Curso de cromatografa

Jorge Silva Mendoza

Marzo 2014
Horario Tema Expositor Asistentes
Cromatografa 1: Qumicos analista (todos)
Tipos de cromatografa Ing. de proyectos (todos)
Un cromatgrafo y su cromatograma Jefe(a) de rea
Parmetros Cromatogrficos y definiciones
Mtodos de cuantificacin ms usados.
Cromatografa 2: Qumicos analista (todos)
Cromatografa de gases (GC) Ing. de proyectos (todos)
Requisitos de una muestra para ser analizada por GC Jefe(a) de rea
Partes de un GC
Mejorando la cromatografa en GC
Cromatografa 3: Qumicos analista (todos)
Cromatografa lquida (LC) Ing. de proyectos (todos)
Requisitos de una muestra para ser analizada por LC Jefe(a) de rea
Partes de un LC
Mejorando la cromatografa en LC
Cromatografa 4: Qumicos analista (todos)
Tratamientos de muestras en LC: Ing. de proyectos (todos)
Carbohidratos Jefe(a) de rea
Estilbenos (SPE)
cidos orgnicos
16:10 a 18:00 horas
Sebastin Riquelme
Sebastin Riquelme
Jorge Silva
Jorge Silva
Martes de 25 de Marzo de 2014
Caf
Almuerzo
Caf
14:00 a 15:50 horas
11:10 a 13:00 horas
09:00 a 10:50 horas
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 2
Horario Tema Expositor Asistentes
Prctico de cromatografa 1:
Partes de un HPLC-DADin situ
Patrones y muestras para componentes fenlicos
Puesta en Marcha HPLC-DAD
Prctico de cromatografa 2:
Preparacin de dos muestras problemas
Confeccin curva de calibracin con datos anteriores
Anlisis de cromatogramas
Mircoles de 26 de Marzo de 2014
09:00 a 10:50 horas
Sebastin Riquelme -
Jorge Silva
Sebastin Riquelme -
Jorge Silva
Qumicos analista (todos)
Qumicos analista (todos)
Caf
11:10 a 13:00 horas
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 3
Cromatografa 1:
Qu es cromatografa
Tipos de cromatografa
Un cromatgrafo y su cromatograma
Parmetros cromatogrficos y definiciones
Mtodos de cuantificacin ms usados.

Cromatografa 2:
Cromatografa de gases (GC)
Requisitos de una muestra para ser analizada por GC
Partes de un GC
Mejorando la cromatografa en GC
Temario para esta maana
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 4
Q
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 5
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a

Mijal Tsweet1 (1872-1919)

Emple por primera vez en 1906 el trmino
"cromatografa"
Trminos simples:

Cromatografa es una tcnica que separa
analitos en una mezcla de compuestos
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 6
Q
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a

Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 7
http://youtu.be/WO0OsxaPYs8
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a

Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 8
Segn cmo est dispuesta la fase estacionaria:

Cromatografa plana.
La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o
sobre un papel. Las principales tcnicas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina


Cromatografa en columna.
La fase estacionaria se sita dentro de una columna.
Segn el fluido empleado como fase mvil se
distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
T
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a

Cromatografa Liquida o LC
HPLC
UHPLC
GPC
Capa fina o TLC HPTLC
Gaseosa o GC GC
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a

Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 10
Cromatografa plana.
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
http://youtu.be/l4UU1FIALLM?t=3m
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 11
Cromatografa en columna.
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 12
Gas de arrastre
Inyector
Columna
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo de gases (GC)
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 13
Gas de arrastre
Inyector
Columna
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo de gases (GC)
Gas de arrastre:
Sirve para transportar la muestra con los analitos de inters por el interior de la
columna.

Inyector
Lugar por donde se introduce la muestra (jeringa)

Columna
Lugar donde se separan los componentes de la muestra

Horno
Sirve para generar condiciones extras de separacin

Detector
Sirve para captar las analitos mediante seales analiticas
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 14
Inyector
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo lquido (LC)
Fase mvil
Bomba
Pre-columna
Columna
Recipiente
de residuos
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 15
Inyector
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo lquido (LC)
Fase mvil
Bomba
Pre
columna
Columna
Residuos
Fase mvil
Sirve para transportar la muestra con los analitos de inters por el interior de la
columna.

Bomba
Sirve para impulsar la fase mvil y la muestra

Inyector
Lugar por donde se introduce la muestra (jeringa)

Pre- olumna
Sistema que evita em ingreso de impurezas en la columna


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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 16
Inyector
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo lquido (LC)
Fase mvil
Bomba
Pre
columna
Columna
Residuos
Columna
Lugar donde se separan los componentes de la muestra

Horno
Sirve para generar condiciones extras de separacin

Detector
Sirve para captar las analitos mediante seales analticas

Residuos
Es un recipiente botella o frasco que sirva para colectar todo lo que sale del detector
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El cromatograma
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o

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y

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a

Un cromatograma es una representacin grfica de la seal analtica de
un analito y de su afinidad con la fase estacionaria en el tiempo
Intensida
d o seal
analtica
t
r
: Tiempo de retencin
t
r
:

