MADURACIN LINFOCITARIA Y

EXPRESIN DE GENES DE LOS

RECEPTORES ANTIGNICOS
Prof. Manzur Hassanhi
Fac. Medicina LUZ
Inmunologa

MADURACIN, ACTIVACIN Y REGULACIN LINFOCITOS I
Introduccin
Linfocitos receptores antignicos
altamente diversos
Diversidad generada durante la maduracin
de linfocitos desde clulas precursoras
Clulas precursoras no expresan receptores
antignicos y no pueden reconocer Ags
Coleccin de diferentes receptores
antignicos repertorio linfocitario
Introduccin
Maduracin linfocitos expresin
gnica secuencial lleva a:
Proliferacin de las clulas en desarrollo
Generacin de un repertorio linfocitario
diverso
Cambios fenotpicos
Adquisicin de competencia funcional
Procesos de seleccin tolerancia a lo
propio
Caractersticas generales de la
maduracin linfocitaria
Etapas secuenciales
Maduracin temprana compromiso con
linaje linfoide y proliferacin
Clulas troncales
Expresin genes de receptores linfocitarios
Seleccin repertorios linfocitarios maduros
En cada etapa las clulas sufren
cambios genticos y fenotpicos
Recombinacin genes y expresin
de receptores antignicos
Expresin receptor antignico evento
central en la maduracin linfocitaria
Generacin diversidad
Necesario para procesos de seleccin
Cada clon linfocitos expresa R antignico con
estructura de unin a antgenos nica
10
7
clones LB y T diferentes
Capacidad de generar repertorio diverso no
requiere una cantidad igual de genes
diferentes
Recombinacin
Recombinacin genes y expresin
de receptores antignicos
R antignicos envan seales a linfocitos en desarrollo
necesarias para su sobrevida y maduracin
Ausencia expresin R antignico apoptosis linfocito
Asegura produccin solamente de linfocitos tiles,
con receptores antignicos funcionales
Procesos de seleccin repertorios linfocitarios
Expresin de receptores antignicos por linfocitos inmaduros
Eliminacin de linfocitos potencialmente autorreactivos

Adquisicin de competencia
funcional
En etapas tardas de maduracin linfocitos
adquieren capacidad de responder a Ags y
generar mecanismos efectores para
eliminarlos
Maduracin funcional involucra expresin de
diferentes molculas de superficie e
intracelulares que participan en la activacin
y funciones efectoras de linfocitos
Recombinacin genes receptores
antignicos
Genes de receptores antignicos formados
por secuencias separadas espacialmente que
deben unirse para producir genes funcionales
que codifiquen los receptores antignicos
Organizacin de lnea germinal todas las
clulas del organismo
Genes funcionales de receptores antignicos
se crean slo en linfocitos en desarrollo
reordenamientos DNA
Loci inmunoglobulinas (BCR)
3 loci codifican cadenas pesadas, k, l
Mltiples copias de 3 4 tipos de
segmentos gnicos
Cadena liviana V + J, C
Cadena pesada V + D + J, C
Grupos de segmentos gnicos
separados por DNA no codificante
Segmento
Cadenas livianas Cadenas pesadas
k l H
Variable (V) 40 30 65
Diversidad (D) 0 0 27
Unin (J) 5 4 6
Organizacin loci TCR
3 loci diferentes a (d), b, g
Cada locus mltiples copias segmentos
Cadena a y g V + J, C
Cadena b y d V + D + J, C
Recombinacin genes de
receptores antignicos
Acercamiento de segmentos gnicos
Corte DNA extremos segmentos gnicos
Unin genes que pueden transcribir
Proceso mediado por enzimas
Recombinasa V(D)J
Durante recombinacin V(D)J se
aaden/remueven nucletidos desde las
uniones nucletidos N y P
Este proceso genera diversidad
Generacin de diversidad de
repertorios linfocitarios
Diversidad de combinacin
Recombinaciones combinaciones al azar
N genes V x J (x D) en cada locus
Aumenta diversidad al combinar regiones V
Ig (V
L
+ V
H
), TCR (Va + Vb)
Diversidad real es menor que la terica
Diversidad de la unin principal
contribuyente a la diversidad
Remocin / adicin de nucletidos en las uniones
de segmentos gnicos nucletidos P y N
Maduracin de linfocitos B
Eventos principales
Reordenamiento y expresin de genes Ig
Proliferacin de linfocitos B inmaduros
Seleccin de un repertorio linfocitario maduro
Maduracin linfocitos B MO
Hgado fetal
Etapas de maduracin caracterizadas por
Patrn de expresin de genes Ig
Molculas de superficie marcadores fenotpicos
del estadio de maduracin
Exclusin allica
Cada LB puede expresar cadenas pesadas
codificadas por 1 cromosoma
Expresin exitosa de cadena m con formacin de
receptor pre-B inhibe el reordenamiento de
locus cadena pesada en el otro cromosoma
1
er
reordenamiento fallido reordenamiento de
locus cadena pesada del otro cromosoma
Falla en ambos locus apoptosis (frecuente)
Asegura que el clon de linfocitos B tenga 1
sola especificidad
Exclusin allica cada linfocito
de animal heterocigoto expresa un
solo tipo de Ig, a pesar de heredar
genes para 2 tipos de Ig
Clula B inmadura
Reordenamiento cadena liviana k o l
Locus cadena k se reordena primero
reordenamiento l slo en caso falla k
Exclusin de cadena liviana
Tambin existe exclusin allica
Cadena L asociacin con cadena pesada m
IgM de membrana linfocito no funcional
Ags propios en mdula sea muerte o anergia
Clula B madura
Coexpresin de IgM e IgD de membrana
Cadenas pesadas m o d unidas a la cadena liviana
reordenada
Tienen la misma regin V igual especificidad
antignica
Adquisicin de competencia funcional
Presentes en circulacin y rganos linfoides
perifricos
Seleccin de repertorio
maduros de linfocitos B
Procesos de seleccin LB inmaduros
Seleccin positiva en MO no bien definida
LB con BCR funcional pueden completar maduracin?
Seleccin negativa LB inmaduros que expresan
BCR que reconoce Ags propios con alta afinidad
apoptosis (Autotolerancia)
Edicin del receptor
Reconocimiento Ags lleva a reactivacin enzimas de
recombinacin nueva recombinacin VJ en cadena liviana

