DRA.

ROSSY ESPINOSA
TEMA 1
Microscopia
MICROSCOPIO
Del prefijo micro- y el sufijo -scopio, y estos del prefijo griego - micro-, muy
pequeo, y la raz griega - scop-, ver)
1
es un instrumento que permite observar
objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms
comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un
instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una imagen
aumentada del objeto y que funciona por refraccin.
La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se
llama microscopa.

El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la
obra de William Harvey sobre lacirculacin sangunea al mirar al microscopio
los capilares sanguneos y Robert Hooke publica su obra Micrographia.


Uso y cuidado:

El microscopio es un equipo de alta precisin. La integridad de sus componentes
pticos, mecnicos y elctricos debe ser observada, a fin de conservarlo en las
mejores condiciones.

El ensamble de sus componentes y su ajuste se realiza en fbrica, utilizando equipos
especializados que, mediante tcnicas de medicin avanzadas, controlan las
tolerancias requeridas entre los diversos componentes del equipo. La limpieza del
ambiente en el que se utiliza, su
instalacin y uso cuidadoso resultan fundamentales para lograr una larga vida til.

La humedad, el polvo y las malas condiciones de alimentacin elctrica, el mal uso o
instalacin inadecuada resultan contraproducentes para su correcta conservacin. El
mantenimiento del microscopio implica mucho cuidado, paciencia y dedicacin.
CUESTIONARIO
1. Cual es el microscopio mas usado?
es el microscopio ptico

2. Que es microscopia? ciencia que investiga los objetos pequeos
utilizando el microscopio.

3. Quien invento el microscopio?
Zacharias Janssen en 1590.

4. Que resulta contraproducente para el buen uso del microscopio?
La humedad, el polvo y las malas condiciones de alimentacin
elctrica, el mal uso o instalacin inadecuada resultan
contraproducentes para su correcta conservacin. El
mantenimiento del microscopio implica mucho cuidado, paciencia
y dedicacin.



TEMA 2
TECNICAS HISTOLOGICAS
Tcnica de la hematoxilina y eosina

La hematoxilina: es una base que brinda un tinte azulado
a los componentes cidos de la clula. La mayor parte
de los componentes de la clula son DNA y RNA, el
ncleo y ciertas regiones del citoplasma se tien de azul
oscuro los cuales se denominan basfilos.

La eosina: es un acido que imparte una coloracin
sonrosada a los componentes bsicos de la clula.

Tcnica de la hematoxilina y
eosina
TECNICA:
Sumergir los preparados histolgicos en xilol para eliminar los excesos
de parafina. El xilol es un alcohol txico pero existen reactivos (como el
Hemo-D) que ejercen la misma funcin aclarante de parafina sin la
toxicidad del xilol.
Luego pasan por una serie de alcoholes en concentracin decreciente para
rehidratar la muestra (100, 95 y 70).
Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol
Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para
eliminar excesos y se pasa rpidamente por alcohol cido.
Se lava nuevamente
Se sumerge 30 segundos en eosina.
Se pasa por otra serie de alcoholes,esta vez en orden creciente (70, 95 y
100) para deshidratar la muestra y que se pueda realizar el montaje con un
pegamento no soluble en agua.
Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje
final.

RESULTADO:
Ncleo celular: Violeta
Citoplasma: Rosa
Musculatura: Rojo , rosa o fucsia
Glbulos rojos: Rojo, anaranjado
Fibrina: Rosa

Coloracin Tricromica
Es una tcnica de coloracin especial que permite visualizar claramente las fibras de
colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia;
tambin evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean
tres colorantes para diferenciar el ncleo celular, el citoplasma y las fibras de
colgeno.

