COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE

PIRIMIDIN. ACIZI NUCLEICI

Universitatea Dunarea de Jos din Galati
Facultatea de Medicina si Farmacie
Specializarea FARMACIE

Conductor tiinific,
Conf.univ.dr.Rodica Mihaela DINIC
Galati, 2013
LUCRARE DE LICEN
Absolvent,
Liliana Ctlina TALAB
CUPRINS
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
COMPUI ORGANICI CU NUCLEU DE PIRIMIDIN I PURIN PREZENI N ACIZII NUCLEICI
AZINE:
Diazine;
Triazine;
Tetrazine, etc.
trei diazine monociclice
Piridazina
Pirimidina
Pirazina
compui heterociclici cu inele condensate
Purina
Pteridina
Aloxazina
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
ACIZII NUCLEICI

Viaa - flux continuu de informaie
Dintr-un anumit punct de vedere, viaa ar putea fi definit i ca
un flux continuu de informaie. Astfel, materialul genetic conine
informaie pentru:
formarea tuturor structurilor unei celule
pentru diferenierea unor diverse tipuri de celule i esuturi
pentru desfurarea tuturor reaciilor biochimice i, n final,
fiziologice
multiplicarea celulelor i pentru nmulirea organismelor
pentru moartea celular i chiar i pentru moartea unui
organism ntreg

Molecula ADN reprezint materialul genetic aproape universal pe Pmnt
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
ACIZI NUCLEICI
Unitile de baz din
compoziia acizilor nucleici
Tipul componentului Tipul acidului nucleic
Fosfat Fosfat (P) ADN ARN
Baze purinice Adenina (A) ADN ARN
Guanina (G) ADN ARN
Baze pirimidinice Citozina (C) ADN ARN
Tiamina (T) ADN
Uracil (U) ARN
Pentoze Dezoxiriboza (dR) ADN
Riboza (Rib) ARN
Componenii acizilor nucleici
ACIZI NUCLEICI
Baza Nucleozidul Nucleotidul
Adenina (A) Adenozina (A) Adenozin monofosfat (AMP)
Adenozin difosfat (ADP)
Adenozin trifosfat (ATP)
Guanina (G) Guanozina (G) Guanozin monofosfat (GMP)
Guanozin difosfat (GDP)
Guanozin trifosfat (GTP)
Citozina (C) Citidina (C) Citidin monofosfat (CMP)
Citidin difosfat (CDP)
Citidin trifosfat (CTP)
Uracil (U) Uridina (U) Uridin monofosfat (UMP)
Uridin difosfat (UDP)
Uridin trifosfat (UTP)
Timina (T) Timidina (T) Timidin monofosfat (TMP)
Timidin difosfat (TDP)
Timidin trifosfat (TTP)
Nucleozidele i nucleotidele corespunztoare
Structura chimic a acizilor nucleici
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
Un prim obiectiv important al prii experimentale l-a constituit
extracia i separarea acizilor nucleici din probe biologice cum ar fi
drojdii din specia Yarrowia lipolytica i carne de pui, de porc i de
pete.


Un alt obiectiv, propus i ndeplinit, al prii experimentale a fost analiza
i cuantificarea acizilor nucleici din extractele obinute. Analizele
realizate au la baz metode moderne, utilizate n mod curent la ora
actual, cum ar fi metodele spectrale (UV-Vis).


Dozarea acestora s-a realizat prin metode spectrofotometrice actuale.
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
YARROWIA LIPOLYTICA este o specie a genului Yarrowia i reprezint o
specie de drojie cu o importan deosebit n producerea enzimelor cu aplicaii n
domeniul biotehnologic. Definit de Wolf ca fiind o drojdie neconvenional,
Yarrowia lipolytica prezint o serie de utilizri n industria alimentar,
farmaceutic, chimic i cosmetic.








