INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLOGICAS

INTEGRANTES

Leyva Rendn Gabriel Tonatiuh
ngeles Trejo Vctor Hugo

Equipo:9

Grupo :2IM1


Cromatografa
Objetivos
1.- Conocer la tcnica de cromatografa y los
factores experimentales que la afectan.

2.- Aplicar y comparar los mtodos
cromatogrficos de capa fina y columna, para
separar, identificar y purificar compuestos
orgnicos


3.- Observar el efecto de diferentes fases
mviles y estacionarias en la separacin

4.- Determinar los valores de Rf, como un
parmetro en la identificacin de
compuestos separados

Fundamento
La cromatografa es una tcnica que
permite la separacin de los componentes
de una mezcla debido a la influencia de
dos efectos contrapuestos.
a) Retencin. Efecto producido sobre los
componentes de la mezcla por una fase
estacionaria, que puede ser un slido o un
lquido anclado a un soporte slido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre
los componentes de la mezcla por una fase
mvil, que puede ser un lquido o un gas.

El fenmeno de migracin de los
componentes de una mezcla a lo largo de la
fase estacionaria, impulsados por la fase
mvil, recibe el nombre de elucin.

La mezcla a separar se deposita sobre la fase
estacionara, mientras que la mvil atraviesa
el sistema desplazando a los componentes de
la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de
la magnitud de sus interacciones relativas con
ambas fases.





Las dos fases se eligen de forma que los
componentes de la muestra se distribuyan de
modo distinto entre la fase mvil y la fase
estacionaria.

Aquellos componentes que son fuertemente
retenidos por la fase estacionaria se mueven
lentamente con el flujo de la fase mvil; por el
contrario los componentes que se unen
dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con
rapidez.

Como consecuencia de la distinta movilidad,
los componentes de la muestra se separan
en bandas o zonas discretas que pueden
analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

TIPOS DE CROMATOGRAFIA
Dependiendo de la naturaleza de la fase
estacionaria y de la fase mvil se pueden
distinguir distintos tipos de cromatografa

Cromatografa slido-lquido. La fase
estacionaria es un slido y la mvil un lquido.

Cromatografa lquido-lquido. La fase
estacionaria es un lquido anclado a un soporte
slido.
Cromatografa lquido-gas. La fase
estacionaria es un lquido no voltil
impregnado en un slido y la fase mvil es un
gas.

Cromatografa slido-gas. La fase
estacionaria es un slido y la mvil un gas.

Segn el tipo de interaccin que se establece
entre los componentes de la mezcla y la fase
mvil y estacionaria podemos distinguir entre.

Cromatografa de adsorcin. La fase
estacionaria es un slido polar capaz de
adsorber a los componentes de la mezcla
mediante interacciones de tipo polar.

Cromatografa de particin. La separacin
se basa en las diferencias de solubilidad
de los componentes de la mezcla en las
fases estacionaria y mvil, que son ambas
lquidas.

Cromatografa de intercambio inico. La
fase estacionaria es un slido que lleva
anclados grupos funcionales ionizables
cuya carga se puede intercambiar por
aquellos iones presentes en la fase mvil.
Cromatografa en columna
En la cromatografa en columna, la
fase estacionaria est contenida en
un tubo estrecho y se fuerza el
paso de la fase mvil a travs del
tubo, ya sea a presin o por
gravedad.

Parmetros

Tiempo muerto (to): Tiempo en que tarda un
soluto idealmente no retenido, en salir del
sistema cromatogrfico.

Tiempo de retencin (tr): Tiempo que tarda el
50% de un soluto en eluir y corresponde a la
posicin de la mxima concentracin de un
cromatograma.

Velocidad de flujo del disolvente (F):
Rapidez de la fase mvil a travs de la
columna dada en unidad de volumen sobre
unidad de tiempo.

Volumen de retencin (Vr): Volumen en el
que eluye el 50% de un soluto. Se calcula
con la ecuacin: Vr= trF

Por qu se separan las
sustancias?
Algunas sustancias son retenidas ms
fuertemente en la fase estacionaria por:
Su mayor polaridad, lo que favorece su
adsorcin en dicha fase.
La menor solubilidad en la fase mvil.
Otras sustancias son menos retenidas,
debido a:
Su menor polaridad, lo que disminuye
su capacidad de adsorcin en la fase
estacionaria.
Su mayor solubilidad en la fase mvil
Cromatografa en capa fina

En la cromatografa por capa fina, se utiliza
una placa recubierta con fase estacionaria.

