UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NCLEO BOLVAR
ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA Y MICROBIOLOGIA
CATEDRA: PARASITOLOGA. ENFERMERIA.


COCCIDIOS

LICENCIADA MNICA TAGLIOLA
Infeccin emergente:
Una infeccin que ha aparecido recientemente en una poblacin
Su incidencia se ha incrementado en las ltimas dos dcadas
Infeccin re-emergente:
Una infeccin que ha existido en el pasado pero su incidencia o
distribucin geogrfica se ha incrementado rapidamente.
Factores especficos precipitantes pueden ser identificados

Raramente los patogenos aparecen de novo.

Los patogenos que causan nuevas enfermedades
ya estan presentes en el ambiente, y para entender
su emergencia se debe estudiar no solo el agente
causal sino los factores climaticos, politicos,
economicos y sociales (Wilson, 1994).

Las Enfermedades Infecciosas emergentes:
Coccidios Intestinales: Generalidades
Las infecciones humanas son causadas por Cryptosporidium
parvum, Cyclospora cayetanensis e Isospora belli.

Transmisin fecal-oral

Diarrea es la principal manifestacin clnica

Individuos inmunocompetentes e inmunocomprometidos

Criptosporidiosis produce la ms severa y prolongada
enfermedad en pacientes con SIDA.

Coccidios Intestinales: Generalidades

Ciclospora cayetanensis es importante causa de diarrea en
inmunocompetentes.

Isosporiosis es grave y prolongada en imnocomprometidos
aunque se presenta tambin en inmunocompetentes.
Coccidios. Taxonomia
Reino Protista
Filo Apicomplexa (Sporozoa)
Clase Sporozoa (Sporozoasida)
Orden Eucoccidida (Eucoccidiorida)
Suborden Eimeriina (Eimeriorina)
Famlia
Sarcocystidae Eimeridae Cryptosporidae

Cryptosporidium
C. parvum (Mamiferos)
C. muris
Eimeria
Isospora
Cyclospora
Toxoplasma
Sarcocystis
Neospora
Babesia, Theileria
Cryptosporidiosis.

Es una infeccin gastrointestinal (bsicamente)
causada por protozoarios coccidios pertenecientes al
gnero Cryptosporidium

Son parsitos obligatorios, pequeos, que afectan las
clulas epiteliales de los vertebrados y pueden causar
una diarrea de corta duracin en inmunocompetentes y
una enfermedad prolongada, parecida al clera, en
inmunosuprimidos (Chacin Bonilla, 1995).


Durante los ltimos 30 aos, nuestro concepto de
cryptosporidiosis ha cambiado desde una enfermedad
rara, asintomtica, para una importante causa de
diarrea en animales y humanos en todo el mundo
(Mosier & Oberst, 2000).

Cryptosporidiosis.
Cryptosporidium parvum
C. parvum no es nuevo: Tyzzer 1907
Patgeno de animales humano (Nime et al., 1976)
Patgeno emergente SIDA
Parsito oportunista (inmunocompetentes tambin)
Principal patgeno entrico
Resistente al cloro
Ubicuo en muchos animales (mamferos)
Asociado a agua (enfermedad hdrica)
Dos genotipos: I o H: infeccin humana/zoonotico
II o C: animales/humanos
No existe tratamiento paliativo o definitivo
Pacientes con Diarrea Controles sin diarrea
Inmnocompetentes
Industrializados 2,2% (0,26%-22%) 0,2% (0%-2,4%)
Subdesarrollados 6,1% (1,4%-40,9%) 1,5% (0%-7,5%)
HIV Positivos
Industrializados 14% (6%-70%) 0% (0%-0%)
Subdesarrollados 24% (8,7%-48%) 5% (4,9%-5,3%)
Tasa de infeccin por C. parvum entre personas inmunocompetentes e
infectadas con HIV en reas industrializadas y en vas de desarrollo.
Cryptosporidium parvum
Ciclo monoxenico
No especificidad de huesped
Ooquiste sin esporoquiste con 4 esporozoitos
Microgametos sin flagelos
Intracelular extracitoplasmtico
Ciclo: fase asexual sexual
Ooquistes: 80% pared gruesa (ambiente)
20% (autoinfeccin)
Cryptosporidium parvum
Variable Cyclospora Cryptosporidium I sopora
Tamao Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19
No. esporoquistes 2 Ninguno 2
No. esporozoitos 2 4 4
ZNm Variable Si Si
Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable
Transmisin

1) Directa: persona a persona. Los ooquistes son infectantes
al ser expulsados

2) A travs del agua: con 30 ooquistes puede ocurrir la
infeccin (URBANA)

3) Zoonotica: ambos genotipos estn presentes en animales
(RURAL)

Crytosporidium parvum
A. Quiste. Soluc. Salina
B. Quiste. ZNm
A
B
Diagnstico
A. Diagnostico parasitolgico
Demostracin de ooquistes en heces
Visualizacin de ooquistes/otros estadios en secreciones
y biopsia intestinal
1. Mtodos de concentracin
2. Coloraciones (ZNm, Safranina,
quimioluminescentes
3. Histologa

