Protenas

Caractersticas gerais


So as macromolculas biolgicas mais abundantes nas clulas.

Apresentam grande diversidade de funo biolgica.

So instrumentos moleculares dos quais a informao gentica
expressa.

As protenas so formadas por aminocidos.
Dogma central da Biologia:
DNA RNA Protena
Armazena as
informaes
Exerce as funes celulares
Mensageiro das
informaes
TRANSCRIO TRADUO
As protenas apresentam inmeras funes
Funo transportadora: se ligam e carregam molculas ou ons de
um rgo para outro:

Hemoglobina
Transporta O
2
nas hemcias
Mioglobina
Transporta O
2
nos msculos
Lipoprotenas
Transportam lipdios do
fgado para outros rgos
Funo nutricional: esto na dieta
Casena
Principal protena do
leite
Ovalbumina
Principal protena da
clara do ovo
Funo de defesa: os anticorpos so protenas altamente
especficas que reconhecem e se combinam com substncias estranhas
(vrus, bactrias, etc)
Funo reguladora (hormonal): algumas protenas auxiliam na
regulao da atividade celular ou fisiolgica
Hormnios insulina e glucagon
Actina e Miosina
Contrao muscular
Funo contratil ou de motilidade: algumas protenas habilitam
clulas e organismos com a capacidade de contrair-se, de mudarem de
forma ou de se deslocarem no meio ambiente
Clios e flagelos
Locomoo celular
Colgeno
Queratina
Protena formadora
do cabelo
Funo estrutural: fornecem resistncia ou proteo s estruturas
biolgicas
Funo catalisadora: as enzimas so o grupo de protenas mais
variado e mais altamente especializado, sendo capazes de acelerar
reaes qumicas nas clulas.
Enzimas Hepticas
Metabolismo, destoxificao, etc...
As protenas so formadas por aminocidos

Toda protena um polmero de aminocidos

Caractersticas comuns dos 20 aminocidos:
-aminocidos
grupo carboxila
grupo amino

Cada aminocido tem uma cadeia lateral com propriedade qumica
distinta

a
Cadeia Lateral
Grupo Amino
Grupo cido
Classificao dos aminocidos pela cadeia lateral
Abreviatura dos aminocidos
1 MFPTIPLSRL FDNAMLRAHR LHQLAFDTYQ EFEEAYIPKE QKYSFLQNPQ TSLCFSESIP
61 TPSNREETQQ KSNLELLRIS LLLIQSWLEP VQFLRSVFAN SLVYGASDSN VYDLLKDLEE
121 GIQTLMGRLE DGSPRTGQIF KQTYSKFDTN SHNDDALLKN YGLLYCFRKD MDKVETFLRI
181 VQCRSVEGSC GF
Sequncia de aminocidos do hormnio de crescimento humano
Outros tipos de aminocidos:
Aminocidos como sistemas tampo: propriedades cido-bsico
dos aminocidos, curvas de titulao, pK e pI dos aminocidos
Aminocidos como sistemas tampo: propriedades cido-bsico
dos aminocidos, curvas de titulao, pK e pI dos aminocidos
A ligao peptdica
Formada a partir de uma reao de
condensao entre o grupamento alfa
carboxil de um aminocido com o
grupamento alfa amino do outro
aminocido.
Em condies biolgicas, o equilbrio
desta reao favorece a reao de
hidrlise.
Representa-se uma protena (ou um peptdeo) iniciando pelo
aminocido que possui o grupamento amino-terminal livre.
Orientao de uma protena
Tamanho no documento: Mesmo os menores peptdeos
podem ter efeitos biolgicos importantes
Ex: Hormnios

Ocitocina (9 resduos de aminocidos): secretada pela hipfise para fazer
contrao muscular no parto e produo de leite;

Glucagon (29 resduos de aminocidos): manuteno da glicemia
sangunea.
Glucagon
Caractersticas moleculares de algumas protenas
Protenas conjugadas
As protenas diferem quanto ao tamanho
e a composio de aminocidos
Estrutura das protenas
1. Estrutura Primria
2. Estrutura Secundria
3. Estrutura Terciria
4. Estrutura Quaternria
Viso geral dos arranjos estruturais das protenas
Estrutura primria:

Sequncia de aminocidos recm-
sintetizada na clula, unidos por
ligaes peptdicas e pela localizao
das pontes dissulfeto.

