En 1973, Cohen obtuvo el primer plsmido vector, el PSC101, y en 1974 introdujo en este plsmido los genes que codifican los factores de resistencia a la penicilina. Posteriormente se consigui clonar en E. coli los genes que codifican los RNA ribosmicos de Xenopus levis introducidos en el plsmido PSC101; stos fueron los primeros genes de eucariotas transcritos a RNA en una bacteria. MANIPULACIONES GENTICAS A partir de entonces se ha conseguido, mediante la recombinacin del DNA, aislar y multiplicar en bacterias un buen nmero de genes de eucariotas, lo que ha servido para adquirir informacin acerca de sus localizaciones en el cromosoma, la estructura en mosaico y expresin de genes de organismos superiores y de virus, y para la obtencin a nivel industrial de productos de inters. Actualmente se dispone de copias de estos genes de organismos superiores -por ejemplo, de los de diversas globulinas humanas y de rata, de inmunoglobulinas de rata, de la ovalbmina de pollo, de la lisozima, de hormonas como la somatostatina, insulina, hormona humana de crecimiento y del interfern, etc.- capaces de expresarse en bacterias. En la actualidad, gracias a la manipulacin gentica de las bacterias, se han podido obtener sustancias qumicas de inters para el ser humano, protenas que se usan como vacunas o drogas para curar determinadas enfermedades Biotecnologa: Conjunto de tcnicas que utilizan las potencialidades de los organismos vivos o de compuestos procedentes de ellos (enzimas, hormonas, antibiticos .), para la obtencin de productos, bienes y servicios Biotecnologa moderna: en los ltimos 30 aos, avances en microbiologa, inmunologa e ingeniera gentica, con manipulacin selectiva y programada de material gentico Biotecnologa contempornea Clonacin, nanotecnologa, biomateriales, reprogramacin Biotecnologa tradicional: procesos de fermentacin de bacterias y levaduras desde hace miles de aos APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA ROJA - Aplicaciones mdicas Obtencin de nuevos productos y frmacos por organismos Produccin de Ac monoclonales Desarrollo de terapias gnicas y celulares VERDE Aplicaciones agrcolas y ganaderas Desarrollo de cereales resistentes a plagas Desarrollo de animales resistentes a enfermedades Desarrollo de plantas que expresen pesticidas AZUL Aplicaciones acuticas y marinas Uso de plantas y productos marinos para obtener nuevos frmacos Restauracin y preservacin de especies acuticas Uso de genes de organismos acuticos para obtener resistencias BLANCA Aplicaciones a procesos industriales Produccin de nuevos compuestos Desarrollo de combustibles nuevos Uso de bacterias para eliminar vertidos de petrleo APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA Se descubri posteriormente que esta prctica se vena haciendo en la naturaleza de forma espontnea desde hace millones de aos en los vegetales a travs de la bacteria llamada Agrobacterium tumefaciens. ORGANISMOS TRANSGNICOS Organismo transgnico: es aqul que ha sufrido la alteracin de su material hereditario (genoma) por la introduccin artificial (manipulacin gentica) de un gen exgeno, esto es, proveniente de otro organismo completamente diferente. Aparentemente no existen barreras para mezclar los genes (DNA) de dos especies diferentes. Existen bioherramientas moleculares para componer y descomponer al DNA, intercambiando as fragmentos especficos de ADN de distintas especies e incluso transferirlos a bacterias. Las bacterias producen hoy en da, protenas humanas por ingeniera gentica como el interfern, la insulina y la hormona del crecimiento, de gran importancia en la medicina. La Ingeniera Gentica Conjunto de tcnicas, nacidas de la Biologa molecular, que permiten manipular el genoma de un ser vivo, introduciendo genes en un organismo que carece de ellos Enzimas de restriccin Capaces de cortar el ADN por puntos concretos ADN Recombinante Segmento de ADN extrao intercalado en un ADN receptor Se realiza por Se obtiene Tcnicas biotecnolgicas Recombinacin de ADN Secuenciacin del ADN Reaccin en cadena de la polimerasa Aplicaciones diversas
Incluye INGENIERA GENTICA Endonucleasas de Restriccin:
Enzimas que pueden cortar el ADN y lo hacen en secuencias concretas Enzimas que las bacterias usan para destruir ADN que ingresa a ellas, por ejemplo ADN de virus bacterifagos Enzimas: Endonucleasas de restriccin Enzimas: Endonucleasas de restriccin Se conocen mas de 1200 enzimas de restriccin Eco RI (E. coli) reconoce secuencias GAATTC y corta entre G y A 1 ADN plsmido 2 ADN extrao 3 Corte del plsmido y ADN extrao con Eco RI (endonucleasa de restriccin) 4 Formacin de extremos cohesivos 5 Formacin de ADN recombinantes 6 Accin de ADN ligasa que sella los extremos Construccin de ADN recombinante Clonacin del ADN La clonacin de un gen consiste en introducirlo en una clula de modo que se copie y se mantenga
El gen se inserta en un ADN llamado vector de clonacin (plsmidos), capaz de entrar y replicarse de forma independiente en una clula husped
Resultado: ADN recombinante. Permite obtener grandes cantidades del gen insertado en la clula hospedadora adecuada apropiada
Las genotecas de ADN permiten guardar indefinidamente el ADN de un organismo
Un plsmido recombinante en una bacteria se replica con ella pudiendo obtenerse y aislarse millones de copias de dicho plsmido Clonacin del ADN 1. Obtencin de plsmido recombinante 2. Transformacin de bacterias 3. Seleccin de bacterias transformadas 4. Crecimiento de bacterias transformadas 5. Aislamiento de los plsmidos recombinantes Proceso de clonacin de un gen en bacterias Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction) La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), es una tcnica que permite amplificar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeas cantidades de ADN.
