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INVESTIGADORES:

Juan Edson Villanueva Tiburcio.


Luis Alberto Condezo Hoyos.
Eduardo Ramirez Asquieri
CENTRO DE INVESTIGACIN:
Universidad Nacional Agraria De La Selva (UNAS)
Tingo Mara- Per
EXPOSITORES:
Pablo Serrano, Elizabeth Katherin
Sucasaca Quispe, Dianeth
Vilcayauri Delgado, Ana

ANTOCIANINAS, CIDO ASCRBICO,
POLIFENOLES TOTALES Y ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE, EN LA CSCARA DE
Myrciaria dubia
RESUMEN

Este trabajo fue realizado en la UNAS, Tingo Mara, Per.
Evaluaron el contenido de antocianinas, cido ascrbico, y polifenoles totales,
en la cscara fresca y seca de camu-camu en diferentes estados de madurez;
usando diferentes tipos de radicales y correlacionaron el valor de cido
ascrbico y polifenoles totales con la actividad antioxidante.
La extraccin fue realizada en medio acuoso. El extracto de la
cscara madura fresca mostr las concentraciones ms elevadas de cido
ascrbico y antocianinas, mientras que el extracto de la cscara seca del
pintn mostr el mayor valor de cido ascrbico y polifenoles totales. La
mayor actividad antioxidante, fue el extracto de la cscara seca de muestra
pintn, frente a los radicales utilizados.



OBJETIVOS ESPECFICOS
Evaluar el contenido de cido ascrbico, antocianinas
y polifenoles totales, en la cscara fresca y seca de
camu-camu (Myrciaria dubia) en diferentes tiempos
de maduracin.
Evaluar la actividad antioxidante usando diferentes
tipos de radicales en la cscara seca y correlacionar el
contenido de cido ascrbico y polifenoles totales con
la actividad antioxidante.


OBJETIVOS GENERAL
Cuantificar el contenido de polifenoles totales y la
actividad antioxidantes.
INTRODUCCIN
El camu-camu (Myrciaria dubia) es una fruta nativa que se
encuentra en la Amazonia Peruana; esta se caracteriza
principalmente por su alto contenido en cido ascrbico, que supera
significativamente a otros ctricos.
Los antioxidantes naturales son apreciados porque pueden ser usados
en el diseo de alimentos benficos para la salud, debido a su
capacidad de neutralizar radicales libres, que contienen uno o ms
electrones desapareados porque al colisionar con el Radical Libre
(RL) le cede un electrn, oxidndose a su vez y transformndose en
un RL dbil no txico.




Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Rosidae
Orden: Myrtales
Familia: Myrtaceae
Subfamilia: Myrtoideae
Tribu: Myrteae
Gnero: Myrciaria
Especie: M. dubia
TAXONOMIA DE LA ESPECIE
VEGETAL

Figura 1. Myrciaria dubia
DIFERENCIAS DE METABOLITOS
Figura n2: muestras de
metabolitos primarios
Figura n3: muestras de metabolitos
secundarios.
Figura n4: RUTAS BIOGENTICAS DE METABOLITOS
SECUNDARIOS
Flavonoides
Antocianinas
Taninos condensados
METABOLISM
O
SECUNDARIO
RUTA
AC.SHIKIMATO
Fenoles simples
cidos fenolicos
Cumarinas
Taninos glicos
Lignanos

AMINOCIDOS
Alcaloides
RUTA AC.
MEVALONICO
Terpenos
Esteroi
des
RUTA ACETATO
MALONATO
Quinonas
Antraquinonas
Figura n5: RUTA DEL CIDO SHIKMICO
POLIFENOLES TOTALES

Conjunto heterogneo
de molculas que
comparten la
caracterstica de
poseer en su
estructura varios
grupos bencnicos
sustituidos por
funciones hidroxilicas.

