ENZIMAS

Acelera la velocidad de una reaccin

Catalizador: Sustancia que acelera una
reaccin qumica, hasta hacerla
instantnea
Caractersticas
Actuan sobre un sustrato.

Especificidad.

Centro activo.

Son efectivas en pequeas cantidades.

No sufren modificaciones qumicas durante la catlisis.

Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un
nuevo ciclo de reaccin.

Su velocidad se afecta por pH y T.


1. Oxidorreductasas

2. Transferasas

3. Hidrolasas

4. Liasas

5. Isomerasas

6. Ligasas
Clasificacin
EC 2.7.1.1
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de xido-reduccin
1.Deshidrogenasas

2. Oxidasas

3. Peroxidasas

4. Oxigenasas

5. Hidroxilasas

6. Reductasas

A
red
+ B
ox
A
ox
+ B
red

Grupo 2: Transferasas
Transfieren un grupo qumico
A-X + B
A + B-X
2.1.-.- Grupos monocarbonados
2.2.-.- Grupos aldehido o ceto
2.3.-.- Aciltransferasas
2.4.-.- Glicosiltransferasas
2.5.-.- Alquil- o Ariltransferasas
2.6.-.- Grupos nitrogenados
2.7.-.- Grupos fosfato
2.8.-.- Grupos sulfato
Grupo 3: Hidrolasas
Actan incorporando una molcula de agua
A-B + H
2
O A-OH + H-B
3.1.-.- Esterasas (carboxilesterasas, fosfoesterasas)

3.2.-.- Glicosidasas

3.3.-.- ter hidrolasas

3.4.-.- Pptido hidrolasas

3.5.-.- Acil anhdrido hidrolasas
Grupo 4: Liasas
Catalizan la adicin de un grupo qumico a un doble enlace:
A=B + X
AXB
COO
-
CH
CH
COO
-
H
2
O COO
-
CH
CH
2
COO
-
HO
Fumarato
(trans-)
L-Malato
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin
D-fucosa L-fucosa
Gliceraldehido Dihidroxiacetona

- Racemasas
- Oxidorreductasas intramoleculares
- Mutasas o transferasas intramoleculares
Grupo 6: Ligasas
Unen dos grupos qumicos usando un enlace de alta energa.
A + B + ATP
A-B + ADP + P
i

O bien
C + D + ATP C-D + AMP + PP
i


Enzima

Reaccin catalizada
Oxidoreductasa
Deshidrogenas
Transfiere un H+ de un sustrato a otro
Transferasa Transfiere un grupo diferente al Hidrgeno
Cinasa Transfiere un fosforilo de ATP a otro compuesto
Mutasa Transfiere un grupo de una posicin a otra
Fosforilasa Rompe un enlace aadiendo un P
hidrolasa Rompe enlace por adicin de agua
fosfatasa Hidroliza sustratos para liberar Pi
liasa Separa dejando dobles ligaduras
aldolasa Rompe doble ligadura para formar un aldehido
descarboxilasa Separa carboxilos, liberndolos como CO2
hidratasa Agrega agua a un doble enlace o
la elimina formando un doble enlace
sintasa Une 2 molculas sin usar ATP
isomerasa Interconvierte ismeros pticos o de posicin
SITIO ACTIVO
Concepto: Sitio de unin.
Sitio cataltico.






Modelos:
1. El modelo llave cerradura.

2.- El modelo del ajuste inducido.
Cofactores: orgnicos e inorgnicos

Iones metlicos (cofactor inorgnico)


Molculas orgnicas (coenzimas)

molcula orgnica o inorgnica unida covalentemente:
grupo prosttico
Apoenzima + Cofactor = Holoenzima

Coenzimas
NADPH (nicotinamida adenina dinucletido fosfato reducido),

NAD (nicotinamida adenina dinucleotido),

FAD (flavina adenina dinucletido),

piridoxal, biotina, tiamina, cido tetra hidroflico ,
cobalamina.

