Validacin de

mtodo de anlisis
de NO
3
y NO
2
por
Cromatogrfica inica
Tutor: Lic. Jeaneth Verduguez Q.
Ing. Antezana Henry
Estudiante: Leniz Maldonado Orestes Juan

En la actualidad un laboratorio realiza su trabajo de
acuerdo a un sistema de gestin de la calidad basado en la
norma NRS ISO IEC 17025:2005, que ha permitido mejorar
la administracin de los recursos y adquirir una mejor
eficiencia de las operaciones que se desarrollan. Del
sistema de gestin, surgi la importancia de demostrar que
los mtodos analticos con que cuenta un laboratorio,
proporcionan resultados fiables y adecuados para su
finalidad y/o propsito perseguido.

Objetivo General
Validar el mtodo de anlisis de nitratos y nitritos por
cromatografa inica

Objetivos Especficos
Elaborar un protocolo de validacin para mtodo de anlisis
de nitratos y nitrito por cromatografa inica.
Evaluar cada uno de los parmetros de validacin Exactitud,
Repetibilidad, Reproducibilidad, Lmite de Deteccin, Lmite de
Cuantificacin, Linealidad, sesgo, Especificidad, Robustez y
incertidumbre del mtodo.
Interpretar los resultados obtenidos de la validacin de los
parmetros seleccionados a travs del anlisis estadstico de
los datos.
Realizar el mantenimiento preventivo del equipo.

Definiciones importantes:

Validacin: Es la confirmacin, a travs del examen y el aporte de
evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares
para un uso especfico previsto.
Curva de calibracin: Una curva de calibracin es la representacin
grfica de una seal que se mide en funcin de la concentracin de un
analito.
Exactitud: Es el grado de concordancia de los resultados de los ensayos
en relacin al valor verdadero, o la cercana de los resultados
obtenidos mediante el procedimiento al valor verdadero.
Linealidad: Indica la capacidad de producir resultados directamente
proporcionales a la concentracin del analito en las muestras.
Repetibilidad: Es la variacin de las mediciones obtenidas con un
instrumento de medicin cuando es utilizado varias veces por un
evaluador cuando mide la misma caracterstica en la misma parte.
Linealidad

Reproducibilidad: Es la variacin en el promedio de las mediciones
hechas por diferentes evaluadores utilizando el mismo instrumento de
medicin al medir la misma caracterstica en la misma parte.
Rango de trabajo: Es una expresin de los valores mnimos y mximos
de analito
que han demostrado ser determinados en el producto.
Lmite de deteccin: Es la cantidad mnima de un analito que puede
ser detectada, y no necesariamente determinada, de manera
cuantitativa.
Lmite de cuantificacin: Es la mnima concentracin de un analito en
una muestra que puede ser determinada con exactitud y precisin
aceptable.
Robustez: es una medida de la capacidad de un procedimiento
analtico de no ser afectado por variaciones pequeas pero
deliberadas de los parmetros del mtodo.
Incertidumbre de una medicin: es el parmetro asociado al
resultado, es decir, caracteriza la dispersin de los valores que
razonablemente pueden ser atribuidos al mesurando.


Reactivos
a) Agua ultra pura
Preparar agua calidad reactivo (ultra puro) en equipo Milli-Q.

b) Solucin madre de Nitratos
Disolver 0,7218 g de Nitrito de Sodio (NaNO
2
) en agua ultra pura
y diluir a 1000 mL.
1 mL = 250 g N-NO
3


c) Solucin madre de Nitritos
Disolver 1,232 g de Nitrito de Sodio (NaNO
2
) en agua ultra pura
y diluir a 1000 mL.
1 mL = 100 g N-NO
2


d) Solucin estndar de mezcla de Nitritos y Nitratos de
concentracin 100 mg/L NO
2
-
, NO
3
-

Tomar una alcuota de 12 mL de solucin madre de Nitritos y 22
mL de solucin madre de Nitratos, mezclar y aforar a 100 mL.

e) Soluciones de estndar de referencia (MRC)

Tomar una alcuota de 2 mL de Soluciones estndar de
referencia (Thermo Scientific) y a un volumen de 25 mL.
1mL = 8 g NO
3

1mL = 8 g NO
2


Tomar una alcuota de 1 mL de Soluciones estndar de
referencia (Thermo Scientific) y a un volumen de 25 mL.
1mL = 4 g NO
3

1mL = 4 g NO
2


LINEALIDAD
Preparar una curva de calibracin de
concentraciones de 2, 4, 6, 8, 10, 20,
30, 40 y graficar rea vs Concentracin
de los estndares preparados a partir
de Solucin estndar de mezcla de
Nitritos y Nitratos de concentracin
100 mg/L NO
2
y NO
3
. Y calcular la
concentracin de los estndares de
referencia y las muestras usando la
curva de calibracin.