Linfocitos B-1
Subpoblacin linfocitos B 5 10% linfocitos B en
circulacin y rganos linfoides
Expresin molcula CD5
Receptores antignicos de diversidad limitada
Produccin de anticuerpos naturales
IgM producida espontneamente
Reconoce polisacridos microbianos y algunos autoAgs
1 lnea de defensa contra Ags microbianos
comunes??
Leucemias linfocticas crnicas la mayor parte
deriva de linfocitos B CD5
+
Maduracin de linfocitos T
Etapas
Recombinacin somtica y expresin genes
TCR
Proliferacin celular
Seleccin inducida por antgeno
Adquisicin de fenotipo maduro y
capacidad funcional
Proceso similar al de linfocitos B
Rol del timo en maduracin
linfocitos T
Principal sitio maduracin LT timocitos
Timo involuciona con la edad remanente??
Sitios extratmicos de maduracin??
Timocitos ms inmaduros TCR-, CD4-, CD8-
Timocitos maduros migran desde la corteza a
la mdula del timo salen a la circulacin
95% clulas mueren por apoptosis


Estimula proliferacin clulas pre-T
Estimula recombinacin cadena a del TCR
Estimula paso de clula doble negativa a
doble positiva
Exclusin allica cadena b
No existe exclusin allica en cadena a
puede haber reordenamientos en ambos
cromosomas
Hasta 30% LT maduros expresan 2 tipos de
TCR 2 cadenas a + un tipo de cadena b

Receptor de clula pre-T
Timocitos doble positivo
Seleccin estimulada por reconocimiento
antgenos en el timo
Responsables de preservacin linfocitos tiles y
eliminacin de clulas potencialmente peligrosas
Repertorio inmaduro de linfocitos T
Reconocen cualquier Ag peptdico (propio o
extrao) presentado por cualquier molcula MHC
(propia o extraa)
Algunas clulas no reconocen ningn tipo de MHC
Procesos de seleccin
Procesos de seleccin
Linfocitos T tiles deben reconocer Ags
extraos presentados por MHC propio
Linfocitos T que reconocen Ags propios con
alta avidez son potencialmente peligrosos
pueden gatillar autoinmunidad
Timocitos doble positivo expresan TCRab
reconocen pptidos propios presentados por
molculas MHC propias en el timo
No existen pptidos antignicos ni molculas MHC
extraas en el timo
Seleccin positiva
Timocitos con TCR que se unen dbilmente a
complejos MHC propio pptido propio son
estimulados para sobrevivir
TCR que no reconoce MHC propio apoptosis
Asegura repertorio restringido por MHC propio
Determina restriccin MHC I II