Enovelamento de uma protena
Estrutura secundria:

Estrutura das protenas insolveis em gua.
-Hlice
Esqueleto polipeptdico gira ao redor
de um eixo longitudinal imaginrio.

Os grupos R projetam-se para fora
do esqueleto helicoidal.

Unidade de repetio uma volta de
hlice com 5,4 de extenso, onde
cada volta contm 3,6 resduos de
aminocidos.

Estabilizado por pontes de hidrognio
entre os grupamentos amino (N-H) e
carboxil (C=O) dos aminocidos
distantes 4 resduos entre si.

Estrutura secundria:

Super-hlices
Queratina
Colgeno
Estrutura secundria:

A folha beta bem diferente da alfa
hlice, pois quase totalmente distendida
ao invs de enrolada.

A folha beta pregueada estabilizada por
pontes de hidrognio entre grupos N-H e
C=O em fitas beta adjacentes, enquanto
que nas alfa hlices as pontes de hidrognio
entre grupos N-H e C=O so no mesmo
filamento.
Folha -
Estrutura terciria:

Estrutura das protenas solveis em gua.

o arranjo tridimensional total de todos os tomos na protena.

Os resduos de aminocidos que esto distantes na sequncia primria da
protena, em estruturas secundrias distintas podem interagir na estrutura
terciria.

So conhecidas como estruturas enoveladas ou globulares.
Interao eletrosttica
Interao
hidrofbica
Estrutura quaternria:

Hemoglobina
Interao no covalente de 2 ou mais estruturas tercirias
Capsdeo viral
As protenas perdem a estrutura e consequentemente a funo quando desnaturadas.
Alguns agentes desnaturantes so:

a) Alterao extrema no pH
b) Alta temperatura
c) Solventes orgnicos
d) Detergentes
e) Radiaes
f) Agentes redutores
g) Alta concentrao de sais
h) Metais pesados
i) Estresse mecnico
Desnaturao das protenas
Trabalhando com as protenas: separao, purificao e identificao

Para estudarmos uma protena, devemos fazer o seu isolamento e utilizar tcnicas
que permitam determinar suas propriedades.

- Qual a fonte de protenas?
Tecidos ou microorganismos.
- Primeiro passo rompimento das clulas, para liberao das protenas.
Essa soluo contendo esse pool de protenas chamada de extrato bruto ou total.
O extrato total pode ser submetido a uma centrifugao diferencial para preparar fraes
subcelulares ou isolar organelas especficas.


Cromatografia Uma ferramenta poderosa para
purificao de protenas
Cromatografia Uma ferramenta poderosa para
purificao de protenas
Cromatografia de troca inica
Cromatografia de gel filtrao
Cromatografia de afinidade
Cromatografia Uma ferramenta poderosa para
purificao de protenas
Eletroforese ferramenta para separao e
caracterizao de protenas
Eletroforese ferramenta para separao e
caracterizao de protenas
Eletroforese bidimensional
ENZIMAS
Alguns aspectos importantes sobre as enzimas:

- Catlise de reaes de degradao de nutrientes, conservao e transformao de
energia qumica, sntese de macromolculas biolgicas a partir de precursores simples,
etc...
- Algumas doenas so causadas pela ausncia de uma ou mais enzimas. Outras pelo
excesso de atividade de uma determinada enzima.
- Muitos medicamentos exercem seu efeito biolgico atravs da interao com enzimas.
- Algumas enzimas so utilizadas como diagnstico de doenas atravs da medida da
sua atividade.
- So ferramentas importantes na indstria qumica, no processamento de alimentos e
na agricultura.
So protenas que agem na acelerao de reaes qumicas em sistemas biolgicos
Enzimas comumente dosadas na clnica
Classificao das enzimas