Yarrowia lipolytica Taxonomia Examenul microscopic al celulelor de Yarrowia lipolytica

3 TIPURI DE CARNE:
DE PUI
DE PORC
DE PETE
MATERIALE UTILIZATE
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
METODE UTILIZATE
Metode spectrofotometrice (UV-VIS)
Dozrile spectrofotometrice n domeniul
ultraviolet i vizibil se bazeaz pe msurarea
luminii absorbite atunci cnd este respectat
legea Bougue-Lambert-Beer, care stabilete
relaia dintre lumina absorbit, structur i
concentraia n substana de analizat a soluiei
i grosimea stratului absorbant, pentru o
anumit lungime de und exprimat n
nanometri.
Microplate Reader Model Infinite 200Pro NanoQuant
Placa optic pentru cuantificare acizi nucleici
I=Io10
-cl

I = intensitatea luminii transmise;
Io = intensitatea luminii incidente;
= constant caracteristic fiecrei substane;
c = concentraia n substana de analizat a soluiei (% m/V);
l = grosimea stratului absorbant (n centimetri).
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
MATERIALE I METODE
2. Determinarea acizilor nucleici din probe biologice:

Metoda SCHMIDT THANNHAUSER

Metoda SPIRIN
1. Hidroliza nucleoproteidelor
n structura acizilor nucleici intr:
- o baz purinic sau pirimidinic,
- o molecul de oz
- acid fosforic.
Nucleoproteidele din probe biologice tratate cu acid sulfuric 5%, timp de o or o or
i jumtate, pun n libertate acid fosforic, pentoze i baze azotate.
Proteinele sufer de asemenea o hidroliz parial.
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
MATERIALE I METODE

Metoda SCHMIDT THANNHAUSER

Metoda SPIRIN
Acizii nucleici sunt extrai i hidrolizai n
acelai timp cu acid percloric, dup
centrifugare supermatantul este trecut n
cuve de 10 mm i se determin extincia n
UV la = 270 i =290. [19]
concentraia fosfatului nucleic (exprimat
n g/mL)
C
g(P-AN)
=
concentraia acizilor nucleici (exprimat
n g/mL)
C
gAN
=10,3x C
g(P-AN)

COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
REZULTATE I DISCUII
1.Hidroliza
nucleoproteidelor
Nr.crt. Compus chimic Mod de lucru Rezultat
1 Acidul fosforic, H
3
PO
4
Peste filtratul probei a fost
adaugat o soluie amoniacal
pentru crearea unui mediu slab
alcalin i acidularea soluiei cu
HNO
3
- urmat de adugarea de
molibdat de amoniu. Se obine o
soluie intens colorat n crmiziu.

Reacie pozitiv
2 Pentoze - Peste filtratul probei biologice
se adaug NaOH pentru
alcalinizare i reactiv FEHLING.
La fierbere apare un precipitat
rou-crmiziu de dioxid de cupru.
- Filtratul probei biologice este
tratat cu soluie alcoolic de
naftol. Peste soluie se las s curg
pe pereii eprubetei H
2
SO
4

concentrat, observndu-se la
nivelul de separare un inel albastru
- violet ce indic prezena
pentozelor (Reacia Molisch)
+++

+++

3 Baze azotate n eprubeta cu proba de analizat se
introduce NH
3
concentrat pn la
reacie alcalin. Se adaug AgNO
3

i se observ apariia unui
precipitat brun datorat compuilor
argentici ai bazelor purinice

+++

COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
REZULTATE I DISCUII
Nr crt. Denumire
prob
Absorbana
la = 270 nm
Absorbana
la = 290 nm
Cg(P-AN)/mL Cg(AN)/mL
1 Carne de pui 2,580 1,364 6,4 6,29 65,96 64,17
2 Carne de pui 2,430 1,235 6,28 64,78
3 Carne de pui 2,390 1,213 6,19 63,88
4 Carne de porc 2,538 1,146 7,32 7,64 75,45 77,23
5 Carne de porc 2,420 1,346 7,65 78,22
6 Carne de porc 2,370 1,241 7.92 71,25
7 Carne de
pete
2,305 1,146 5,64 5,48 57,42 55,68
8 Carne de
pete
2,420 1,346 5,41 55,78
9 Carne de
pete
2,382 1,391 5,21 53.42
10 Drojdia PO1 1,812 0,833 5,15 5,17 53,04 53,28
11 Drojdia PO1 1,830 0,841 5,20 53,56
12 Drojdia PO1 1,826 0,843 5,17 53,25
13 Drojdia RO13 2,023 1,111 4,80 4,80 49,44 49,47
14 Drojdia RO13 2,110 1,189 4,84 49,85
15 Drojdia RO13 2,086 1,178 4,77 49,13
Rezultate obinute pentru fosfatul din acizii nucleici i concentraia acizilor
nucleici a probelor analizate prin metoda SPIRIN
2. Cuantificarea
acizilor nucleici
REZULTATE I DISCUII
Cuantificarea acizilor nucleici din probele din
surse animale prin metoda SPIRIN
Cuantificarea acizilor nucleici din probele din de
drojdii prin metoda SPIRIN
Fosfaii acizilor nucleici pentru probele din surse
animale
Fosfaii acizilor nucleici pentru probele de drojdii
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
Rezultatele cuantificrii acizilor nucleici cu cititorul de microplaci
carnea de pui - 6,4 g/mL i 6,19 g/mL
carnea de porc - 7,92 g/mL i 7,32 g/mL
carnea de pete - 5,64 g/mL i 5,21 g/mL