Seleccin negativa
Timocitos con TCR que se une fuertemente a
Ags peptdicos propios asociados a MHC
delecin por apoptosis
Elimina LT autorreactivos contra Ags propios
ubicuos
Asegura LT tolerantes a la gran mayora de
los Ags propios
Tolerancia central
Linfocitos Tgd
Linaje diferente a linfocitos Tab
Precursor comn
Diversidad terica del TCRgd es mayor
que la del TCRab
Diversidad real es limitada uso de slo
algunos segmentos V, D y J

ACTIVACIN DE LINFOCITOS T
MADURACIN, ACTIVACIN Y REGULACIN LINFOCITOS II
Introduccin
Fases de activacin y efectora de la respuesta
inmune adaptativa celular gatilladas por
reconocimiento antgenos por linfocitos T
Unin complejo MHC pptido a TCR
expansin y diferenciacin linfocitos T,
funciones efectoras de linfocitos T
Subpoblaciones linfocitos T requerimientos
de activacin y patrones de activacin
diferentes
Caractersticas generales de la
activacin linfocitos T
LT naive reconocen Ags y son activados en rganos
linfoides perifricos expansin pool LT especficos
de Ag, diferenciacin en linfocitos efectores y de
memoria
Ags proteicos que penetran por epitelios captados por
APC profesionales y transportados a ganglios y bazo
LT efectores reconocen antgenos en rganos
linfoides perifricos o en tejidos perifricos no
linfoides activacin
Migran a cualquier sitio de inflamacin o infeccin
Caractersticas generales de la
activacin linfocitos T
Activacin de linfocitos T requiere
Reconocimiento del Ag presentado por APC
Coestimuladores
Citoquinas producidas por APC o LT
Estmulos actan en conjunto para inducir las
fases secuenciales de las respuestas de LT
Activacin inicial
Proliferacin
Diferenciacin
Caractersticas generales de la
activacin linfocitos T
Reconocimiento MHC pptido por TCR 1
seal de activacin
Especificidad de la respuesta
Participacin molculas accesorias
Correceptores CD4/CD8 reconocimiento
molculas MHC II/I, transduccin de seales de
activacin
Molculas adhesin estabilizan unin LT APC
Receptores coestimuladores
Citoquinas
Caractersticas generales de la
activacin linfocitos T
Linfocitos T naive activados por
clulas dendrticas
Linfocitos T efectores activados por
diferentes APC
Macrfagos, linfocitos B
Menor dependencia de coestimuladores
Respuestas funcionales de
linfocitos T
Respuestas de linfocitos T al
reconocimiento antignico
Secrecin de citoquinas
Proliferacin
Diferenciacin

Secrecin de citoquinas
Precoz
Seales derivadas de Ag y coestimuladores
estimulan sntesis citoquinas
IL-2 principal citoquina LT naive
Factor de crecimiento para linfocitos T
Diferenciacin LT naive en subpoblaciones
que secretan diferentes tipos de citoquinas
Mejor definidas LT CD4
+
T
H
1 y T
H
2
Tambin aumenta sntesis de receptores
citoquinas
Proliferacin
Mediada principalmente por un mecanismo
autocrino
Linfocito T que reconoce Ag secreta
citoquinas que estimulan su propio
crecimiento
Receptores de citoquinas
Principal factor de crecimiento autocrino
IL-2
Proliferacin linfocitos T naive expansin
clonal
Proliferacin
Antes de reconocimiento Ag frecuencia
linfocitos T naive especficos para un Ag
determinado ~ 1 / 10
5
10
6
linfocitos
Despus de reconocimiento Ag
Linfocitos T CD8
+
a 1/10
Linfocitos T CD4
+
a 1/100 -1000
Nmero linfocitos rpidamente despus de
eliminacin del Ag
Linfocitos de memoria sobrevivientes 1/10
4

clulas
Diferenciacin en clulas
efectoras
Algunas clulas de la progenie linfocitaria se
diferencian en linfocitos efectores
eliminacin del Ag
Activacin de otras clulas
Proceso dependiente de
Reconocimiento Ag
Otros estmulos coestimuladores y citoquinas
producidas en el sitio de reconocimiento Ag
Diferenciacin en clulas
efectoras
Progenie linfocitos T CD4
+
estimulados
por Ag se diferencia en clulas que
activan macrfagos y linfocitos B
Subpoblaciones T
H
1, T
H
2
Progenie de linfocitos T CD8
+