Cofactores:
Co Mo. Cu, Zn, Ca, Fe etc

Mecanismos de accin
Energa de activacin
Reaccin Espontnea
Reaccin Catalizada
En una reaccin qumica, las molculas
chocan y pasan a un ET

Las molculas deben tener suficiente
energa para entrar al ET

ET: combinacin intermedia de reactantes
(P) y productos (R). Con vida corta y pronto
cambia a P o R

Energa libre de activacin ( G): La
diferencia entre la energa libre de
reactantes y la energa del ET

Los catalizadores disminuyen la G, lo
que hace alcanzar rpidamente ET

Enzima inactiva
sustrato
Enzima
productos
Coenzima
Centro activo

complejo: enzima-
substrato

Se une la coenzima

Los aminocidos del
sitio activo catalizan el
proceso debilitando los
enlaces

Los productos se
separan y la enzima se
recupera intacta


Mecanismos de catlisis
La enzima proporciona grupos catalticos que permiten que la reaccin
proceda va intermediarios

Si actan como catalizadores cido-bsicos, los grupos del sitio activo
donan o aceptan protones del sustrato

Ej. Tripsina:
a) debilita la unin CN del enlace peptdico formando intermediario
b) Esto permite la unin covalente de la enzima al sustrato
c) Enlaces no covalentes entre el SA y el intermediario estabilizndolo
d) As disminuye la energa de activacin

Regulacin de la actividad enzimtica
Regulacin alostrica:
(+) activacin, (-) inhibicin

Modificacin covalente

Protelisis limitada
Enzimas Alostricas
Presenta 2 sitios: el sitio activo y otro diferente al
que se unen activadores o inhibidores
Regulacin alostrica
L-treonina
treonina
NH3 desaminasa

Cetobutirato


( - )





L-isoleucina - - - - - - -
La actividad de una va
metablica se controla por
regulacin alostrica de la
primera enzima

ile se une a un sitio diferente al
SA. As modifica la forma del
sitio activo y reduce o elimina
la actividad

Esto permite un control de la
sntesis de ile cuando se
exceden las necesidades de la
clula
Inhibicin por Retroalimentacin
La enzima sujeta
a IR es la que
cataliza el
primero y nico
paso irreversible
de la va.

En una va
ramificada es la
primera Enzima
despus de la
ramificacin

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

A B C D E F

G H I- - -

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

-
-
Regulacin covalente
Protelisis limitada
Otras enzimas se sintetizan inactivas

La eliminacin de un pequeo fragmento de
aminociods en el extremo amino terminar
activa la enzima
Cintica Enzimtica
Cintica Enzimtica
Estudia el comportamiento de la velocidad de las
reacciones enzimticas

Permite calcular la concentracin de enzima y
sustrato y comparar su actividad cataltica con la
de otras enzimas

Permiten describir cuantitativamente el efecto de
un veneno sobre una


Variables que influyen en la velocidad de una
reaccin enzimtica
1. Concentracin de enzima

2. Concentracin de substrato

3. pH

4. Temperatura

5. Efectores (Activadores e Inhibidores)
Efecto del pH
pH
v
1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo:
- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato

2. Sobre la transformacin cataltica del substrato

3. Sobre la estructura de la protena enzimtica
Efecto del pH
Efecto de la temperatura
v
T
Orden cero: Son independientes de la concentracin
de cualquiera de los reactantes. Su velocidad puede
depender de la concentracin del catalizador
Segundo orden : Su velocidad es proporcional a la
concentracin de 2 reaccionantes.
Tercer orden: su velocidad es proporcional a la
concentracin de 3 reaccionantes
Primer orden : Su velocidad depende de la
concentracin de un reaccionante.
Curva de progreso

Producto
Tiempo de reaccin
Velocidad inicial
Se mide mediante la disminucin de la concentracin d los
reactantes o el incremento de productos

Vo. Corresponde a a la pendiente de una linea recta

Este valor indica la capacidad mxima de accin de la
enzima, sin que algun factor negativo inlfluya en la actividad

Se usa para calcular los parmetros cinticos Km y Vmax

CURVAS DE PROGRESO.
Efectos de la Conc. S y E

A concentraciones bajas de sustrato
y una det conc. de enzima , la
velocidad de reaccin aumenta en
forma lineal con la conc. sustrato

A altas conc. la velocidad alcanza un
lmite conocido como Vmax

La vel reaccin no aumento
indefinidamente al aumentar la conc.
Sustrato
La Vr esa determinada tambin por la
conc. Enzima

La Vmax se alcanza cuando la
enizma esta saturada con el sustrtao

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
Vmax: se obtiene cuando la
concentracin de substrato es
saturada
Km: Concentracin de
sustrato a la cual la
enzima alcanza la mitad
de la velocidad mxima

Significado de la constante K
m



Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato
(en condiciones de equilibrio rpido)

Concentracin de substrato para la que la velocidad se hace
igual a la mitad de la mxima (s
0.5
)

Se mide en unidades de concentracin
REPRESENTACION DE LINEWEAVER_BURK
La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 =
0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0
= 0) es 1/Vmax