drojdia cu indicativul PO1 - 5,20 g/mL i
5,17 g/mL

drojdia cu indicativul RO13 - 4,84 g/mL i
4,77 g/mL
Concentraia acizilor nucleici
carnea de pui - 65,96 g/mL i 63,88 g/mL

carnea de porc - 78,422 g/mL i 71,25
g/mL
carnea de pete - 57,42 g/mL i 53,42
g/mL
drojdia cu indicativul PO1- 53,056 g/mL i
53,25 g/mL

drojdia cu indicativul RO13 - 49,85 g/mL i
49,13 g/mL
Fosfaii din acizii nucleici
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
Lucrarea de licen a prezentat din punct de vedere teoretic, noiuni de baz referitoare compui cu
importan de biologic i anume acizii nucleici,

n partea experimental s-a realizat identificarea i cuantificarea acizilor nucleici din diferite surse
biologice: microbiologice i animale.

n prima etap a fost realizat hidroliza acizilor nucleici i identificarea componentelor structurale ale
acizilor nucleici: acidul fosforic, pentozele i bazele azotate din probe biologice i anume dou tulpini
de drojdii i trei tipuri de carne(pui, porc i pete).

n a doua etap s-a realizat cuantificarea acizilor nucleici n dou moduri: prin metoda SPIRIN i cu
ajutorul unui Microplate Reader, aparat dotat cu plac special optic de cuantificare a acizilor
nucleici.

Din studiul efectuat a rezultat faptul c, concentraia de fosfat din acizii nucleici cea mai mare a fost
gsit la carnea de porc iar dintre cele dou probe de drojdii, proba cu indicativul PO1 a nregistrat o
valoare mai mare dect cea cu indicativul RO13.

Ulterior prin analiza acizilor nucleici s-a constatat c, concentraia cea mai mare a fost gsit tot la
carnea de porc 77,23 g/mL, iar dintre drojdii la cea cu indicativul PO1.

Prin analizele efectuate am pus n eviden prezena acizilor nucleici din diverse surse biologice i am
artat c i sursele microbiologice cum ar fi drojdia Yarrowia lipolytica reprezint o surs important
de acizi nucleici.
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI
Blackburn G M., Michael J Gait, David Loakes, David M Williams, Nucleic Acids in Chemistry and
Biology, Royal Society of Chemistry, 2006;

Burns G. W. The Science of Genetics, Ed. The Magmillan co., N.Y., 2007

Cheng S.C., Ogrydziak D.M., Processing and secretion of the Yarrowia lipolytica RNase, J. Bacteriol.vol.
169, no. 41, 433-1440, 1987.

Dinic, R., M.Georgescu, Chimie organic, Ed. Fundaiei UniversitareDunrea de Jos Galai, 2008;

Elliot W. H., & Elliot, Daphne, Biochemistry and Molecular Biology, Oxford University Press, 2001; pg 23-
27;

Guerzoni M. E., Gobbetti M., Lanciotti R., Vannini L., Chaves LopezC., Yarrowia lipolitica as a
potential ripening agent in dairy products; in Jakobesen M., Narvhus, J., Viljoen, B. C. (Eds): Atti
dellInternational Dairy Federation Symposium Yeasts in the diary industry positive and negative aspects,
International Dairy Feteration, Brussels, 22 33, 1998;

Jantschi L., Nacu H.I., Chimie analitic i instrumental, Academic Press& Academic Direct, Cluj-Napoca,
2009;

Mattey, M., Adoga, G., Enzyme Microb. Technol., 13, 525-526, 1991

Schleif R., Genetics and Molecular Biology, Addison-Wesley Publishing Company, 1993;

Wolf, K., Nonconventional Yeasts in Biotechnology, Springer Verlag, Berlin Heidelberg New York, 117-137,
(1996)
COMPUI CU IMPORTAN BIOLOGIC CU NUCLEU DE PIRIMIDIN.
ACIZI NUCLEICI