eliminacin de clulas blanco que
expresan complejos MHC pptido
reconocidos por CTL
Diferenciacin en clulas de
memoria
Algunas clulas de la progenie de linfocitos T
estimulados se diferencia en clulas de larga
duracin y funcionalmente inactivas clulas
de memoria
Sobreviven por largos perodos despus de la
eliminacin del Ag
Responsables de la respuesta inmune 2
frente a exposiciones subsecuentes al mismo
antgeno
Diferenciacin en clulas de
memoria
No se conocen los mecanismos de generacin
y sobrevida de las clulas de memoria
Diferenciacin a partir de linfocitos efectores
o linfocitos estimulados por Ag??
Sobrevida de clulas de memoria no requiere
reconocimiento de Ags
Acumulacin a lo largo de la vida
Recin nacido casi todos los linfocitos son naive
Adulto linfocitos son clulas de memoria
Diferenciacin en clulas de
memoria
Clulas de memoria son capaces de
migrar rpidamente a sitios perifricos
de infeccin o inflamacin retenidas
Altos niveles de integrinas y CD44
No tienen actividad funcional hasta ser
expuestas nuevamente al Ag
Rpida proliferacin funcin efectora
Declinacin de las respuestas
de linfocitos T
Respuesta de linfocitos T declina rpidamente
despus de la eliminacin del Ag
Restauracin del estado de reposo del
sistema inmune homeostasis
Mayor parte de los linfocitos T activados por
Ag muere por apoptosis
Supresin de estmulos de sobrevida aportados
por Ag
Supresin de citoquinas producidas durante la
inflamacin
Rol coestimuladores en
activacin de linfocitos T
Proliferacin y diferenciacin de LT requiere
molculas producidas por APC junto a las
seales inducidas por el reconocimiento Ag
Coestimuladores
1 seal de activacin unin Ag a TCR
Complejos MHC pptido
2 seal de activacin coestimuladores
Ausencia coestimulacin apoptosis o
anergia
Rol coestimuladores en
activacin linfocitos T
Va de coestimulacin mejor caracterizada
CD28 B7
CD28 molcula de superficie linfocito T
B7-1, B7-2 expresadas en APC activadas
Esencial en activacin LT
CD28 transmite seales que estimulan
muchas respuestas de linfocitos T
Sobrevida linfocitos
Produccin de citoquinas IL-2
Diferenciacin LT naive en clulas efectoras y de
memoria
Rol coestimuladores en
activacin linfocitos T
Linfocitos T activados expresan CD40L
unin a CD40 expresado en APCs
Seales que aumentan expresin B7
Reconocimiento Ag por linfocitos B
estimulacin expresin B7
LB estimulados por Ag son capaces de activar a LT
y recibir colaboracin de LT helper
Clulas dendrticas maduras expresan los
mayores niveles de coestimuladores
estimuladores ms potentes de LT naive
Rol coestimuladores en
activacin linfocitos T
Ausencia de coestimuladores en APCs no
estimuladas mantencin tolerancia
Presentan Ags propios a linfocitos T
LT potencialmente autorreactivos no activados,
anrgicos
LT efectores previamente activados y de
memoria menos dependientes de
coestimulacin CD28-B7 que los naive
Pueden responder a Ags presentados por varios
tipos de APCs residentes en tejidos no linfoides
con baja o nula expresin B7
Transduccin de seales por
TCR complex
Objetivo vas de sealizacin de linfocitos T activar
transcripcin de genes silentes en linfocitos T naive
Productos median respuestas y funciones de linfocitos T
activados
Reconocimiento Ag por TCR inicia una secuencia de
seales bioqumicas activacin transcripcin de
algunos genes y entrada en ciclo celular
TCR no tiene capacidad de sealizacin asociado a
protenas que pueden unir enzimas y molculas
adaptadoras
Transduccin de seales por
TCR complex
Seales del complejo de sealizacin de
membrana activan varias vas bioqumicas
importantes
Activacin vas enzimticas en minutos
Vas enzimticas inducen activacin de
factores de transcripcin estimulacin
expresin gnica
Horas
Existen 3 FT crticos para respuestas de
linfocitos T NFAT, AP-1, NFkB
Activacin linfocitos T