En 1881, Koch comparo la

actividad de los desinfectantes.

Despus de probar cerca de 30
desinfectantes y antispticos,
llego a la conclusin de que el
cloruro mercrico era en aquel
entonces el desinfectante que
posea mayor potencia.



Kroning y Paul realizaron un trabajo donde
descubrieron los mtodos para el estudio
cuantitativo de la desinfeccin donde las
bacterias mueren a una tasa logartmica, por lo
tanto, llegaron a la conclusin de que no todas
las bacterias son igualmente sensibles al
desinfectante; en relacin con el tiempo de
desinfeccin, observaron que se requieren
periodos determinados para que el
desinfectante acte.

RIDEAL y WALKER, en 1903 introdujeron el
mtodo conocido como DETERMINACIN DEL
COEFICIENTE FENLICO para hallar una cifra
que expresa la eficacia de un desinfectante
comparada y probada en condiciones
idnticas como la del fenol.
Las muestras de pruebas se diluyen; a cada
una de estas se agrega una cantidad de
microorganismos de prueba cultivada en
caldo; al final de periodos fijos, se transfiere
a un medio nutritivo una pequea cantidad
de mezcla desinfectante-microorganismo y
se incuba 37 C. La falta de crecimiento de
colonias en el cultivo indica la muerte de los
microorganismo por el desinfectante.

La mayor dilucin (menor concentracin) del
desinfectante que mata en un periodo
definido se divide entre la mayor dilucin del
fenol que mata en el mismo lapso, para
encontrar la cifra que se correlaciona con el
coeficiente fenlico.
TCNICA
Se prepara una solucin patrn del
desinfectante al 1% que ha de ser probado (o
cualquier otra dilucin conveniente,
dependiendo de la concentracin letal
convenida) en una probeta graduada con
tapn.
A partir de la solucin patrn, se preparan
diluciones finales directamente en tubos para
medicamentos y elimina el exceso de mas de
5 ml (la gama de diluciones debe comprender
limites letales del desinfectante de 5 a 15
min., y para mayor exactitud, al mismo
tiempo debe ser lo suficientemente estrecha).
Se les asigna un numero a los tubos de las
diluciones 1:90 y 1:100. Se colocan todos los
tubos en bao de mara a 20 C. y se
mantienen en el durante 5 min.
Despus de 5 min de a verse realizado la
primera transferencia, se inicia la segunda
transferencia a cada uno de los tubos que
correspondieron a el periodo de 10 y 5 min.
Despus se inicia el traslado al conjunto de
tubos correspondiente al periodo de 15 min.
Se agitan cuidadosamente los tubos, antes de
tomar la asada para transferir al medio de
subcultivos. Los subcultivos se incuban a
37C durante 48 horas.

HALL y HARNETT en 1964
implantaron este procedimiento
para el muestreo microbiolgico
de superficie, para evaluar la
desinfeccin de cualquier tipo
de superficie.

Se emplean cajas desechables, el fondo se
llena con e medio semislido adecuado al
propsito que se desea obtener (cultivo de
bacterias, hongos, determinados gneros
bacterianos, etc.). La superficie del medio, de
10 cm, es ligeramente convexo, y para el
muestreo se aplica suavemente a la
superficie, se tapa y se incuba en las
condiciones adecuadas. Se observan y se
cuantifican las colonias. Si la proliferacin es
confluente y tiene mas de 300 colonias, el
rea est muy contaminada y el desinfectante
no es adecuado o la desinfeccin no es
correcta.
Esta evaluacin se relaciona con la tcnica de
MILLIPORE en 1965, donde se aspira aire dentro
de un colector de cristal estril que contienen 30
ml de un medio enriquecido y amortiguado con
antiespumante. La aspiracin se efecta durante
23 min. (12.5L/min). Por medio de filtracin, se
captan los microorganismos y se mezclan con el
liquido colector. Posteriormente se incuban el
filtro en las condiciones adecuadas, se procede a
la identificacin y cuantificacin de los
microorganismos presentes en superficie, y se
correlacionan con los que estn viables y
presentes en la muestra de superficie.
Muestreo del hisopo:
Consiste en aplicar varias veces un hisopo de
algodn estril ligeramente humedecido en caldo, sobre
la superficie de muestreo comprendida dentro de una
plantilla de 25x25cm para despus sembrar con el
hisopo un semislido o lquido adecuado para lo
propsitos que se pretenden obtener (aislamiento y
diferenciacin de bacterias aerobias, anaerobias,
hongos,etc.). Por ltimo, se incuba en las condiciones
de temperatura, atmosfera y tiempo adecuados. El
muestreo se efecta despus de 30 min o mas luego de
la aplicacin del desinfectante.