Max
0
Max
Representacin de Eadie-Hofstee
Otra transformacin til de la
ecuacin de Michaelis se
obtiene multiplicando ambos
miembros de la ecuacin por
Vmax para dar la ecuacin.
max
0
0
V
S
V
K V
M
+ =
pendiente
Max
Max
M
M
Representacin de Hanes-Woolf
1/Vmax
[S]/V0
[S]
-Km
K /V m max
| | | |
max max 0
V
Km
V
S
V
S
+ =
INHIBIDORES
I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo
II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.
Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:
1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,
con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E + I EI
2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:
E + I
E
ES + I
ESI
Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin
Competitiva
(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente
de que lo haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto,
no impide la fijacin del substrato a la enzima, pero s
impide la accin cataltica: Inhibicin No Competitiva.
(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo
enzima-substrato una vez formado, impidiendo la
accin cataltica; este tipo se conoce como
Inhibicin Anticompetitiva
Los inhibidores competitivos son sustancias, muchas veces similares qumicamente a los
sustratos, que se unen al centro activo impidiendo con ello que se una el sustrato. El
proceso es reversible y depende de la cantidad de sustrato y de inhibidor, pues ambos
compiten por la enzima.
Enzima
Enzima
sustrato
inhibidor
Sin inhibidor
con inhibidor
Inhibicin competitiva
1/s
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
-1/K
m

-1/(K
m
(1 + i/K
i
))
1/V
max

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble
max
.
V
K
Pendiente
Inhibidor Sin
M
=
max
1
V
| |
max
1
V
K
K
I
M
I
|
|
.
|

\
|
+ =
0
1
V
| | I
| |
|
|
.
|

\
| +

I
M
K
I
K
ciones Inter
1
1
sec
Pendiente de la reaccin inhibida
| | S
1
Inhibicin competitiva
M
K
V
=
=
max
Los inhibidores no competitivos son sustancias que se unen a la enzima en lugares
diferentes al centro activo alterando la conformacin de la molcula de tal manera que,
aunque se forme un complejo enzima-sustrato, no se produce la catlisis. Este tipo de
inhibicin depende solamente de la concentracin de inhibidor.
Enzima
sustrato
Enzima
No se produce la
catlisis
inhibidor
Inhibicin no competitiva
Sin inhibidor
Con inhibidor
| |
|
|
.
|

\
|
+ =
I
K
I
V
ciones Inter 1
1
sec
max
max
.
V
K
Pendiente
Inhibidor Sin
M
=
| | S
1
0
1
V
| | I
| |
max
1
V
K
K
I
M
I
|
|
.
|

\
|
+ =
Pendiente de la reaccin inhibida
M
K
1
Inhibicin no competitiva
M
K
V
=
=
max
E ES
S
E + P
I
ESI
Inhibicin
Anticompetitiva
El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es productivo
Acompetitiva o Incompetitiva.
| |
|
|
.
|

\
|
+ =
I
K
I
V
ciones Inter 1
1
sec
max
max
.
V
K
Pendiente
Inhibidor Sin
M
=
0
1
V
| | I
| | S
1
| |
M
I
K
K
I
ciones Inter
+

1
sec
max
V
K
M
= Pendiente de la reaccin inhibida
M
K
V
=
=
max
Los inhibidores alostricos
se unen a una zona de la
enzima y cambian la
configuracin del centro
activo de tal manera que
impiden que el sustrato
se pueda unir a l.
sustrato
inhibidor
Enzima inactiva
Enzima activa
Inhibicin alostrica.
Sin inhibidor
con inhibidor
Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente

- Su accin no se describe por una constante de equilibrio K
i
,
sino por una constante de velocidad k
i
:
E + I E
- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.
Algunos tipos de inhibidores irreversibles
1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Reactivos de grupos -SH, 1
(a) Agentes alquilantes
E
SH
E
S CH
2
COO
-
ICH
2
COO
-
IH
Yodoacetato
(b) Compuestos insaturados
N CH
2
CH
3
O
O
E
SH
E
S
N CH
2
CH
3
O
O
N-Etil maleimida (NEM)
Ligandos de coordinacin de metales
Es el caso del ion cianuro, CN
-

Se fija con gran afinidad a la sexta posicin de coordinacin
del Fe hemnico, impidiendo toda modificacin posterior.

Por ello acta sobre sistemas de Fe hemnico con la sexta
posicin de coordinacin libre, como la citocromo oxidasa,
de lo que deriva su elevadsima toxicidad
Substratos suicidas
(Inhibidores activados enzimticamente)
- Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera
especfica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos

- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la
molcula en una especie qumica muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola

- Tienen por tanto (a) la especificidad del inhibidor competitivo
y (b) la potencia de los inhibidores irreversibles