Curso: AnIisis de los PAI Profesor: Ing. Barraza Jaregui, Gabriela Integrantes: Cortijo Mendoza, Paul Haro Snchez, Ronald Salazar Palma, ngel Tambajulca Mantilla, Marlon Valera Cceres, Flor MTODOS ANALTICOS PARA DETERMINACIN DE COMPONENTES ACTIVOS DE ALIMENTOS FUNCIONALES TITULO TIPO CARACTERSTICAS REACTIVOS UTILIZADOS EQUIPO UTILIZADO
IDENTIFICACIN DE FITOESTEROLES POR TLC
Evaluacin del contenido de Fito esteroles, compuestos fenlicos y mtodos qumicos para determinar la actividad antioxidante en semilla de sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) cromatogrfico Para la cuantificacin de los compuestos fenlicos se realizaron pruebas preliminares con estndares de cidos fenlicos como clorognico, cafeico y ferlico, logrndose identificar y cuantificar dos de ellos: cafeico y ferlico. Asimismo, se identificaron y cuantificaron hesperidina, rutina y morina. Membrana nylon 42mm de 45 um, Acrodisk GHP 45um de 25 mm, Cromatofolios de silicagel G f254.
Metanol HPLC, ter etlico, hidrxido de potasio, agua ultra pura para HPLC, etanol p.a., estndares de cidos fenlicos: cafeico y ferlico, estndares de flavonoides: hesperidina, rutina y morina. HPLC
Se realiz mediante el mtodo descrito por Fierro et al., (2004)5 . Las muestras de torta y aceite de sacha inchi fueron pesadas en tubos diferentes y se les agregaron metanol a una concentracin de 10mg/ml. Los tubos fueron agitados en vortex por 30 minutos y 20 minutos sonificados; luego se guard 24 horas. Despues se procedi a sembrar en las placas cromatogrficas con micropipeta 10 ul. Se utilizaron dos sistemas cromatogrficos como fase mvil. La primera fase mvil fue (CHCl3 :CH3 OH:H 2O 10:1:0,05) y fue corrida hasta la mitad de la placa cromatogrfica. Luego la placa fue secada y corrida completamente en el segundo sistema de solvente (CHCl3 ). EMPLEO DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS COMO HERRAMIENTA PARA LA DETERMINACIN DE TXICOS EN ALIMENTOS: HACIA LA SEGURIDAD ALIMENTARIA FUNDAMENTO DE LOS DETECTORES DE ESPECTROMETRA DE MASAS La espectrometra de masas est basada en el diferente comportamiento que presentan los iones que se forman por las diferentes tcnicas de ionizacin, al atravesar campos elctricos y magnticos As dichos iones son separados en funcin de su relacin masa/carga (m/z) y detectados posteriormente
El objetivo es obtener ms informacin estructural mediante la fragmentacin de iones aislados, as como mejorar la selectividad y sensibilidad para el anlisis cuantitativo.
Dispositivo de introduccin de la muestra.
Cmara de ionizacin o fuente, donde se generan los iones a partir de las sustancias qumicas a analizar
Analizador, que diferencia los iones generados en funcin de su relacin m/z
Detector que produce una seal elctrica amplificada para cada uno de los iones generados Un espectrmetro de masas consta de varios componentes bsicos: APLICACIONES DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS COMO DETECTOR Existe una gran variedad de compuestos qumicos que por diferentes vas pueden llegar a los productos alimenticios que se consumen cada da.
Dentro de stos se encuentran productos como plaguicidas, medicamentos veterinarios, micotoxinas y acrilamida, para los cuales el empleo de la espectrometra de masas ha posibilitado una deteccin rpida y fiable, permitiendo determinar dichos compuestos por debajo de los lmites regulados por los organismos oficiales en un tiempo de anlisis relativamente corto. Tabla 1 Determinacin de contaminantes en alimentos mediante tcnicas cromatogrficas acopladas a espectrometra de masas*
Fitoesteroles y escualeno como hipocolesterolmicos en cinco variedades de semillas de Cucurbita maxima y Cucurbitamoschata (calabaza) la semilla de calabaza se ha estudiado y utilizado en el tratamiento de enfermedades parasitarias, hipertrofia benigna prosttica, cistitis y como hipoglicemiante.
Sin embargo, se desconocen investigaciones que refieran el uso de la semilla de calabaza y sobre todo de los fitoesteroles y escualeno como elementos hipocolesterolmicos en humanos.
se estudiaron semillas de calabaza de dos especies, Cucurbita maxima y Cucurbita moschata, de Cuba y Mxico de las variedades Fif, Marucha, INIVIT C- 88 (cubanas), Chata y Tapata (mexicanas), se determin el perfil de fitoesteroles (beta-sitosterol, campesterol, estigmasterol y estigmastenol) y escualeno mediante cromatografa gas-lquido.
