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La técnica de fusión de protoplastos es una biotecnología que produce la fusión de las membranas de dos o más células para formar un híbrido somático. Esto permite introducir variabilidad genética en cepas de interés biotecnológico sin usar ingeniería genética. La técnica implica el aislamiento de protoplastos, su fusión mediante métodos químicos o eléctricos, y la regeneración de nuevas células a partir de los híbridos resultantes.
La técnica de fusión de protoplastos es una biotecnología que produce la fusión de las membranas de dos o más células para formar un híbrido somático. Esto permite introducir variabilidad genética en cepas de interés biotecnológico sin usar ingeniería genética. La técnica implica el aislamiento de protoplastos, su fusión mediante métodos químicos o eléctricos, y la regeneración de nuevas células a partir de los híbridos resultantes.
La técnica de fusión de protoplastos es una biotecnología que produce la fusión de las membranas de dos o más células para formar un híbrido somático. Esto permite introducir variabilidad genética en cepas de interés biotecnológico sin usar ingeniería genética. La técnica implica el aislamiento de protoplastos, su fusión mediante métodos químicos o eléctricos, y la regeneración de nuevas células a partir de los híbridos resultantes.
INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA Integrantes: Hernndez Huerta Sarah Islas Castaeda N. Andrea Jara Aguilar David Jimnez Hernndez Oscar Equipo: 3 Grupo: 4FV1 20-Septiembre-2013 www.themegallery.com Hibridacin somtica www.themegallery.com Hibridacin somtica www.themegallery.com Aislamiento de protoplastos 1.Seleccin del material de partida.
2. Tratamiento enzimtico Temperatura 25 - 30C, pH 4,7 6. Medio con:
a) Enzimas que degradan la pared celular: Celulasas, pectinasas y hemicelulasas. b) Inhibidores de proteasas (PVP). c) Estabilizador osmtico (Sorbitol o manitol). d) Estabilizacin de membranas (CaCl2).
3. Limpieza y purificacin de los protoplastos. www.themegallery.com Mtodos de fusin Qumicos Los protoplastos de dos tipos parentales se mezclan en una solucin conteniendo 15 a 45 % de fusgeno PEG (peso molecular de 1500 a 6000), durante 15 a 30 minutos. La temperatura de incubacin ptima para inducir la fusin es de 35 a 37 C pero, en la prctica, suele ajustarse a 24 C.
La remocin del PEG se lleva a cabo en forma gradual, siendo esto fundamental para asegurar una elevada frecuencia de heterocariones. Para ello, la suspensin se somete a sucesivos lavados con una solucin alcalina (pH 9-11) de CaCl2 10-50 mM, disminuyendo progresivamente la concentracin de PEG con cada lavado. www.themegallery.com Electrofusin Aplicacin de corriente alterna de alta frecuencia (0,5 a 1,5 MHz). Las cargas se separan dentro de las clulas formando un dipolo y generando, por lo tanto, un potencial de membrana. Los protoplastos se aproximan unos a otros y forman cadenas paralelas a las lneas de campo aplicadas.
Mtodos de fusin El segundo paso consiste en la aplicacin de uno o ms pulsos cortos de corriente directa de 15 a 100 seg., con una intensidad de campo elevada (1 a 3 Kv/cm), suficiente para causar la ruptura reversible de la membrana. Para que esto ocurra es necesario que el voltaje crtico de membrana sea alcanzado en cuestin de nanosegundos a microsegundos. Ocurre entonces la fusin de las dos clulas cuyas membranas estn en estrecho contacto (1 a 2 nanmetros de distancia). www.themegallery.com Esquema general www.themegallery.com Ejemplo: Dianthus www.themegallery.com Resumen www.themegallery.com Resumen La fusin de protoplastos es una tcnica de biotecnologa en la cual se produce la fusin de las membranas de dos o ms clulas dando lugar a un hbrido somtico. La tcnica es ampliamente empleada para introducir variabilidad en las cepas de inters biotecnolgico.
Esta tcnica, pese a mezclar el contenido gentico de dos lneas distintas, no est considerada ingeniera gentica, pues en su ejecucin no se emplea la tecnologa del ADN recombinante www.themegallery.com Gracias