4
,
9
5

m
i
n

t
r
:

7
,
6
2

m
i
n

t
r
:

9
,
9
5

m
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n

Tiempo de un anlisis (min)
t
m
:

4
,
0
0

m
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t
m
: Tiempo muerto
Para poder cuantificar los peak es muy
importante tener una buena
triangulacin para calcular de su rea
P
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7
,
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r
:

9
,
9
5

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Una buena cromatografa se define por parmetros cromatogrficos que
indican cuan buena separacin tienen los analitos, o cuan a fines son
estos analitos a la columna cromatogrfica
t
m
:

4
,
0
0

m
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n

Factor de capacidad
Factor de selectividad
Resolucin
Nmero de platos
M

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c
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Mtodos de
Cuantificacin
Normalizacin
interna
Necesito conocer
el rea de todos
los Peak
Calibracin
externa
Mediante curva
de calibracin
Patrn internoi
Curva con un
estanbdar interno
M

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o
s

Mtodos de cuantificacin

a) Normalizacin interna
A
B
C
D
E
F
G
Analito Unidades de rea Concentracin (%)
A 350 11,7
B 300 10,0
C 650 21,7
D 500 16,7
E 350 11,7
F 350 11,7
G 500 16,7
Total de rea 3000 100
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u
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a
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Mtodos de cuantificacin

b) Curva de calibracin
Glucosa
0,1 26540
0,1 26406
0,1 27515
0,5 140368
0,5 140053
0,5 140049
1 275814
1 275941
1 275944
2 557688
2 557858
2 557755
3 834168
3 834200
3 834185
y = 278438x - 572.57
R = 1
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
700000
800000
900000
0 1 2 3 4
M

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Mtodos de cuantificacin

c) Patrn interno
Glucosa Patrn interno Factor
Conc. Area Conc. Area (A
analito
*C
Pinterno
)/A
Pinterno

0,1 26540 0,5 120000 0,11
0,1 26406 0,5 120000 0,11
0,1 27515 0,5 120000 0,11
0,5 140368 0,5 120000 0,58
0,5 140053 0,5 120000 0,58
0,5 140049 0,5 120000 0,58
1 275814 0,5 120000 1,15
1 275941 0,5 120000 1,15
1 275944 0,5 120000 1,15
2 557688 0,5 120000 2,32
2 557858 0,5 120000 2,32
2 557755 0,5 120000 2,32
3 834168 0,5 120000 3,48
3 834200 0,5 120000 3,48
3 834185 0,5 120000 3,48
Cromatografa 1:
Qu es cromatografa
Tipos de cromatografa
Un cromatgrafo y su cromatograma
Parmetros cromatogrficos y definiciones
Mtodos de cuantificacin ms usados.

Cromatografa 2:
Cromatografa de gases (GC)
Requisitos de una muestra para ser analizada por GC
Partes de un GC
Mejorando la cromatografa en GC
Temario para esta maana
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 25
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 26
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g
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s

(
G
C
)

Es una tcnica de anlisis qumico la cual sirve para analizar
analitos voltiles en una muestra o bien que los derivados de los
analitos se puedan volatilizar
Se inyectan en el cromatgrafo muestras liquidas y estas se volatilizan
para entrar a la columna de separacin
http://youtu.be/uFNaT6Vy8_4
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 27
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a

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C

1) La Muestra debe ser voltil




2) La muestra debe ser trmicamente estable




3) Si la muestra no es voltil, tal vez un derivado de el si lo puede ser
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 28
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 28
Gas de arrastre
Inyector
Columna
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo de gases (GC)
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 29
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 29
Gas de arrastre
Inyector
Columna
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin dedatos
Cromatgrafo de gases (GC)
Gas de arrastre:

Helio
Nitrogeno
Argn
Hidrogeno
Aire
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 30
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 30
Gas de arrastre
Inyector
Columna
Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo de gases (GC)
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 31
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 31
Gas de arrastre
Inyector
Column
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Horno
Detector
Sistema de
adquisicin de datos
Cromatgrafo de gases (GC)
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 32
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 32
Gas de arrastre
Inyector
Columna
Horno
Detector
Cromatgrafo de gases (GC)
Detectores
Universales
FID
TCD
MS
Especficos NPD
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 33
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 33
Cromatgrafo de gases (GC)
Detectores
Universales
FID
TCD
MS
Especficos NPD
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 34
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 34
Cromatgrafo de gases (GC)
Detectores
Universales
FID
TCD
MS
Especficos NPD
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 35
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 35
Cromatgrafo de gases (GC)
Detectores
Universales
FID
TCD
MS
Especficos NPD
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 36
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Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 36
Cromatgrafo de gases (GC)
Detectores
Universales
FID
TCD
MS
Especficos NPD
Curso de cromatografa - rea de
Productos Qumicos 37
http://youtu.be/hWBjJ13h3EM
Sistema automatizado de inyeccin de muestras

SPME-GC-MS-Combi-PAL
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Curso de cromatografa
Jorge Silva Mendoza
Marzo 2014