As enzimas so classificadas de acordo com as reaes que catalisam em 6 classes.
Muitas so chamadas pela adeso do sufixo ase ao nome do seu substrato ou a
palavra que descreve a sua atividade.
Classes Subclasses
xido-redutases Desidrogenases, Oxidases, Peroxidases, Catalase, Oxigenases,
Hidroxilases
Transferases Transaldolases e Transcetolases, Acil, Metil, Glicosil e
Fosforiltransferases, Quinases, Fosfomutases
Hidrolases Esterases, Glicosidases, Peptidases, Fosfatases
Tiolases, Fosfolipases, Amidases, Desamidases
Ribonucleases
Liases Descarboxilases, Aldolases, Hidratases, Desidratases
Sintases, Liases
Isomerases Racemases, Epimerases, Isomerases, Mutases
Ligases Sintetases, Carboxilases
1 - xido-redutases catalisam a reao de xido reduo
Oxidao do etanol pela lcool desidrogenase
2 - Transferases transferem grupos funcionais entre doadores e aceptores. Os
grupos amino, acil, fosfato, carbono e glicosil so os principais resduos transferidos.
Reaes catalisadas por uma aminotransferase
3- Hidrolases esse grupo pode ser considerado uma classe especial de transferases,
na qual um grupo doador transferido para gua. A reao generalizada envolve a
clivagem hidroltica de ligaes C-O, C-N, O-P e C-S.
4- Liases adicionam ou removem os elementos da gua, de amnia ou de dixido de
carbono.
Reao catalisada pela enzima fumarase
Quebra de molculas acrescentado gua
5- Isomerases catalisam isomerizaes de vrios tipos, entre elas as interconverses
cis-trans e aldose-cetose.
Epimerases e racemases catalisam a reao de
inverso em tomos de C assimtricos
6- Ligases envolvidas em reaes de sntese, nas quais 2 molculas so unidas, s
custas do ATP.
Reao da piruvato carboxilase


- Substrato molculas sobre as quais agem as enzimas.
- Stio ativo local onde ocorre a catlise, interior dos limites de uma cavidade ou
fenda, na estrutura molecular da enzima.

As enzimas afetam a velocidade das reaes, mas no o equilbrio qumico delas.

Reao enzimtica simples:
E + S ES EP E + P
Qualquer reao desta natureza S

P pode ser descrita por um diagrama de
coordenadas de reao. uma representao grfica do curso energtico da reao.
Como as enzimas funcionam ?
Modelos de interao enzima-substrato
Requerimentos para a atividade das enzimas

Temperatura ideal
pH ideal
Substrato
Cofator e/ou coenzima
Perfil de atividade enzimtica em relao a dependncia do pH
Atividade das enzimas humanas
dependente de temperatura
Alguns cofatores
(elementos inorgnicos)
Enzimas
Cu
+2
Citocromo oxidase
Fe
+2
ou Fe
+3
Catalase, peroxidase
K
+
Piruvato quinase
Mg
+2
Hexoquinase
Mn
+2
Arginase
Ni
+2
Urease
Zn
+2
lcool desidrogenase, DNA polimerase
Coenzimas conhecidas Ex. de grupos qumicos
transferidos
Precursor diettico em
mamferos
Biocitina CO
2
Biotina
Coenzima A grupos Acil cido pantotnico
Coenzima B
12
tomos de H e grupos alquil Vitamina B
12

Flavina adenina dinucleotideo eltrons Riboflavina (vitamina B
2
)
Tiamina pirofosfato aldedos Tiamina (vitamina B
1
)
Nicotinamida adenina
dinucleotideo
on hidreto (:H
-
) cido nicotnico (Niacina)
Piridoxal fosfato grupos amino Piridoxina (vitamina B
6
)
tetrahidrofolato grupos de 1 C Folato
Auxlio de um cofator na atividade enzimtica
Os cofatores alteram o sitio ativo da enzima ou finalizam o encaixe correto do substrato
- Como as enzimas aumentam a velocidade das reaes?
- Qual a fonte de energia para diminuio da energia de ativao das
reaes catalisadas por enzimas?
Papel da energia de ligao na catlise
A concentrao de substrato influencia
a velocidade das reaes (cintica enzimtica)
Efeito da concentrao de substrato na velocidade inicial catalisada por uma enzima
Vmax: velocidade mxima da reao
enzimtica.
Km: concentrao de substrato
necessria para a enzima trabalhar na
metade da Vmax.
Equao de Michaelis-Menten
Km = [S], quando V
0
= Vmax
Enzima Substrato Km (mM)
Hexoquinase ATP
D-glicose
D-frutose
0.4
0.05
1.5
Anidrase carbnica HCO
3
-