El eluyente ascender, por capilaridad, por la
placa y arrastrar los componentes a lo largo
de sta produciendo "manchas" de los
componentes.

La mezcla a analizar se deposita a una
pequea distancia del borde inferior de la
placa y se introduce en una cubeta que
contiene la fase mvil, que asciende a lo largo
de la placa por capilaridad, desplazando a los
componentes de la mezcla a diferentes
velocidades, lo que provoca su separacin.

Cuando el frente del disolvente se encuentra
prximo al extremo superior de la placa esta
se saca y se visualiza.
Aqu, el grado de elucin de las
sustancias depende de su propia
polaridad como la del eluyente utilizado.

Parmetros

Frente del disolvente (fd)

Centro del soluto (fs)

Relacin de frentes o Factor de retencin (R
f
)
relacin entre la distancia que recorre la
muestra desde el punto de aplicacin y la
distancia que recorre el eluyente hasta el frente
del eluyente

CROMATOGRAFA DE
ADSORCIN
La adsorcin es la propiedad que tienen
ciertos slidos de aumentar la concentracin
en su superficie de otras sustancias.

La separacin se debe a las diferencias de
adsorcin de los componentes de una mezcla
sobre la fase estacionaria. La fase
estacionaria ha de ser un slido polar de gran
superficie (adsorbente). La fase mvil puede
ser un gas o un lquido dando lugar a la
cromatografa gas-slido (CGS) o lquido-
slido (CLS).
El grado de adsorcin vara segn la
naturaleza y superficie especfica de los
adsorbentes y naturaleza de los solutos.

Los enlaces entre molculas adsorbidas y
el adsorbente han de ser dbiles para que
su fijacin sea reversible, las uniones son
debidas a fuerzas intermoleculares
(interacciones dipolo-dipolo o puentes de
hidrgeno).

Como regla general, las polaridades del
adsorbente y de los solutos han de ser
opuestas.
Cromatografa lquido-slido (CLS).
La fase estacionaria est constituida por un
slido polar poroso y que esta finamente
granulado. La superficie especfica contiene
centros polares aptos para la adsorcin de
las molculas polares presentes en la fase
mvil.

Al disminuir el tamao de las partculas, el
nmero de centros activos por unida es
mayor, y la capacidad de adsorcin se
incrementa.
El adsorbente ms utilizado es gel de slice
aunque tambin se emplea almina activada.

La fase mvil est constituida por un disolvente
en el que los componentes de la mezcla deben
ser al menos parcialmente solubles.

La velocidad de elucin de un compuesto se
incrementa al aumentar la polaridad de la fase
mvil y se puede utilizar un gradiente de
polaridad aumentando con el tiempo la
proporcin del disolvente ms polar.
CROMATOGRAFA DE PARTICIN

La cromatografa lquido-lquido, tambin
llamada de particin se caracteriza por
emplear una fase estacionaria lquida, anclada
a un soporte slido, y una fase mvil tambin
lquida.

La polaridad de la fase estacionaria puede
modificarse en funcin de la naturaleza de las
cadenas hidrocarbonadas introducidas en la
gel de slice, lo que permite disponer de fases
estacionarias con selectividad diferente.
La separacin en la cromatografa lquido-
lquido se basa en la diferencia de
solubilidad de los componentes de la
mezcla entre las dos fases lquida o en las
diferentes interacciones de los
componentes de la mezcla con los grupos
funcionales presentes en la cadena
enlazada al gel de slice.

En funcin de la polaridad de la fase
lquida estacionaria, se distingue entre:

Cromatografa en fase normal.
Cromatografa en fase reversa.
Cromatografa de intercambio
inico.

La cromatografa de intercambio inico
(cromatografa inica) es un proceso que
permite la separacin de iones y molculas
polares basado en las propiedades de
carga de las molculas.

Puede ser usada en casi cualquier tipo de
molcula cargada, incluyendo grandes
protenas, pequeos nucletidos y
aminocidos.
La fase estacionaria (resina de
intercambio) muestra en la superficie
grupos funcionales inicos que interactan
con iones de carga opuesta.

Este tipo de cromatografa se subdivide a
su vez en la cromatografa de intercambio
catinico y cromatografa de intercambio
aninico

La cromatografa de intercambio catinico
retiene cationes cargados positivamente
debido a que la fase estacionaria muestra
un grupo funcional cargado negativamente
(SO
3
-
, CO
2
-
).

