CINETICA

ENZIMATICA
OBJETIVOS:

Observar el efecto de los factores que modifican la
velocidad de una reaccin enzimtica.

Calcular el porcentaje de producto formado en cada
experiencia.

Elaborar la grfica: factor que modifica la velocidad de
reaccin vs porcentaje de producto formado.
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del
mecanismo de la reaccin cataltica y del comportamiento especfico de la
enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede
medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario
purificar o aislar la enzima.

Las enzimas son protenas con la capacidad de manipular otras molculas,
denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al centro cataltico
de la enzima que lo reconozca y transformarse en un producto a lo largo de
una serie de pasos denominados mecanismo enzimtico.
La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del
efecto de cada uno de los factores que intervienen en
la actividad enzimtica, que se evala a travs de la
velocidad de la reaccin catalizada.
Las variables ms importantes son:
Concentracin de enzima, sustratos y
productos (incluyendo inhibidores y/o
activadores)
pH
Temperatura

Cintica Enzimtica



% Formacin de producto (FC) = 100 (Abs
tubos
/Abs
albmina
)*100

Donde:
Abs
tubo
= Absorbancia de los tubos despus del incubado.
Abs
albmina
= Absorbancia de la albmina (Abs = 0.995)
Cuando la actividad enzimtica se reporta en funcin del % de formacin de
producto se hace uso de la siguiente ecuacin:
La actividad enzimtica se manifiesta y se mide por:
Desaparicin del sustrato.
Formacin del producto.
Modificacin del cofactor.

Existen muchos factores que pueden modificar la actividad enzimtica como:
pH, temperatura, concentracin de sustrato, concentracin de enzima,
tiempo de incubacin.


PARTE EXPERIMENTAL
EXPERIMENTO.- Efecto del pH
TUBO N 1 2 3 4 5
pH 1,0 1,5 6,0 9,5 11
mL albmina 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
mL HCL 1N 2,0 0,5 0,0 0,0 0,0
mL CO
3
Na
2
0,0 0,0 0,0 0,5 2,0
mL agua
destilada
0,0 1,5 2,0 1,5 0,0
Preparar cinco tubos con:
Preincubar los cinco tubos ms un tubo conteniendo 20 mL de pepsina al
1% a 37C por 5 minutos. Luego aadir rpidamente 3 mL de la pepsina
preincubada a cada uno de los tubos 15. Mezclar e incubar a 37C por
10 min. Observar la diferencia o leerla en fotocolormetro con filtro azul
(420 nm).
TUBO N 1 2 3 4 5
mL albmina 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
mL HCL 1N 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
mL agua destilada 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5
TUBO N 6 7 8 9 10
mL pepsina
1%
1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
TUBO N 1 y 6 2 y 7 3 y 8 4 y 9 5 10
Temperatura O C Amb. 37 C 70 C 37

C 100 C
EXPERIMENTO: Efecto de la temperatura.
Preparar cinco tubos con:
Preparar otros cinco tubos con:
Incubar por 5 minutos de acuerdo al siguiente esquema de temperatura:
Agregar los respectivos tubo N 6 al N 10 a los que hay que incubar a las
temperaturas a que se pre-incuban los tubos 1 5.
0
20
40
60
80
100
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
%

F
o
r
m
a
c
i

n

p
r
o
d
u
c
t
o
pH
Experimento: Efecto del pH
0
20
40
60
80
100
0 20 40 60 80 100
%

F
o
r
m
a
c
i

n

p
r
o
d
u
c
t
o
Temperatura (C)
Experimento: Efecto de la temperatura
Con los resultados obtenidos confeccionar las siguientes graficas, establecer sus
conclusiones
TUBO N 1 2 3 4 5
mL albmina 5,0 5,0 5.0 5,0 5,0
mL HCL 1N 0,5 0,5 0.5 0,5 0,5
mL agua destilada 1,5 2,5 3.5 4,0 4,5
mL pepsina 0,0 0,0 0.0 0,0 0,0
TUBO N 1 2 3 4 5
mL pepsina
incubada
3,0 2,0 1,0 0.5 0,1
EXPERIMENTO. -Efecto de la concentracin de la enzima

Preparar 5 tubos con:

Incubar los 5 tubos a 37C por 5 minutos y enseguida aadir:
Incubar por cinco minutos a 37C. Observar al fotocolormetro a 420 nm (filtro
azul), contra una lectura de agua.

TUBO N 1 2 3 4 5 6
mL albmina 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0
mL HCL 1N 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
mL agua destilada 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0
mL pepsina 1% 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
EXPERIMENTO.-Efecto de la concentracin del sustrato

Preparar 6 tubos con:

Leer a 420 nm (filtro azul). Anotar los resultados: incubar a 37C. Colocar 0,5
mL de pepsina pre-dirigida. Incubar por otros 5 minutos a 37C. Leer al
fotocolormetro a 420 nm (filtro azul). Restar la segunda lectura de la primera.
Graficar y comentar los resultados.
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6 8 10 12
%

F
o
r
m
a
c
i

n

p
r
o
d
u
c
t
o
Concentracin enzima (mg/mL)
Experimento: Efecto de la
concentracin de enzima
0
20
40
60
80
100
0 1 2 3 4 5 6
%

F
o
r
m
a
c
i

n

p
r
o
d
u
c
t
o
Concentracin de sustrato
Experimento: Efecto de la
concentracin de sustrato
CUESTIONARIO
1. Solo una pequea fraccin de la enzima se une al sustrato Qu funcin
desempea el resto de la molcula de la enzima?

2 Cmo influye cada uno de los siguientes factores en la velocidad de
una reaccin enzimtica?
a) La concentracin del enzima,
b) La concentracin del sustrato,
c) La temperatura,
d) El pH
3. Enzimas:
a) Si el pH ptimo de una enzima es igual a 7,3,qu ocurrir con la
actividad enzimtica a pH 3,0 y a pH 9,5?
b) Si la temperatura ptima de una enzima es de 36C, Qu ocurrir a
80C?
Justifique las respuestas.
4. Definir apoenzima, holoenzima y coenzima.


5. Indicar que enzima se relaciona con cada una de las siguientes
enfermedades.

Fenilcetonuria
Hemofilia
Enfermedad de Gaucher
Citrulinemia
Enfermedad de almacenamiento de glucosa
Enfermedad de Tay-Sachs
Fucosidosis
Galactosemia
Hiperglicerolemia

6.-Explique que es un inhibidor enzimtico. De 02 ejemplos.

BIBLIOGRAFA
Mathews, C.K. y Van Holde, K.E. (2008). Bioqumica. 5
Edicin. McGraw-Hill. Interamericana. p 206-209.

Herrera, E.(1999). Biologa Molecular y Bioqumica
Fisiolgica. 3 Edicin. McGraw-Hill. Interamericana, p 86-92.

De Robertis EMF, Hib J, Ponzio R. Biologa Celular y
Molecular. 12 ed. Buenos Aires. El Ateneo; 2009, p 38-41