Clasificacin de los
compuestos fenolicos
NO FLAVONOIDES
Serie
Benzoico
Serie
Cinmica
Estilbenos
Taninos
hidrolizables
FLAVONOIDES
Antocianos
Flavanoles
Oligmeros
Flavonas
Flavonoles
Monmero
s
Taninos
Condensados
Isoflavonas
Figura n6: 1- fenolbenceno Esquema n1: Clasificacin de los polifenoles
Figura n8 :Estructura qumica y
ejemplos de pelargonidina
(geranios), cianidina (ciruelas
negras) y delfinidina en especies
como las violetas
Figura n7: Estructura y sustituyentes de las
antocianinas
COMPUESTOS FENOLICOS DEL TIPO FLAVONOIDES
ANTOCIANINAS
Las antocianinas son los responsables
de la gama de colores desde rojo-azul,
pertenecientes a la familia de los
flavonoides, compuestos por dos anillos
aromticos A y B unidos por una cadena
de 3 C.
EFECTO DEL pH
Figura n9: Estructura y estabilidad de las
antocianinas a diferentes valores de pH.
La acidez tiene un
efecto protector sobre la
molcula. En soluciones
acuosas a valores de pH
inferiores a dos, s
encuentra en su forma ms
estable de catin flavilio de
color rojo intenso. Tanto la
pseudobase como la
chalcona, son formas
incoloras y bastante
inestables.
ANTOCIANINAS
DELFIDINA-3-GLUCOSIDO
Frmula estructural: 2-(3,4,5-
trihydroxyphenyl)chromenylium-3,5,7-triol
Figura n 10: Estructura de la delfidina-3-glucosido
ANTOCIANINAS
cianidina-3-glucosido
Frmula estructural: 3,5,7,3',4'-
Pentahidroxyflavilium, 2-(3,4-Dihidroxifenil)-3,5,7-
trihidroxi-1-Benzopirilium


Figura n11: Estructura de la cianidina-3-
glucosido
ANTIOXIDANTES
Son compuestos que inhiben o retrasan la
oxidacin de otras molculas mediante la inhibicin de la
propagacin de la reaccin de oxidacin.
Figura n12: reaccin qumica de la molcula antioxidante

ACIDO ASCRBICO
Figura n13:Oxidacin del acido ascrbico
El cido ascrbico (AA) es muy sensible a la
oxidacin, el calor y la luz aceleran el proceso. En
tanto que factores como el pH, la concentracin de
oxgeno y la actividad del agua, influyen
poderosamente en la actividad de la reaccin.
MTODO pH Diferencial
Permite la estimacin del contenido de
antocianinas mediante el empleo de un agente
blanqueador (sulfito de sodio, perxido de
hidrgeno), y la medicin por espectroscopia de UV-
VIS.
MTODO REPORTADO POR HUNG Y
YEN
Determinacin del cido ascrbico por titulacin con el
reactivo 2,6-diclorofenolindofenol, la que se reduce por medio
del cido ascrbico.
Figura n13 : reaccin del 2,6-diclofenolindofenol frente al cido ascrbico.
MTODO DE AZUL DE PRUSIA
Este mtodo se basa en la reduccin de los
iones Fe
3+
a Fe
2+
, por los polifenoles mostrando
una coloracin azul conocido como azul de prusia
formando el complejo ferrocianuro ferroso. Tiene
como ventaja la rapidez de la prueba debido a la
formacin del color azul, lo que ofrece versatilidad
para la determinacin espectrofotomtrica.
MTODO PARA CUANTIFICAR
ANTIOXIDANTES
1.- DDPH
El mtodo se basa en la capacidad del radical libre estable 1,1-difenil-2-
picrilhidrazilo para reaccionar con donadores de H.
Presenta un mximo de absorbancia a 515 nm y genera un producto
incoloro cuando captura un antioxidante.








Figura n 14: Reaccin del DPPH
2.- ABTS
+
Mide el tiempo que tarda el radical ABTS en ser oxidado hasta el
radical libre estable ABTS
+
en presencia de compuestos
antioxidantes como los polifenoles, que retarden dicha oxidacin
o bien disminuyen la absorbancia de la disolucin por captura
del radical. La absorbancia se mide a 734 nm, longitud de onda
en la que el radical coloreado presenta un mximo de absorcin
Es el ms indicado para ensayos de compuestos coloreados,
( antocianinas del camu camu).

3. PEROXILO

Con este mtodo se cuantifico la actividad antioxidante
mediante el radical libre pirxilo
Un radical libre es un molcula que tiene uno o ms
electrones no apareados girando en sus rbitas externas. Es por
esto que el perxido acta oxidando molculas en la muestra para
as adquirir un equilibrio qumico.
DISEO EXPERIMENTAL
1.-TOMA DE MUESTRAS
2.-CUANTIFICACIN DE ANTOCIANINAS
3.- CUANTIFICACIN DE CIDO ASCRBICO
4.-CUANTIFICACIN DE POLIFENOLES
5.- CUANTIFICACIN ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE:
Mtodo de DDPH
Mtodo de ABTS
+