Es un mtodo alternativo a la clonacin muy rpido y eficaz
Por su alta sensibilidad, esta tcnica permite identificar un gen a partir de un solo cabello, una clula somtica o un espermatozoide.
Ha facilitado, y en muchos casos hecho posible, la tarea de identificacin de personas, por ejemplo de hijos de desaparecidos, mediante el anlisis de muestras del nio y de su abuela materna
Aplicaciones mdicas de la PCR en nuevas estrategias de diagnstico: Detectar agentes infecciosos como los virus de las hepatitis B y C Regiones del genoma del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) Diagnosticar la presencia o ausencia de HIV en recin nacidos de madres seropositivas. Diagnstico de hemofilias A y B, la distrofia muscular y la fibrosis qustica, o reconocer mutaciones de genes vinculadas con enfermedades oncolg icas El mtodo se basa, en la realizacin de tres reacciones sucesivas llevadas a cabo a distintas temperaturas. Estas reacciones se repiten cclicamente entre veinte y cuarenta veces Primer paso: La muestra se calienta hasta lograr la separacin de las dos cadenas que constituyen el ADN, "desnaturalizacin". Segundo paso: la temperatura se reduce para permitir el "apareamiento" de cada una de dos cadenas cortas de oligonucletidos (inicidores o primers) con cada una de las hebras separadas del ADN molde. Los primers son sintetizados en el laboratorio y diseados de manera tal que permiten definir los lmites del tramo de ADN que se desea replicar Tercer paso: la ADN polimerasa produce la extensin de los primers, en el espacio comprendido entre ambos, sintetizando las secuencias complementarias de las hebras del ADN molde (la T la condiciona la polimerasa Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction) Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction) ADN polimerasa de E. coli se desactiva a la alta temperatura de la desnaturalizacin del ADN, por lo cual deba agregarse enzima fresca al comenzar el tercer paso de cada ciclo. Este inconveniente fue solucionado de manera ingeniosa cuando se la reemplaz por su equivalente de la bacteria "termfila" Thermus aquaticus http://www.youtube.com/watch?v=N6 kBo_pTOA8 Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction) APLICACIN: amplificar ADN Fragmentos de ADN antiguos (momias, fsiles..) ADN de la escena de un crimen ADN de clulas embrionarias para diagnstico prenatal ADN de genes virales El plsmido Ti o T-ADN de Agrobacterium contiene genes (onc) que provocan una mayor produccin de hormonas de crecimiento con la formacin del tumor o agalla. Se eliminan de Ti los genes onc y se sustituyen por otros genes que interese clonar, se habr obtenido un sistema eficaz para introducir ADN interesante a la planta, evitando la aparicin de la enfermedad INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente Tradicionalmente se han mejorado los cultivos por seleccin de ejemplares Actualmente se mejoran caractersticas con tcnicas de ADN recombinante: -Plantas transgnicas- INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente Actualmente se consiguen mejorar diferentes caractersticas con tcnicas de ADN recombinante -Plantas transgnicas- FASES: 1. Transferencia de genes 2. Regeneracin de plantas completas Resistencia a herbicidas (mejora vegetal) Resistencia al glifosfato herbicida no selectivo, con gen de E. coli resistente, clonado e incorporado Resistencia a plagas, con toxina de Bacillus turingiensis Resistencia a virus, con protenas de la cpsida de dicho virus Plantas farmaceticas (biofarmacetica) Produccin de protenas humanas, vacunas, anticuerpos, mas econmicas y contienen mecanismos de modificacin postraduccional de las protenas, a diferencia de las bacterias Mejora del producto (alimentos) Arroz transgnico arroz dorado- con caroteno (vit A)
INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente Medio Ambiente:Utilizacin de organismos genticamente modificados para eliminar contaminantes
INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente Biorremedacin: bacterias modificadas para degradar hidrocarburos Bioadsorcin: Bacterias modificadas que adsorben en su superficie metales pesados INGENIERA GENTICA y MEDICINA APLICACIONES Obtencin de productos farmacuticos Medicina forense Diagnstico de enfermedades Terapia gnica Insulina Interfern H. De crecimiento Factor VIII Marcadores genticos Huella gentica Deteccin en personas o fetos enfermedades hereditarias por tcnicas de ADN recombinante Insercin de genes funcionales para corregir un defecto gentico En clulas somticas En clulas germinales La forma activa de la insulina consta de dos polipptidos (A y B), que estn codificados por partes separadas de un mismo gen. Estos se pueden obtener en cultivos bacterianos separados. Promotor Promotor Subunidad B del gen de la insulina Subunidad A del gen de la insulina Extraccin de las protenas de fusin Separacin de los polipptidos A y B Formacin de insulina activa Protena de fusin con subunidad B del gen de la insulina Transformacin en E. coli Protena de fusin con subunidad A del gen de la insulina Produccin de insulina humana