Nitritos
N Concentracion Solucin Estandar [mg/L] rea [S*min] Concentracin Calculada [mg/L]
1 0 0,0060 -0,2728
2 2 0,3637 1,8353
3 4 0,7122 3,8892
4 6 1,0669 5,9796
5 8 1,4534 8,2574
6 10 1,8166 10,3978
7 20 3,4493 20,0200
8 30 5,1645 30,1283
9 40 6,7997 39,7652
Pendiente 1 0,94286343
Pendiente 2 1,01574397
Pendiente 0,99973
Coeficiente de Variacin en % 5,26234324
El metodo no es lineal en el intervalo de trabajo
Criterio de aceptacin CV < 5 %
Conclusin:
0
Nitratos
Concentracion Solucin Estandar [mg/L] rea [S*min] Concentracin Calculada [mg/L]
0 0,0003 0,3423
2 0,2879 2,0663
4 0,5940 3,9011
6 0,9280 5,9032
8 1,2460 7,8094
10 1,5957 9,9056
20 3,2817 20,0120
30 4,9368 29,9331
40 6,6374 40,1270
a = 0,00238
b = 0,99990
r = 0,99995
r
2
= 0,99990
Pendiente 1 0,99531811
Pendiente 2 0,99458772
Pendiente 0,99990
Coeficiente de Variacin en % 0,05190835
Interseccion
Pendiente
Criterio de aceptacin CV < 5 %
Coeficiente de correlacin
Coeficiente de determinacion
LIMITE DE DETECCIN
Lmite de deteccin
LD = a + 3S
xy

Lmite de Cuantificacin
LQ = a + 10 S
xy

Donde a es la ordenada al origen de la curva, S
xy
es la variacin
residual de la recta formada por Concentracin del estndar Vs
Concentracin Calculada.


Sxy =
0,0036
0,0673
0,2055
0,6765
NITRITOS
Usando Curva de Calibracon 2 - 40 [mg/L]
Ordenada al orgen (a)
Desviacion estandar residual
Limite de cuantificacin [mg/L]
Limite de deteccin [mg/L]
0,0018
0,1284
0,3871
1,2862
NITRATOS
Usando Curva de Calibracon 0 - 40 [mg/L]
Ordenada al orgen (a)
Desviacion estandar residual
Limite de cuantificacin [mg/L]
Limite de deteccin [mg/L]
REPETIBILIDAD Y
REPRODUCIBILIDAD
Se realiz el anlisis de 10 muestras por duplicado, se calculara los parmetros repetibilidad ( r ) y reproducibilidad ( R ).
NITRITOS

Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 Nivel 6 Nivel 7 Nivel 8 Nivel 9 Nivel 10
1 0,0030 0,0000 0,0000 0,0000 0,0013 0,0006 0,0015 0,0011 0,0000 0,0035
2 0,0032 0,0000 0,0003 0,0004 0,0014 0,0007 0,0017 0,0013 0,0000 0,0036
Desviacin
estndar
0,0001 0,0000 0,0002 0,0003 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,0000 0,0001
Coeficiente de
Variacin
0,0456 1,4142 1,4142 0,0524 0,1088 0,0884 0,1179 0,0199
Sw 0,00011314 Criterio R<0,1r
r 0,00014142
R 2,8000E-09
NIVEL
N
El metodo es reproducible
Conclusin:
NITRATOS
Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 Nivel 6 Nivel 7 Nivel 8 Nivel 9 Nivel 10
1 6,4258 6,6962 6,5215 6,5571 0,1427 0,0548 0,6169 0,8730 5,4915 1,2317
2 6,8370 6,4794 6,7050 6,7284 0,1399 0,0516 0,6213 0,8687 5,3365 1,2337
Desviacin
estndar
0,2908 0,1533 0,1298 0,1211 0,0020 0,0023 0,0031 0,0030 0,1096 0,0014
Coeficiente de
variacon
4,3846 2,3270 1,9620 1,8235 1,4012 4,2533 0,5025 0,3491 2,0244 0,1147
Sw 0,08163548 Criterio R<0,1r
r 0,12312363
R -9,1536E-04
NIVEL
N
El metodo es reproducible
Conclusin:
El metodo es reproducible
Conclusin:
EXACTITUD
Se preparo solucin estndar de referencia de concentracin 4 y
8 mg/L, se analizo por cuadruplicado
rea Estandar de referencia 4 mg/L [S*min] rea Estandar de referencia 8 mg/L [S*min]
1 0,7423 1,4690
2 0,7439 1,4769
3 0,7424 1,4766
4 0,7510 1,4713
Promedio [mg/L] 0,7449 1,4735
Desviacion estandar 0,0041 0,0039
Concentracin [mg/L] 4,1263 8,1492
Valor verdadero [mg/L] 4,0000 8,0000
Sesgo [mg/L] 0,1263 0,1492
%E 3,156290757 1,865382694
N
Nivel
NITRITOS
rea Estandar de referencia 4 mg/L [S*min] rea Estandar de referencia 8 mg/L [S*min]
1 0,6350 1,3337
2 0,6316 1,3396
3 0,6374 1,3441
4 0,6346 1,3514
Promedio [mg/L] 0,6347 1,3422
Desviacion estandar 0,0024 0,0075
Concentracin [mg/L] 4,1448 8,3860
Valor verdadero [mg/L] 4,0000 8,0000
Sesgo [mg/L] 0,1448 0,3860
%Error 3,619786614 4,8265135
Nivel
N
NITRATOS
La recuperacin se realizo por adicin de estndar de referencia
a una muestra.
Se tomo una alcuota de 1,5 mL de estndar de referencia y se
diluyo hasta 25 mL con la muestra previamente filtrada.
6
0,020720266
N Promedio Concentracin % Recuperacin
1 1,1613 1,1591 1,1602 6,419495982 106,6462619
rea [S*min]
NITRITOS
Usando Curva de 0- 10 mg/L
Concentracion del estandar [mg/L]
Concentracion de muestra [mg/L]
Criterio: 95 < % Recuperacin < 105
Conclusin:
No cumple con la prueba de recuperacin
6
1,179118219
N Promedio Concentracin % Recuperacin
1 1,1946 1,1791 1,18685 7,454836469 104,5953042
No cumple con la prueba de recuperacin
Criterio: 95 < % Recuperacin < 105
Concentracion del estandar [mg/L]
Concentracion de muestra [mg/L]
Conclusin:
Usando Curva de 0- 40 mg/L
rea [S*min]
NITRATOS
ROBUSTEZ
La robustez del mtodo se analizo por dilucin.
Se diluyo una solucin de estndar de referencia de 4 mg/L en
un relacin 1:5
Se diluyo una solucin de estndar de referencia de 8 mg/L en
un relacin 1:10
Se diluyo una solucin de estndar de referencia de 4 mg/L en
un relacin 1:20

