizaron cortes de 3 M en un micrtomo rotatorio.
La tcnica realizada es la siguente Metinamina Plata sin tincin nuclear.
Tambin se realiz H-E.
Control de la tcnica de metenamina de plata utilizando rin humano
fijado en formalina.

Mtodo para la identificacin de

glicoprotenas de la lmina basal:
metenamina de plata.
Mtodos diagnsticos:
Al hacer una descripcionhistologica por medio de H-E se
obserba un organo parenquimatoso rodeado de una serosa,
este organo se divide en corteza la cual esta compuestra
por corpusculos renales, TCP y TCD. La otra parte es la
medula que contiene Asa de henle y capilares fenetrados.
Mecanismo de accin
El cido perydico oxida selectivamente a los grupos OH
unidos a tomos de carbono adyacentes. De esta manera,
mediante fisin de enlaces carbono-carbono intermedios
con produccin de dos grupos aldehdos. As, al haber
aldehdos libres, la plata interactua con estos grupos
reduciendose a plata metlica.

Mtodo para la identificacin de

glicoprotenas de la lmina basal:
metenamina de plata.
Metenamina de plata sin
tincin nuclear

Control (Rion)

Localizacin
sustancia a
identificar

Lamina basal de epitelios de revestimiento

Comparacin
con control

Color caf oscuro

sensibilidad

especificidad

s, aunque hay otras estructuras

impregnadas en el tejido.

Fracaso y
posible causa

Falla del contraste, reactivo expuesto a

oxidacion

Mtodo para la identificacin de

glicoprotenas de la lmina basal:
metenamina de plata.
PROTOCOLO

Modificaciones

Desparafinar, hidratar
cido perydico 15 min.
H2Od x3.
metenamina-plata a 60C durante 60 -90 min hasta que la
preparacin presente un color caf oscuro (controlar al
microscopio).
H2Od x3
Virar en cloruro de oro 0.1% 1 min.
H2Od x3 .
Tiosulfato de sodio 2% 2 - 4 min.
H2Od 5 min.
Contraste Verde luz 1%. (20-30 segundos).
Deshidratar, aclarar , montar

Desparafinar, hidratar
cido perydico 15 min.
H2Od x3.
metenamina-plata a 60C 90 min hasta que la
preparacin presente un color caf oscuro (controlar al
microscopio).
H2Od x3 .
Tiosulfato de sodio 2% 2 - 4 min.
H2Od 5 min.
Contraste Verde luz 1%. ( 5min).
Deshidratar, aclarar , montar

Mtodo para la identificacin de

glicoprotenas de la lmina basal:
metenamina de plata.
Conclusiones
La identificacin de la membrana basal en los tejidos es de suma importancia,
sobre todo en patologas como la glomerulonefritis. Metenamina de plata es
muy til para la identificacin de laminas basales mediante la identificacin de
glicoprotenas asociadas a esta estructura. Los constituyentes (entre ellos las
glicoprotenas), varan segn el tejido de que se trate, ya sea por mayor
aumento en su rol estructural, soporte, organizaciones, etc.

Es importante que para la realizacin de esta tcnica, el tejido conserve su

reactividad para que de esta manera, reaccione otorgando grupos aldehdos.
Por esta causa hay que tener precaucin en el tratamiento del tejido.

Fundamental es el uso de controles positivos en esta tcnica, para asegurar el

correcto resultado de la reaccin. Cualquier alteracin en la solucin de
metenamina puede provocar falsos positivos.