El objetivo se bas en determinar el contenido de fitoesteroles y escualeno de cinco variedades de semilla de calabaza para su posible uso como hipocolesterolmicos en humanos.
MTODOS Toma de muestras Se tomaron muestras de semillas de calabaza de 2 especies Curcubita maxima Duchesne y C. moschataDuchesne de Cuba y Mxico, de las variedades Fif (C. moschata de Cuba), Marucha (C. moschata de Cuba), INIVIT C-88 (C. maxima de Cuba), Tapata (C. moschata de Mxico) y Chata (C. maxima de Mxico). Se tom en cuenta que las semillas de calabaza tuvieran el mismo tiempo de almacenaje (12 meses), sin tratamiento qumico, fsico o biolgico. Anlisis qumico de las semillas de calabaza El contenido de extracto etreo, grasa verdadera, material insaponificable, perfil de fitoesteroles y escualeno se determinaron en los laboratorios del Centro Tecnolgico y Asistencia del Estado de Jalisco (CIATEJ), Mxico. Todos los anlisis se realizaron por quintuplicado.
Extraccin de los lpidos La extraccin de los lpidos de las semillas de calabaza se realiz mediante el empleo de un extractor Soxhlet. Para garantizar una adecuada condensacin se emple una corriente de agua fra. Se utiliz ter etlico anhdrido como solvente y se regul la temperatura a 47 C. El tiempo de extraccin fue aproximadamente de 4 h.
Saponificacin de la muestra Se pes 1 g de muestra en un matraz de fondo plano, posteriormente se agregaron 50 mL de solucin metanlica de KOH 2 M y se someti a ebullicin suave (55-60 C) durante 60 min.
Extraccin de materia insaponificable La solucin obtenida en el punto anterior se coloc en una pera de decantacin, a la cual se le agregaron 50 mL de agua destilada y 40 mL de ter. La solucin se dej reposar hasta la separacin de fases, esta tcnica se repiti tres veces conservando las fracciones etreas.
Derivatizacin de la materia insaponificable La materia insaponificable obtenida en la etapa anterior, es diluida en una pequea cantidad de solvente y trasvasada a un tubo de ensayo, para despus someter a secado con corriente de nitrgeno. Se prepar del reactivo silante (TMS), en un tubo de vidrio mediante la mezcla de hexametildisilazano como ingrediente activo, triclorometilsilano como catalizador y piridina como solvente en proporcin 2:1:10. El contenido de fitoesteroles y escualeno fue determinado mediante un cromatgrafo de gases Hewlett Packard 6890 (Palo Alto Ca.), equipado con detector de ionizacin de flama, automuestreador HP 6890 series y una columna HP-5 (30 m x 0,32 mm ID x 0,25 mm espesor de pelcula).
Anlisis estadsticos Los datos se procesaron mediante anlisis de varianza de clasificacin simple en un diseo totalmente aleatorizado, se utiliz la prueba de Anova para la comparacin de medias. Antes de realizar el anlisis de varianza se procedi a verificar la normalidad de los datos
y
la uniformidad de la varianza, segn el softwareestadstico SPSS versin 12.0. En los casos necesarios se emple una comparacin mltiple de medias a posteriori.
RESULTADOS
Las variedades Tapata (C. moschata) e INIVIT C-88 (C. maxima) mostraron el mayor contenido de extracto etreo (EE) y grasa verdadera (GV); se detectaron diferencias significativas (p< 0,001) con las dems variedades, la variedad Chata present el ms bajo contenido. La variedad Fif difiri significativamente (p< 0,001) para el resto de los tratamientos, con contenidos superiores; la variedad Tapata present el contenido ms bajo y las variedades cubanas mostraron concentraciones superiores a las variedades mexicanas. El perfil de fitoesteroles mostr diferencias significativas (p< 0,001) para todas las variedades estudiadas . La variedad Marucha mostr las mayores concentraciones de beta-sitosterol, campesterol, estigmasterol y estigmastenol. Las variedades Tapata e INIVIT C-88 mostraron diferencias significativas (p< 0,001) en el contenido de beta-sitosterol con respecto a las variedades Fif y Chata. Las variedades Chata y la Marucha presentaron las concentraciones ms altas de campesterol. La mayor concentracin de escualeno fue detectada en la variedad Marucha, que result la de mejor balance en el perfil de fitoesteroles y escualeno; present diferencias significativas (p< 0,001) con las variedades Fif, INIVIT C-88, Chata y Tapata.