Mtodo de perxilo

Estados de
Maduracin
Color de la
Cscara
Consistencia del
fruto
Fotografa
01
(Verde)
0-25 % de
pigmentacin
rojiza
Rgida y dura
02
(Pintn)
26-50 % de
pigmentacin
rojiza
Rgida
03
(maduro)
75-100 % de
pigmentacin
rojiza
Rgida
Tabla 1 .-Atributos fsicos de las muestras biolgicas de los frutos de camu
camu empledos
MUESTRAS BIOLGICAS
CUANTIFICACIN DE ANTOCIANINAS
MTODO DEL
pH
DIFERENCIAL
Agitacin Filtro
2 alcuotas
(2mL c/u)
Buffer pH 1.0 Buffer pH 4.5
Registrada a
510 nm
0.5g de
muestra
Solvente
agua
CUANTIFICACION DE CIDO ASCRBICO
MTODO
REPORTADO
POR HUNG YEN
Muestra
100uL
Extracto
acuoso
900uL de 2.6
diclorofenolin
dofenol
Muestra
control
100uL de
cido
oxlico
900uL de 2.6
diclorofenoli
ndofenol
Absorbancia a
510nm
CUANTIFICACIN DE POLIFENOLES TOTALES
MTODO DE
AZUL DE
PRUSIA
1mL de
Extracto acuoso
3mL de FeCl3 0.1M
en
HCl 0.1N
3mL de
K3Fe(CN)6
0.008M
Absorbancia
720nm
RADICAL 2.2-DIPHENYL-1-PICRILHYDRAYL (DPPH)
MTODO DE AZUL DE
PRUSSIAN
Etanol al
96%
950uL de
DPPH
(100uM)
50uL de
muestra
Absorbancia a
515nm
EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE EN
LA CASCARA DE CAMU-CAMU
(3-etilenbenzotiazolino-6cido sulfnico) (ABTS
+
)
Mtodo
reportado por
Pelligrini
(1999).
REALIZADO
100uL de
extracto acuoso
en tres estados
de madures.
DILUCIONES
Con 900uL
de ABTS
+

REACCIN
Por tiempo de 10
minutos.
Absorbancia a 374 nm
RADICAL PEROXILO
Mtodo de TRAP
10uL de
extracto
Reaccionar
con 990uL
del radical
pirxilo
Absorbanci
a a 414nm a
intervalos
de 30
segundos
durante 10
m
TRAP ( Poder Total de Actividad Reductora)
Se observa que en estado fresco la cascara maduro de camu-camu,
presenta mayor contenido de antocianinas
ANTOCIANINAS
CIDO ASCRBICO
Figura N1:Contenido de cido ascrbico de la cascara
de camu-camu en estado fresco y seco.
POLIFENOLES TOTALES



ACTIVIDAD ANTIOXIDANTES
DPPH
ABTS
+

Tabla 3. Coeficiente de inhibicin de la cascara
del camu camu frente al cation ABST
RADICAL PEROXILO
CONCLUSIONES
La mayor actividad antioxidante lo present el
extracto acuoso de la cscara seca del fruto pintn
La cscara de camu-camu en estado fresco que
present el mayor contenido en antocianinas y cido
ascrbico fue la madura
La mayor actividad antioxidante, fue el extractos de la
cscara seca de muestra pintn, frente a los radicales
DPPH, ABTS+ y Peroxilo.

GLORIA ASTRID GARZN, LAS ANTOCIANINAS COMO COLORANTES NATURALES Y
COMPUESTOS BIOACTIVOS, ENCONTRADO EN:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0120-
548X2008000300002&script=sci_arttext
LILIANA ANDREA SANTACRUZ CIFUENTES, ANLISIS QUMICO DE
ANTOCIANINAS EN FRUTOS SILVESTRES COLOMBIANOS, ENCONTRADO EN
: http://www.bdigital.unal.edu.co/5351/1/197518.2011.pdf
GREGORIO MARTINEZ SANCHEZ,ESPECIES REACTIVAS DEL OXGENO Y
BALANCE REDOX, PARTE I: ASPECTOS BSICOS Y PRINCIPALES ESPECIES
REACTIVAS DEL OXGENO,ENCONTRADO EN :
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0034-
75152005000300009&script=sci_arttext
ENA VILMA VELAZCO CASTRO, RODNEY VEGA VIZCARRA, ESTABILIDAD
DEL CIDO ASCRBICO EN PRODUCTOS ELABORADOS DE CAMU CAMU
Myrciaria dubia, ENCONTARDO EN :
http://www.iiap.org.pe/promamazonia/sbiocomercio/Upload%5CLineas%5CDo
cumentos/254.pdf