26
-galactosidase D-galactose 4
Treonina desidratase L-treonina 5
Valor de Km para algumas enzimas e seus substratos
Quanto menor o Km, maior a afinidade
da enzima pelo substrato.
Hexoquinase de crebro Km: 0.1 mM
Glicoquinase de fgado Km: 10 mM
Inibio enzimtica
Inibidores de enzimas so molculas que interferem com a catlise, diminuindo ou
parando as reaes enzimticas.

Existem duas grandes classes de inibidores: reversveis e irreversveis.
Inibio Reversvel: diminui a atividade enzimtica por meio de interao reversvel.
A interao no-covalente entre inibidor e enzima.
Competitiva: o inibidor semelhante ao substrato e compete com este pelo
sitio ativo da enzima. Comparado com uma reao sem inibidor, a cintica tem aumento
de km sem alterar a Vmax. Ex: sulfanilamida (antibitico), AZT, ddI e ddC (anti-HIV),
diclofenaco e ibuprofeno (antiinflamatrios) etc...
No competitiva: o inibidor no se assemelha ao substrato, portanto no se
liga ao sitio ativo da enzima, porem ao se ligar em outro local da enzima, provoca uma
distoro no sitio ativo da enzima, inativando-a. Comparado com uma reao sem
inibidor, a cintica tem diminuio de Vmax sem alterar o Km. Ex: efavirenz e
nevirapina (anti-HIV)
Mista: o inibidor se liga tanto ao sitio ativo quanto em outro local da enzima.
Comparado com uma reao sem inibidor, a cintica tem alterao tanto de km quanto
de Vmax Ex: ions metlicos

Inibio Irreversvel: tambm chamado de inativador suicida, se liga to fortemente
a enzima (ligao covalente) que bloqueia permanentemente a atividade enzimtica.
Envolve modificaes qumicas na enzima levando a uma inativao definitiva. Ex:
aspirina (analgsico e antitrmico), penicilina (antibitico), paration (inseticida), sarin
(gas) etc...
Exemplos de inibio reversvel
Cinticas enzimticas na ausncia e na presena de
inibidores reversveis
Inibio competitiva






Inibio no-competitiva

Curvas azuis: reao normal; curvas vermelhas: reao na presena do inibidor
Inibio irreversvel


Reao de inibio irreversvel da
acetilcolinesterase pelo
diisopropilfluorofosfato (DIPF)
Regulao enzimtica

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando
assim como reguladoras do metabolismo celular. Esta regulao (reversvel)
essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos celulares.
Existem 2 modelos de regulao enzimtica:

Regulao covalente: ocorre quando h modificao covalente da enzima, com
converso entre formas ativa e inativa.

Regulao alostrica:
Ocorre nas enzimas que possuem um sitio de regulao (sitio alostrico), onde uma
molcula se liga de forma no-covalente, podendo atuar como reguladora positiva ou
negativa.
A ligao do regulador induz modificaes conformacionais na enzima, diminuindo a
sua afinidade com o substrato.
Um modelo comum de regulao alostrica a retroalimentao (feed-back), onde o
prprio produto da reao enzimtica inibe momentaneamente a enzima.
Regulao por modificao covalente
A fosforilao o tipo mais comum de modificao covalente
Regulao da atividade da enzima glicognio fosforilase por modificao covalente
Converso da L-treonina a L-leucina
catalisada por uma sequncia de cinco enzimas
Regulao por retroalimentao (feed-back)