Fundamento:
Primeramente, se tien las secciones con un tinte cido tal como escarlata de
Biebrich. Todos los elementos acidfilos del tejido tales como el citoplasma, el
msculo y el colgeno se unirn a los tintes cidos.
Las secciones entonces se tratan con cido fosfotngstico y/o fosfomolbdico. Ya que
el citoplasma es mucho menos permeable que el colgeno, los cidos fosfotngsticos
y fosfomolbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colgeno pero no
del citoplasma. Los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos tienen numerosos grupos
cidos que probablemente acten como medio de unin entre el colgeno y el azul de
laanilina, que es el tinte del colgeno. Probablemente, el pH de la solucin
fosfotngstico/fosfomolbdico tambin aumente la coloracin y ayude al colgeno en
la difusin o el retiro de los colorantes
Tejido control y diana:
Cualquier tejido con componente conjuntivo, en especial con contenido en fibras colgenas, puede
servir como control o ser un tejido diana. Cualquier fijador es vlido, si bien es de eleccin la solucin
de Bouin. El grosor de corte ptimo de las muestras es de entre 4 y 6 micras.
Reactivos:
Solucin de hematoxilina frrica de Weigert.
Solucin de escarlata de Biebrich fucsina cida:
90 cc de escarlata de Biebrich al 1% en agua destilada.
9 cc de fucsina cida al 1% en solucin acuosa.
1 cc de cido actico glacial.
Solucin acuosa de cido fosfomolbdico (utilizar cido fosfotngstico en la misma proporcin, si se va
a teir con verde luz):
5 g de cido fosfomolbdico.
200 cc de agua destilada.
Solucin de azul de anilina:
2,5 g de azul de anilina.
2 cc de cido actico glacial.
98 cc de agua destilada.
Solucin de verde luz al 2% (alternativa al azul):
2 g de verde luz SF amarillento.
99 cc de agua destilada.
1 cc de cido actico glacial.
Solucin diferenciadora: solucin acuosa de cido actico glacial al 1%.

Procedimiento
Desparafinar e hidratar hasta el agua destilada de manera habitual.
En material fijado en soluciones de formaldehdo o alcohlicas se
recomienda hacer un mordentaje previo con lquido de Bouin durante 1
hora a 56-60 C o toda la noche a temperatura ambiente.
Enfriar y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo.
Teir con hematoxilina frrica durante 10 minutos. Lavar en agua
corriente durante 10 minutos.
Lavar en agua destilada.
Teir con la solucin de escarlata-fucsina cida durante 2-5 minutos.
Lavar en agua destilada.
Tratar con la solucin de cido fosfomolbdico-fosfotngstico durante 10-
15 minutos si se va a colorear con la solucin de azul de anilina, o en la
solucin acuosa de cido fosfotngstico al 5% durante 15 minutos si se
desea teir con verde luz.
Teir con solucin de azul de anilina 15 minutos o con solucin de verde
luz 5 minutos.
Lavar en agua destilada.
Diferenciar en la solucin de cido actico al 1% durante 3-5 minutos.
Deshidratar, aclarar y montar.

Anlisis de resultados
Fibras de colgeno = Azul.
Por tanto, el tejido conjuntivo se teir de dicho color.
Estructuras oxidadas + Citoplasma = Rojo.
Se teirn de rojo la queratina, los glbulos rojos y el tejido
muscular.
Ncleo celular = Lila, marrn.

Variantes
La tcnica presenta multitud de variantes, pero las principales
modificaciones hacen referencia al uso de un diferenciador
despus de la hematoxilina (por ejemplo,cido pcrico),
el tiempo de las soluciones, la temperatura, etc.

CUESTIONARIO:
1. Cuales son las tcnicas de coloracin mas comunes?
2. Defina las tcnicas de hematoxilina y eosina.
3. Describa las tcnicas de hematoxilina y eosina.
4. Describa los resultado de las tcnicas de
hematoxilina y eosina.
5. Defina coloracin tricromica.
6. Describa el resultado de la coloracin tricromica.
7. Describa las variantes de los resultados de la
coloracin tricromica.