Lic. TM.

Hector Herrera Reynoso

Esp: Citogentica y Biologa Molecular

ESCUELA DE LABORATORIO CLINICO Y
ANATOMIA PATOLOGICA
BANDEO CROMOSOMICO
Existen varias tcnicas de bandeo
cromosmico, que nos permiten identificar
individualmente los cromosomas, lo cual
facilita la identificacin de una alteracin
cromosmica numrica y especialmente
demostrar la presencia de alteraciones
cromosmicas estructurales.
Permite precisar la localizacin de genes aportando
informacin al llamado mapeo gentico.
Tener un mayor conocimiento acerca de la estructura
cromosmica y de los reordenamientos que se producen en
las distintas alteraciones tales como:

Fusiones y fisiones cntricas
Translocaciones recprocas y en tandem
Inversiones peri y paracntricas
Deleciones
Duplicaciones
Constricciones secundarias
Fracturas cromosmicas, etc.

BANDAS CROMOSMICAS

Los bandeos cromosmicos pueden clasificarse en
morfolgicos y dinmicos:
A.-LOS BANDEOS MORFOLGICOS:
se obtienen basndose en tcnicas inherentes a la
heterogeneidad de la cromatina. Existe una relacin con
protenas (histnicas y no histnicas) e interacciones ADN.
A su vez clasificados en:

Tcnicas de tincin diferencial
Mtodos de tincin selectiva
Coloracines con fluorocromos especficos aislados o
combinados con colorantes no fluorescentes y
tinciones con Anticurpos fluorecentes.
B.-LOS BANDEOS DINMICOS:

Basados en: tcnicas que implican la incorporacin
de una base anloga, bromo-deoxiuridina (BrdU), en el ADN
durante la fase S del ciclo celular. Se denomina tambin
bandeo de replicacin debido a la relacin existente entre el
tiempo de incorporacin del BrdU y el patrn de replicacin.

Al incorpora BrdU durante la fase de replicacin
temprana se obtiene un patrn de bandeo R destacndose las
regiones ricas en G-C. Luego , los cromosomas pueden
visualizarse utilizando distintos mtodos de tincin que
emplean colorante como el Giemsa o el naranja de Acridina
o utilizando Anticuerpos especficos.

TIPOS DE BANDEO CROMOSOMICO
Tcnicas de bandas Q
Tcnicas de bandas G (GTG)
Tcnicas de bandas R
Tcnicas de bandas C


Tcnica de bandas Q
Fue la primera metodologa de bandeo
cromosmico ( llamado as por la sustancia
fluorescente empleada la quinacrina)
1970, Casperson y colaboradores la desarrollaron.
1971 - (Conferencia en Paris) fue denominada
como la tcnica de banda Q.
UTILIDAD
Demostrar la porcin distal del brazo largo del cromosoma Y
que se tie con mas intensidad que los dems cromosomas.
Las regiones pericentromricas de los cromosomas 3 y 4 , y
las regiones satelitales y pericentromricas de los cromosomas
acrocntricos muestran variaciones significativas conocidos
como polimorfismo o heteromorfismos demostrados con estas
tcnicas.
La fluorescencia mayor depende del ADN, si la regin es mas
rica en adenosina y timina (A-T) habr mayor fluorescencia,
pero si es el ADN rico en (G-C) la fluorescencia tiende a
apagarse.


DESVENTAJA
Es el uso de la fluorescencia , que despus de
que es usada desaparece progresivamente y es por
ello que la observacin, el anlisis cromosmico as
como la toma de microfotografa debe ser rpida
para su observacin en el microscopio.
SOLUCIONES:

1. Buffer Sorensens a pH
5.6
2. Colorante Dihidrocloruro
de Quinacrina al 1%

PROCEDIMIENTO :

1. Se tien las lminas con el
colorante de Quinacrina por
15 a 20 en oscuridad.
2. Se lavan las lminas con Buffer
Sorensens.
3. Se monta con una laminilla con el
Buffer.
4. Examinar al microscopio de fluores-
censia utilizando una luz de longitud
de onda de 450 a 500nm
Bandeo Q (quinacrina)
-el primer mtodo de tincin desarrollado
- requiere un microscopio de fluorescencia
- bandas Q brillantes = bandas G oscuras

Tecnica de bandas G
La tcnica de bandas G ( Giemsa ) obtenidas por
digestin proteoltica con el uso de la enzima
tripsina, es la mas usada y considerada como una
tcnica estndar.

Es una tcnica conocida como GTG (Bandas G
por tripsina usando Giemsa), es un mecanismo
aun no aclarado.