Nitratos
rea 1:5 [S*min] rea 1:10 [S*min] rea 1:20 [S*min]
0,1351 1,1503 9,2028 55,72939423
0,1399 1,1791 18,8659 57,19777114
0,0758 0,7949 50,8726 102,9868128
Criterio:
Coeficiente de
Variacin
Coeficiente de variacin en % menor al 3%
Concentracin calculada [mg/L] Concentracion [mg/L]
8
Dilucin
Concentracion de Muestra [mg/L]
4
8
Conclusiones
El metodo no es robusto a una dilucion 1:5
El metodo no es robusto a una dilucion 1:10
El metodo no es robusto a una dilucion 1:20
Nitritos
rea 1:5 [S*min] rea 1:10 [S*min] rea 1:20 [S*min]
0,1351 0,4881 3,9047 1,705073898
0,1399 0,5164 8,2620 2,278497813
0,0758 0,1386 8,8709 7,300744606
Criterio:
Coeficiente de
Variacin
Coeficiente de variacin en % menor al 3%
Concentracin calculada [mg/L] Concentracion [mg/L]
8
Dilucin
Concentracion de Muestra [mg/L]
4
8
Conclusiones
El metodo es robusto a una dilucin 1:5
El metodo es robusto a una dilucin 1:10
El metodo no es robusto a una dilucion 1:20
Mantenimiento del Equipo de
Cromatografa inica ICS 2100
Encender equipo de cromatografa inica (parte posterior)
Abrir vlvula de purga
Presionar en la pantalla PRIME, verificar que la presin de la bomba este < a 10 psi
Dejar 5 a 10 en estas condiciones
Apagar la bomba OFF
Cerrar la vlvula de purga
Encender la bomba
Verificar el flujo en 1.0 ml/min
Verificar la presin que debe encontrarse entre: 2000 a 2500 psi
Correr programa de limpieza
10 [s] ?
Fin del Mantenimiento
SI
NO
Conclusiones
La curva de calibracin de nitritos posee dos rangos de
trabajo, para concentraciones menor a 10 mg/L se trabaja con
la curva de 0 10 mg/L, para concentraciones entre 10 40
mg/L se utilizara la otra curva de calibracin.
La curva de calibracin de nitratos es lineal para
concentraciones de hasta los 40 mg/L
La validacin se realizo con muestras que posean
conductividades menor a 700 S, por lo tanto de tener
muestras con conductividades mayores se debe realizar una
dilucin.
El mtodo es repetible y reproducible
El mtodo tiene bajo porcentaje de error tanto para nitritos y
nitratos



Se analizo la robustez por diluciones, Hasta una dilucin 1:10
se obtuvo un valor muy cercano al valor verdadero, sin
embargo en la prueba de recuperacin se obtuvo para nitritos
valor superiores al rango permitido, por lo tanto el mtodo es
susceptible a errores en la dilucin para nitritos. Para nitratos,
la dilucin puede realizarse hasta una relacin 1:10.
El mantenimiento del equipo debe realizarse cada semana, el
agua que utiliza el equipo debe ser ultra puro( Milli-Q) adems
debe realizarse una filtracin en papel filtro de 0,45 m.