ANALISIS

INSTRUMENTAL
INTRODUCCION
La electroforesis es una tcnica
de separacin que puede ser
utilizada con fines analticos y
que fue introducida por el
qumico sueco Arne Tiselius.
El inters principal de este
investigador fue la qumica de
las protenas sricas. Por su
trabajo pionero en este campo,
Tiselius recibi el Premio
Nobel en 1948.
Es una tcnica de separacin que consiste en el
transporte de iones a travs de una disolucin por
accin de un campo elctrico.
La velocidad de migracin en un sistema
electrofortico es:
Inversamente proporcional a la viscosidad del medio.
Proporcional a la fuerza aplicada al campo.
Proporcional a la carga neta de la molcula
Inversamente proporcional al tamao de la molcula.
Inversamente proporcional al coeficiente de friccin.
Electroforesis
Es una tcnica para la separacin de molculas que se basa en la
migracin de solutos inicos bajo la influencia de un campo elctrico;
estas partculas migran hacia el ctodo o nodo, en dependencia de
una combinacin de su carga, peso molecular y estructura
tridimensional.
Afecta la estructura de las protenas
por lo tanto, tambin afecta a la
funcin de la misma.
Separacin, visualizacin y
cuantificacin del numero de
protenas de una solucin.
Ventajas
Desventajas
Movimiento inico en un
campo elctrico
Durante el proceso de migracin de una partcula cargada en un
campo elctrico, dependiendo de la carga neta ocurrir lo siguiente:
a. Si la partcula posee carga + se mover hacia el ctodo.
b. Si la partcula posee carga se mover hacia el nodo.
c. Si la partcula no posee carga no se mover





PARMETROS QUE INFLUYEN EN LA
MOVILIDAD ELECTROFORTICA
Tenemos:
1) Parmetros externos
Campo elctrico
Temperatura
2) Parmetros relacionados con el solvente y con el
sistema electrofortico
Viscosidad
Fuerza inica
La naturaleza de los iones componentes
El pH
3) Parmetros relacionados con el soluto
La carga
La forma y tamao de los iones

EQUIPO ELECTROFORTICO
- +
muestra
muestra
+
fuente de
alimentacin
fuente de
alimentacin
cable
cable
-
tampn
tampn
cubeta
cubeta
gel
gel
electrodo
electrodo
ctodo
nodo
electrodo
ctodo
nodo
* Fuente de alimentacin
* Cubeta
* Tampn de electroforesis
* Soporte electrofortico
(gel)
* Dos electrodos
nodo (+)
ctodo (-)
Componentes:
(E. horizontal)
(E. vertical)
Proceso Electrofortico
Electroforesis libre:
Electrodos
Protenas
disueltas en el
buffer
Buffer
Una disolucin tamponada de
la mezcla de protenas se coloca
en una clula de observacin en
forma de U.
http://pt7mdv.ceingebi.unam.mx/computo/pdfs/met/Electroforesis/Electroforesis/Introduccion/BoundaryElectr.jpg
Electroforesis de zona :
La disolucin a tratar se aplica
como una mancha , o como una
banda, y las partculas migran a
travs del disolvente, utilizando
adems un medio de soporte
inerte y homogneo, tal como
el papel o ciertos tipos de geles.
Bioqumica
Christopher K. Mathews
Cmaras Electroforticas
Cmaras horizontales
En la electroforesis de tipo
horizontal generalmente,
se trabaja con ADN o
ARN.
Cmaras verticales
En la electroforesis de tipo
vertical, se analizan tanto
molculas de ADN como
protenas.
Medios de Soporte
Papel
Mtodo sencillo y rpido



Separacin de:
Protenas
Oligonucletidos
Carbohidratos
Lpidos
Desventajas
Se desgarra fcilmente
Distorsiona las bandas
Se produce interaccin entre
las protenas y los grupos
hidroxilo de la celulosa, por lo
tanto la migracin se frena

Acetato de
Celulosa
Se usa en el anlisis de fluidos biolgicos

Tiempo de anlisis corto

Sencillez de la tcnica

Desventaja: Su dbil resolucin
Gran parte de los grupos hidroxilo de la celulosa se han
esterificado por acetilacin, por lo que no hay interaccin
con las protenas.
Gel
Almidn Tcnica barata, fcil y rpida




Poliacrilamida






Agarosa
Soporte mas usado
en electroforesis
De alta resolucin
Sus componentes
son txicos
Buena resolucin
Separacin de
molculas grandes
con radio mayor a 5-
10nm (virus, cidos
nucleicos)
Factores que afectan la
Electroforesis
Carga neta
Tamao
Intensidad del campo elctrica
Temperatura
Medio de soporte
Buffer
Electroforesis en gel de poliacrilamida
Qu es la poliacrilamida?


Polmero generado a partir de acrilamida y
bisacrilamida. Forma un gel con poros y se usa para
realizar electroforesis de macromolculas, en
especial protenas y fragmentos de cidos
nucleicos.










Como se realiza la electroforesis
en gel de poliacrilamida?

Primeramente se necesita el gel de poliacrilamida,
quien funciona como filtro gracias a su estructura
porosa.

Como se realiza la electroforesis
en gel de poliacrilamida?
Colocar las muestras en los
pocillos.

Se aplican cargas elctricas
Como se realiza la electroforesis
en gel de poliacrilamida?
Aplicar un colorante tal como el azul de
Coomassie.
http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/contratapa/aprendiendo/capitulo14.htm
Electroforesis en gel de
poliacrilamida en SDS
Es otra tcnica electrofortica tambin aplicada en
protenas en la que las mismas sufren desnaturalizacin.


SDS?
De que habla?


El SDS (Dodecilsulfato sdico) es un compuesto
desnaturalizante con una carga fuertemente negativo.

Como se realiza la electroforesis
en gel de poliacrilamida SDS?
Primero deben
desnaturalizarse las protenas.


En presencia de SDS la
protena:

http://ahorrarnoshacebien.com/articulos/agua-mito-
realidad.html
http://mariajosevegamiranda.blogspot.com/2012/1
1/proteinas.html
http://cvclavoz.com/blog/paralel
o/page/6/
http://bioquimica6ce.wikispaces.co
m/Proteinas
Como se realiza la electroforesis
en gel de poliacrilamida SDS?
Se colocan las
muestras en los pocillos
y se aplican las cargas
elctricas.



Se visualizan
aadiendo un
colorante como el azul
de Coomassie

http://farmacologiabasica.blogspot.com/2008/08/electro
foresis-en-gel.html
http://coleccion.educ.ar/coleccion/CD17/contenidos/mt/biologia/t
ecnologiaadn/estudiar_expresion_gen.html
Electroforesis en gel de
agarosa
o Es una tcnica utilizada para fragmentos grandes
de ADN.

Agarosa?
La agarosa es un polmero de galactosa


http://www.ecogen.com/producto.asp?id=196
Cmo se lleva a cabo la
electroforesis en gel de agarosa?
Primero se debe mezclar el polvo de agarosa con
un buffer.

http://www.ugr.es/~mgarrido/Protocolos.html
Cmo se lleva a cabo la
electroforesis en gel de agarosa?
http://html.rincondelvago.com/electroforesis-de-acidos-
nucleicos.html
Cmo se lleva a cabo la
electroforesis en gel de agarosa?
http://oldearth.wordpress.com/2008/10/16/experimentos-de-biologia-
molecular-1-electroforesis/