Mtodos indirectos para evaluar la eficacia de
la desinfeccin:
Con este mtodo se determina la
concentracin optima del germicida en el lugar
que se desinfecta; para ello se emplean
indicadores qumicos o fsicos.
Evaluacin de la desinfeccin por compuestos
cuaternarios de amonio:
En 1962 KURN y colaboradores descubrieron
una prueba de campo para determinar una
concentracin de 200 ppm de cloruro de
benzalconio mediante el empleo de una pastilla
de los indicadores azul de bromofenol y
anaranjado de metilo. Si la concentracin por
probar reacciona con la indicada, aparece un
color verde en el agua que contiene la pastilla.
Evaluacin de la desinfeccin por oxido de
etileno:
ROYCE y BOWLER en 1959, usaron un
reactivo con indicador de pH contenido en
una bolsa de plstico. Si la concentracin de
gas es la correcta y el tiempo es el indicado,
ocurre una reaccin que produce un
compuesto alcalino que se manifiesta por el
cambio de color del indicador. La ventaja de
este mtodo es la rapidez.
Evaluacin de la desinfeccin por agentes
viricidas:

LORENZ y JANN (1964); mtodo para probar
la eficacia de agentes viricidas contra el virus
de la enfermedad de Newcastle.
Mtodo de formacin de placas:

SYKES (1965)
Un cultivo celular en placa se infecta con el
virus de prueba y despus se aplican
pequeos discos de papel filtro impregnados
con el viricida; se incuba se quitan los discos
y el medio se tie para observar la supresin
de placas y tambin para observar la posible
toxicidad.


Pruebas para la evaluacin de fungicidas:

EMMONS (1933) desarrollo un procedimiento para
evaluar la eficacia de los fungicidas.
Procedimiento:

- Como hongo de prueba se emplea una suspensin se
conidios Trichophyton interdigitalis con cinco millones
de conidios/mililitro.

- Se prepara una serie de diluciones a partir de una
solucin patrn del fungicida al 1%, se colocan 5 ml por
tubo y se realizan diluciones de fenol al 1:45 y 1:60.


- Todos los tubos se colocan en bao
mara a 20C; a intervalos de 30 seg se
agrega 0.5ml de la suspensin conidial a
cada uno de los tubos y se agita.

- Despus de 5, 10 y 15 minutos de
exposicin al fungicida, con un asa de 4
ml de dimetro se toma una gota de
mezcla fungicida-hongo y fenol-hongo y
se siembran tubos que contienen 10 ml de
caldo glucosado.
- Se incuban los tubos a 25-30C y a los 10
das se lee los resultados, para determinar el
coeficiente fenolico del fungicida. En general,
la mayor dilucin que mata las esporas en 10
min es la mayor dilucin que desinfecta
superficies inertes contaminadas con hongos
patgenos. Trichophyton Interdigitalis
sobrevive durante 10 min a 20C a la dilucin
de fenol 1:60, pero no a las dilucin 1:45 del
mismo desinfectante.
Evaluacin del proceso de esterilizacin en
autoclave mediante el uso de bioindicadores:

KOCH (1881) recomend bioindicadores para
evaluar la esterilizacin mediante el uso de
esporas de bacillus anthracis; posteriormente
se han usado para el mismo propsito
esporas de bacterias aerobias y anaerobias
con el punto trmico de muerte definida
[Brewer y col. (1956-1961); Fields y Findley
(1963); Wang y col. (1964), y Thompson y
Thames (1967)].
Donk (1920) utilizaba las esporas Bacillus
stearotermophilus, microorganismos no
patgenos que se desarrolla a una
temperatura de 67 a 65C, cuyas esporas
tienen un punto trmico de muerte de
121C a 15 lb durante 15 min, coincidente
con las condiciones normales de operacin
del autoclave comn.

Para la prueba se usan suspensiones de B.
estearotermophilus en caldo nutritivo con
carbohidrato y un indicador de pH
contenidas en ampolletas de vidrio.
Se emplean 2 ampolletas de 250 ml para
autoclave, que se colocan en la parte
inferior y media, dentro de un frasco.
Despus de que termina el proceso de
esterilizacin, se incuban las ampolletas a
55C (Sterikon, de E. Merck) por lo menos
durante 24 horas, junto con una ampolleta
de control.


Si el proceso de esterilizacin a sido correcto,
las ampolletas no mostraran cambio; con las
ampolletas Sterikon, si ocurre sobre
calentamiento se observa un cambio de color
violeta claro u oscuro. En caso de
esterilizacin incorrecta, despus de la
incubacin del contenido de las ampolletas
hay un aspecto turbio y un color amarillo por
el viraje del indicador, debido a la utilizacin
de azcar por el desarrollo del bacilo; igual
aspecto presenta el contenido de la ampolleta
control.

En condiciones de campo se requiere un
mtodo simple y confiable de muestreo de
superficie, aire e instalaciones para evaluar si
los patgenos especficos sobrevivieron o
cual es la carga bacteriana o mictica que
subsiste despus de una desinfeccin o
durante la crianza de los animales.
Adicionalmente se puede tener animales
testigo en los que se buscaran los
patgenos, amn de determinar los
seroperfiles en los casos correspondientes.


Una vez que los animales estn adentro de la
explotacin, la nica forma de abatir la carga
microbiana es a travs de constante
desinfeccin de las instalaciones con
productos no txicos y con medidas de
bioseguridad y de manejo.