Los pacientes con insuficiencia

renal terminal requieren del

manejo teraputico por medio de
dilisis peritoneal. Entre las
modalidades para efectuarla se
cuenta con la dilisis peritoneal
continua ambulatoria (DPCA). No
obstante que la DPCA se
considera la mejor forma de
tratamiento para estos pacientes,
su utilidad resulta limitada, debido
a que frecuentemente presentan
peritonitis infecciosa. Esta
complicacin obliga a que cada
ao el 22% de los pacientes
tratados de DPCA deben ser
hemodializados o transplantados.

La peritonitis mas grave y de difcil resolucin
con antimicrobianos, es la causada por S,
aureus, seguida por las ocasionadas por E. coli,
S. epidermis, P. aeruginosa y Proteus sp.
No se cuenta con procedimientos
inmunolgicos para la prevencin de la
peritonitis bacteriana y considerando que la
respuesta inmune, es un factor de vital
importancia en la proteccin contra las
infecciones, este trabajo tiene por objeto
mostrar un procedimiento inmunolgico para
prevenir el desarrollo de peritonitis bacteriana
experimental en ratones de la cepa Balb/c,
mediante la inmunizacin activa con
Escherichia coli, S. aureus, S. cowan.

Se trabajaron ratones machos de 8 a 12 semanas de
edad, con peso promedio de 25 gramos, de la cepa
Balb/c, alimentados con alimento comercial para
roedores y agua para consumo ad libitum, con ciclos
de luz controlados de 12 h.
Obtencion y siembra de bacterias:
Se emplearon cepas tipificadas internacionalmente de
E. coli, 10536 y 9001, S. aureus y S. cowan.
Las Escherichias en agar-EMB (BBL) y en agar-sangre
(BBL) los Staphylococcus. Los cultivos fueron incubados
a 37C por 24h. transcurrido este tiempo, se procedi a
resembrarlas bacterias en frascos que contenan 40 ml
de medio liquido caldo-cerebro-corazon (BBL) e
incubados a 37c por 24h. el sobrenadante fue
eliminado y el paquete bacteriano fue lavado tres
veces en 40 ml de solucin salina esteril al 0.8% (SS).


Preparacion de las bacterias para inmunizacin.
Las E. coli y los Staphylococcus fueron fijados con 40ml de
formol al 5% enagitacion continua durante 24 h a
temperatura ambiente. Por otra parte, otros paquetes de
ambas bacterias fueron sometidos a 96 C durante una
hora. Despus de esos tratamientos se realizaron 3
lavados de las bacterias con SS, se resuspendieron en SS y
se conservaron en refrigeracin.

Inmunizacin.
Se llevo a cabo por inyeccin intraperitoneal de 0.2 ml
de las suspensiones bacterianas fijadas con formol o
muertas por calentamiento con la dosis correspondiente
de cada cepa, semanalmente, durante cuatro semanas.
Para cada cepa se empleearon dos grupos de 20
ratones, uno para inmunizacin y el otro como testigo.
Para determinar la prodccion de anticuerpos, se
adicionaron ocho grupos de 5 ratones a los que se les
aplicaron tambin las cuatro dosis inmunizantes de E. coli
10536, E. coli 9001, S. cowan y S. aureus, los cules fueron
sangrados ocho das despus de la ultima dosis, para la
titulacin de anticuerpos.

Determinacin de anticuerpos por aglutinacin.
La valoracin de la respuesta inmune humoral se efectuo por
medio de la titulacin de anticuerpos aglutinantes en el plasma
de los ratones inmunizados para este fin. Para ello, los ratones
fueron heparinizados con 0.50 mL de heparina, por inyeccin
intraperitoneal. Fueron muertos por dilocacion de las vertebras
cervicales se les extrajo la sangre por puncion cardiaca y se
separo el plasma.

Prueba de titulacin de anticuerpos.
Se hicieron 10 diluciones del plasma de cada raton (1:2-1:1052).
En cada tubo se colocaron 0.05 ml de bacterias fijas con formol
o tratadas por calentamiento. Todos los tubos se incubaron a
37 C por 30 min. Transcurrido este tiempo se tomo una alcuota
de cada tubo, se coloco entre porta y cubreobjetos y se
observo en el microscopio para valorar la reaccin de
aglutinacin. Que se determino como positiva o negativa segn
el caso, de acuerdo con la dilucin del plasma empleado
(Nagy et al. 1978).
Los resultados fueron analizados estadsticamente por medio de
la prueba de Chi cuadrada, se tomaron como significativos
los valores de p < 0.05.

al emplear las bacterias, tanto Escherichia como
Staphylococcus muertas por calentamiento, para
inmunizar a los ratones, no se les confiri proteccin,
ya que ninguno sobrevivi 24h, despus de inocular
las bacterias viables para el reto. El resultado fue de
0% sobrevida, como ocurri con los grupos testigos.
En cambio, las bacterias que fueron fijadas con
formol, del grupo inmunizado con E. coli 10536 y E.
coli 9001 tuvieron una sobrevida del 80 y 90%
respectivamente. Asimismo los ratones inmunizados
con S. cowan y S. aureus, tuvieron 90 y 80% de
sobrevida respectivamente.
Este trabajo muestra que E. coli de las cepas 10536 y 9001,
asi como tambin S. aureus y S. cowan fijados con formol,
impidieron la muerte de los ratones Balb/c inmunizados
con cuatro dosis de las bacterias viables
correspondientes. De esta manera se indujo una
respuesta inmune activa con una eficiencia del 80 al 90%
de sobrevida, valorada hasta 72 horas.
El empleo de dos cepas E. coli y dos de Staphylococcus,
se debi a que la diferencia antignica que presentan
permitira determinar la especificidad de la respuesta
inmune inducida.
En estudios previos se ha observado que tanto E. coli
como S. aureus y S. cowan, son capaces de inducir la
produccin de anticuerpos especficos cuando se
inoculan en ratones. Ello fue confirmado en este trabajo al
detectar anticuerpos aglutinantes contra dichas
bacterias.
Tambien se ha informado que las bacterias
muertas por calentamiento inducen la
produccin de anticuerpos especficos, sin
embargo, en este trabajo aunque si se
produjeron anticuerpos, estos no fueron
efectivos contra las bacterias que indujeron su
formacin, puesto que todos los ratones
tratados con las bacterias muertas por
calentamiento muerieron. En cambio cuando
se utilizaron las bacterias fijadas con formol, los
ratones si se inmunizaron. Esta observacin se
relaciona con la presevacion de los
determinantes antignicos cuando las
bacterias son fijadas en formol. Encambio al
someterse a calentamento, se degradaron los
antgenos termolbiles, los cuales son
indispensables para conferir la proteccin a los
ratones inmunizados.
La proteccin inducida
experimentalmente con bacterias
integras o fracciones, sugiere la
posibilidad de continuar este tipo de
investigaciones tendientes a que en un
futuro sean aplicadas en la prevencin
de la peritonitis que padecen los
pacientes con insuficiencia renal
terminal, que son tratados con DPCA.