Las resinas cuyo grupo funcional activo es
un sulfonato (SO
3
-
) se consideran resinas
intercambiadoras cidas fuertes, mientras
que aqullas cuyo grupo funcional activo
es un in carboxilato (CO
2
-
) se consideran
resinas cidas dbiles.

La cromatografa de intercambio de
aniones retiene aniones usando grupos
funcionales cargados positivamente, como
un catin de amonio cuaternario (R
4
N
+
).
Parte
experimental
29
Colocar de
manera vertical
la columna para
cromatografa
Introducir con
un agitador
un pequeo
trozo de
algodn
Hasta la
base de
la misma
Cuidar
de no
tapar el
orificio
Separacin de carotenos
30
Empacar la
columna con
slica gel en una
mezcla de
hexano y
Acetato de etilo
Mantener un
goteo uniforme
Introducir
una capa de
NaSO4
anhidro
Sobre la
superficie
de la silica
gel
Llenar en
su
totalidad
con el
disolvente
31
Dejar goterar
esperar que el
disolvente
quede arriba de
la fase
estacionaria
Depositar 10
gotas de
espinaca sobre
el papel filtro
Evitar
que
toque las
paredes
No dejar que
el nivel del
disolvente
baje
Mantener el
goteo hasta
que los
pigmentos
penetren la
slice
32
Llenar la
columna
con
hexano y
acetato de
etilo
Colectar la
primera
fraccin
colorida en
tubos de
ensayo
Numerados y
cubiertos con
papel
aluminio
Cuando
termine de
eluir la
primera
fraccin
Cambiar el
eluyente a
acetato de
etilo -
metanol
33
Separacin de
licopenos
34
Hacer la cromatografa en columna
del extracto de jitomate para la
separacin de licopenos, en la
misma forma en que se efectu
para el extracto de espinaca
Separacin por cromatografa
en placa fina de una mezcla de
colorante
En una
cromatopla
ca de 7x3
Desarrollar el
cromatograma en
mezcla acetato de
etilo y etanol
Secar y
observar
35
Hoja de seguridad
Hexano
36
Es altamente inflamable
En forma de vapor ,
irrita a la nariz y
garganta; como lquido,
irrita a la piel y ojos. En
contacto con la piel
Causa irritacin y
enrojecimiento. Si la
exposicin es
constante, se genera
dermatitis.

Punto de ebullicin: 69C

Punto de fusin: -95.6 C

Densidad (g/ml): 0.66 (a
20C)



La sustancia irrita los ojos,
la piel y el tracto
respiratorio. La inhalacin
del vapor puede originar
edema pulmonar. La
sustancia puede tener
efectos sobre el sistema
nervioso, dando lugar a
lesin del nervio ptico.

Punto de ebullicin:
77C

Punto de fusin: - 83C

ndice de refraccin:
1.3719 (20C)

Densidad: 0.902 (g/ml)

Acetato de etilo

37
Metanol
38
El envenenamiento puede
efectuarse por ingestin,
inhalacin o absorcin cutnea. Y
se debe, posiblemente, a su
oxidacin a cido frmico o
formaldehido, esta oxidacin se
sabe que puede ser inhibida por
etanol, pues el etanol es
metabolizado de manera muy
especfica y desintoxica
al organismo de metanol por
medio de la respiracin. Despus
de la muerte, el efecto mas grave
de este producto, es la ceguera
permanente.

Densidad (g/ml): 0.81 g/ml

Punto de fusin: -97.8C

Punto de ebullicin:64.7 C
(760mmHg)

ndice de refraccin a 20C:
1.3292

Silica gel
Silica Gel es SiO
2
hecho a partir de silicato sdico,
existen presentaciones granular y esfrica. La
razn por la cual se le llama gel es porque en su
proceso de fabricacin se tiene que elevan la
temperatura de dixido de silicio tanto que se
forma un gel uniforme, pero cuando se enfra se
forman pequeas esferas o grnulos que es lo que
conocemos como Silica Gel.

39
Aspecto: slido
Color: blanco
Olor: inodoro
SOLUBILIDAD (EN EL AGUA) 20 C:
Insoluble
BIBLIOGRAFIA
Manual de cromatografa. Coleccin Textos
Universitarios. 2001. ROUESSAC, F. y
ROUESSAC, A.

Cromatografa lquida de alto rendimiento de
fase inversa. ...... Ruddan (Eds.), The
Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th
ed., Mc-Graw Hill, Mexico, 1996

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.
Cromatogrficos_6700.pdf

http://ocw.uv.es/ocw-formacio-
permanent/2011-1-35_Manual.pdf
40