Clark y Coleg.
Histonas ricas
en Arginina
En las bandas GTG
No tanto con la
perdida de
ADN y proteina de
cromosomas durante
el tx con tripsina
Dos tipos de
bandas
Bandas G +
(oscuras)
Bandas G -
(claras))
Distribucin de las prot.
Cromosmicas y de ADN
Relativamente
ricas en prot.
Disulfuro
Sulfihidrilos
Tecnica de
bandas G
El patrn de bandas es similar entre (G-Q)
Es de uso rutinario
La banda G obtenida por GTG es muy
superior en la resolucin,comparada con
aquellas tcnicas que utilizan Fluorocrmos.
PROCEDIMIENTO :

1. Se coloca en bao Maria a 37C
el frasco N 1 de solucin de
tripsina 1%
2. Se coloca las lminas con la
preparacin cromosmica
(menos de una semana) en el
frasco N1 x 10.
3. Enjuagar las laminas en el frasco
N2 de solucin salina
fisiolgica.
4. Se colocan las laminas en el
frasco N3 de colorante Giemsa
4% x 6 a 8.
5. Lavar con agua corriente y dejar
secar y observar en el
microscopio.

SOLUCION :

1. Solucin de trIpsina al 1%
2. Solucin salina fisiolgica
3. Colorante Giemsa 4%


. Bandeo GTG:
- Tripsina 1% (buffer)
- Solucin Salina Fisiolog.
- Giemsa 4%


bandas G-plidas bandas G-oscuras
DNA rico en GC DNA rico en AT
replicacin temprana replicacin tarda
Muchos genes Pocos genes
Esta imagen muestra cada
cromosoma humano normal
comparado con su idiograma,
o mapa, de bandas G, un
esquema acordado
internacionalmente para los
patrones de bandas.

Tcnica de bandas R
Se hace el tratamiento de las laminas ah altas
temperaturas en varios buffer
Tincin con Acridina Oramge o Giemsa
Las bandas que producen estas tcnica en los
cromosomas humanos son el reverso de bandas
G o Q es decir que las bandas claras en Q o G son
bandas oscuras en R.
VENTAJAS
Que la regiones telomricas de los
cromosomas son mas teidas, a diferencia de
las tcnicas de bandas Q y G en las que no son
tan claras.

El tratamiento con calor induce denaturacin
de las protenas cromosmicas as como de las
secuencias del ADN ricas en nucletidos(A-T),
mientras que el ADN rico en G-C de las
bandas R en una configuracin nativa.

PROCEDIMIENTO :

1. Preparar el buffer sorensens en
un koplins y llevar a bao
Maria 85C
2. Colocar las lminas
preparadas(1-2 sem) en el
buffer sorensens durante 10.
3. Lavar las laminas de buffer S.
4. Colocar en colorante de
Giemsa por 5.
5. Lavar, dejar secar y observar al
microscopio

SOLUCION:

1. Buffer sorensens(0.06,pH6.59)
2. Colorante de Giemsa.
CROMOSOMAS HUMANOS: BANDAS RGT

CROMOSOMAS HUMANOS: BANDAS RGT

Bandeo inverso o R
("reverso")
- opuesto al bandeo G
-til para teir los
extremos distles de los
cromosomas (deleciones
o reorganizaciones
distales)

Tecnica de bandas C
La tcnica de bandas C produce una tincin
selectiva de la heterocromatina constitutiva ,estas
bandas estn localizadas en la regin
pericentromrica de los cromosomas humanos.

1971- Fue un mtodo descrito por Arrighi y Hsu.


APLICACION
Demuestra variacin de tamao de la regin de
heterocromatina constitutiva presente en las regiones
pericentromricas de los cromosomas.
Para los cromosomas 1,9,16 y brazos largos del
cromosoma Y.
Polimorfismos.
Inversiones pericentromricas.


Desnaturalizar

Extraer el material
cromosmico

Alcali
Incubado en
solucin salina
GIEMSA
Tecnica de
bandas C
SOLUCION :

HCL 0.2N
Ba (OH)2 5%
Solucin saluria de
citrato de sodio(2xSSC)
Giemsa


PROCEDIMIENTO :

Tratar la laminas con HCL 0.2N X
20 a T ambiente
Lavar lamina con H2O destilada.
Tratar las laminas con sol.
Ba(OH)2 al x 5%x 1a2.
Lavar con H2O destilada hasta
eliminar el exceso de bario.
Colocar las laminas en soluc. 2 x
SSC a 60C X 2 horas .
Lavar con H2O destilada
Teir con Giemsa 5% en Buffer
sorensens a pH 7.0 x 15
Lavar con H2O destilada y
observar al microscopio.

Bandeo C

Banda

Mtodo

Caractersticas

Q

Tincin con quinacrina

Bandas fluorescentes
brillantes.


G



Tincin con Giemsa, luego de
pre-tratamiento del
cromosoma


Las bandas G oscuras
corresponden a las Q
brillantes


R


Varias tcnicas

Patrn inverso al de
las Q y G, tiles para
definir los extremos
de los cromosomas.


T



Varias tcnicas


Resaltan las regiones
telomricas.


C



Extraccin de
DNA/protenas, tincin con
Giemsa


Resaltan las regiones
centromricas.


NOR


Tincin con plata

Tien las regiones
organizadoras del
nuclolo
(acrocntricos en el
hombre)

Cromosomas
elongados
Cromosomas
pequeos

Bandas en Metafase y Prometafase (Alta
Resolucin)

DETERMINACION DEN N DE BANDAS CROMOSOMICAS

DETERMINACION DEN N DE BANDAS CROMOSOMICAS