Determinacin de la capacidad antioxidante de flavonoides en frutas y verduras frescas y tratadas trmicamente RESUMEN El objetivo principal del trabajo fue determinar la capacidad antioxidante de los flavonoides en manzanas rojas con y sin cscaras, fresas, tomates y cebollas frescas y tratadas trmicamente: calor hmedo (hervido y vapor), seco (horno) y alta frecuencia (microondas). Se realiz la medicin en un espectrofotmetro de fluorescencia y el anlisis estadstico a travs de la Varianza y Prueba de Duncan Conclusin: los flavonoides presentaron mayor actividad antioxidante en estado fresco, disminuyendo al ser sometidos a los distintos tipos de calor (coccin). MATERIALES Y MTODOS Se utilizaron manzanas rojas (Malus sylvestris), fresas (Fragaria spp.), tomates (Lycopersicon esculentum) y cebollas (Allium cepa) en estado de maduracin ptimo. Luego se procedi a lavar y eliminar partes no comestibles. Cada una fue dividida en 5 grupos de 150-200 gr., uno de ellos en estado fresco y los otros fueron tratados trmicamente estandarizndose las temperaturas y tiempos de coccin correspondientes.
Las muestras frescas y cocidas se homogeneizaron a fin de obtener los extractos de flavonoides. Al final de la extraccin se obtuvieron 4 fases: clorofrmica, actica, butanlica y acuosa. La capacidad antioxidante se midi a travs de un Espectrofotmetro de Fluorescencia (W excitacin 540 nm; W emisin 575 nm), previa termostatizacin de las cubetas de 3 ml a 37 C. Se trabaj nicamente en la fase actica, descartndose las clorofrmicas y butanlicas debido a que estas sustancias solas presentaron actividad antioxidante, y la acuosa porque no present una lectura positiva. Los datos obtenidos se expresaron en uM Equivalente Trolox, compuesto anlogo de la Vitamina E. Los resultados de las muestras se realizaron por triplicado y fueron analizados estadsticamente mediante el anlisis de Varianza (24) y Prueba de Duncan (25) RESULTADOS
Las manzanas frescas con y sin cscaras no presentaron diferencias estadsticamente significativas entre las muestras. Se observ una disminucin de esta actividad en las tratadas trmicamente, sobretodo por la aplicacin del calor seco (horno) en la manzana pelada y con cscara.
La mayor capacidad antioxidante en fresas fue en la muestra fresca (0,278 M Equivalente Trolox), y la menor actividad, en las tratadas por calor seco (0,077 M Equivalente Trolox), siendo igual que en las referidas anteriormente.
En el tomate en estado fresco, la actividad antioxidante fue mayor (0,165 M Equivalente Trolox), en relacin a los tratados por hervido (0,154 uM Equivalente Trolox), vapor (0,141 M Equivalente Trolox), microondas (0,126 M Equivalente Trolox) y horno (0,048 M Equivalente Trolox).
La capacidad antioxidante de cebollas frescas fue de 0,223 M Equivalente Trolox, siendo la menor actividad en las tratadas por hervido (0,146 M Equivalente Trolox) y vapor (0,151 M Equivalente Trolox), diferencindose de los casos anteriores.
Anlisis de fitoesteroles en la semilla del estropajo, luffa cylindrica por cromatografa de gases capilar
Introduccion Los fitoesteroles o esteroles vegetales estn presentes en las plantas, aceites vegetales, semillas, frutos secos, cereales y legumbres, adems son importantes componentes para las industrias de la salud en la fabricacin de esteroides y la produccin de frmacos, la nutricin y en la cosmtica. Este nuevo espectro de aplicaciones ha generado la necesidad de controlar y cuantificar este tipo de sustancias.
Objetivos En este caso se ha pretendido ampliar el conocimiento sobre la semilla de estropajo, que actualmente se presenta como un subproducto no aprovechado por la industria regional. Para ello se realiz la estandarizacin de la tcnica de cromatogrfica, con el fin de ampliar el portafolio de anlisis que permita el soporte tcnico y cientfico del grupo de investigacin, hacia la comunidad acadmica e industrias productivas. Procedimiento Se extrajo aceite de las semillas de luffa cylindrica, con rendimiento del 8,45%. El aceite fue saponificado, se extrajo su materia insaponificable, derivatizandola por silacin. Se evalu el porcentaje de recuperacin de 82,96% por extraccin en fase slida. Se estandariz la tcnica de cromatografa de gases para el anlisis de fitoesteroles en matrices oleosas, evaluando los parmetros estadsticos: precisin, lmite de deteccin y cuantificacin, sensibilidad, linealidad y exactitud, logrando valores tolerables. El aceite mostr al -sitoesterol y estigmasterol como fitoesteroles mayoritarios en la semilla con 2551,1 y 211,1 ppms respectivamente, la confirmacin se realiz por espectrometra de masas.
DMT: La molécula del espíritu (DMT: The Spirit Molecule): Las revolucionarias investigaciones de un medico sobre la biologia de las experiencias misticas y cercanas a la muerte