B. Deteccin de Antgenos en Heces
Kit comerciales (IFI, IFD, ELISA)

Mtodos directos
C. Diagnostico Inmunolgico
IFI
Ac monoclonales y policlonales
ELISA
Inmunoblot (Wester Blot)
D. Electroforesis
E. Biologia molecular: PCR
Mtodos indirectos
Al fresco. Grnulos negros en
los ooquistes
Contraste de fase. Flotacion de
Sheather. Ooquistes refractiles.
C. parvum
El mtodo de flotacin de Sheather solo es usado con
heces frescas
Kinyoun. Ooquistes de Rojo
intenso con granulos negros
caracteristicos.
Kinyoun. Ooquistes de Rojo
intenso con granulos negros
caracteristicos. Diferciar de las
levaduras.
C. parvum
Varias modificaciones de la coloracin ZN (acid-fast) pueden ser
usadas. La coloracin de los ooquistes varia segn la
modificacin usada de rosado a rojo intenso.
Cyclospora cayetanensis
Protozoario coccidio de reciente descripcin
Enteropatgeneo emergente
Se Busca, se encuentra
No transmisin persona a persona
Distribucin estacional (meses mas calientes)
Transmisin: alimentos y agua
Diarrea, enfermedad biliar en SIDA
Por resolver: supervivencia ambiental (alimentos ,
vegetales), potencial zoonotico, transmisin a
humanos, epidemiologa.
Cylospora cayetanensis
Taxonoma
Reino Protista
SubFilo Apicomplexa
Subclase: Cossidiasina
Orden Eucoccidiorida
Familia Eimeriidae
Gnero Cyclospora

Ciclo vital de
C. cayetanensis
Identificacin de ooquistes en especimenes fecales por microscopia
de luz
Otros mtodos bajo investigacin
A. Microscopia
Guas bsicas
1) Muestras de heces multiples (al menos 3)
2) Usar mtodos de concentracin (Formol eter)
3) Tcnica diagnostica de eleccin:
Disponibilidad de equipos y reactivos
Experiencia
Tiempo y costo
PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE
Cyclospora
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora
1) Montaje el fresco
a) Microscopia de campo brillante (Contraste diferencial por interferencia)
Esferas refractiles
Otros objetos con aspecto similar
No permanente
b) Fluorescencia bajo LUV
Autofluorescencia verde (330-335 nm)
Otros objetos con aspecto similar
No permanente
Microscopio de fluorescencia
Contraste de fase: fcil
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora
2) Coloracin Acido-alcohol resistente modificada de Kinyoun
Color rojo sobre un fondo verde azulado
Pueden tener tonos variables (algunos no coloreados)
Pueden no ser perfectamente redondos (colapsados o
distorcionados)
Grnulos y/o tener una pared caracterstica
Permanente
Artefactos (errores diagnsticos)
3) Coloracin con Safranina
Se colorean uniformemente de rojo a naranja
Requiere calentamiento (equipo adicional, p.e.
microonda)

1997: Safranina modificada con calentamiento en
microonda
(Visvesvara et al.)
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora
4) Otros Mtodos:
Coloracin tricromica
Los ooquistes pueden ser detectados pero no confirmados por este mtodo
Pueden aparecer no coloreados
Cuando por Tricromico se sospecha, usar las colroaciones anteriores para
confirmar
Identificacin histolgica en biopsias intestinales
No rutina
Varias observaciones
B. Ensayo de Esporulacin
C. Mtodos Moleculares
DIFERENCIACIN ENTRE OOQUISTES DE Cyclospora y
Cryptosporidium
Cyclospora
8-10 m
No visibles
Presente

No
No


Caracteristica
Tamao
Esporozoitos
Autofluorescencia
Ensayo de Anticuerpos
Fluorescentes directo
Ensayo inmunoenzimtico


Cryptosporidium
4-6 m
Discernibles
Ausente

Disponible
Disponible


Yodo de Dantoni Lugol
C. cayetanensis
Solucin Salina
Al fresco (heces recin emitidas: masa morular granular en su
interior dejando un espacio libre entre esta y la cubierta
externa.
Contraste de fase. Glbulos refractiles
dentro del ooquiste

Contraste de fase. 2
esporoquistes. Esporozoitos no
visibles

C. cayetanensis
Kinyoun.
C. cayetanensis
Kinyoun + Hematoxilina. Rojos
sobre fondo gris.
Epifluorescencia ultravioleta
C. cayetanensis
Kinyoun. C. parvun + C.
cayetanensis
Kinyoun. C. parvun + C.
cayetanensis
C. cayetanensis
Isospora belli
Pacientes con SIDA/ normales
Parasita enterocitos
Alli ocurre ciclo sexual y asexual
Ooquistes elptico no esporulados en las heces.
Polos finos y doble pared lisa.
Transmisin: agua y alimentos mas frecuente tropico
y en paises subdesarrollados.
?Demostracin de ooquistes alargados tpicos (20-33 m x 10-19
m) NO esporulados en las heces.
? Examen directo o concentracin (flotacin o sedimentacin).
? En ZNm (acid-fast) el esporoblasto dentro del ooquiste se
colorea de rojo
PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE I. belli
Al fresco. Heces recientes: Ooquiste con
1 esporoblasto
Despus de varias horas a
temperatura ambiente. Ooquiste con 2
esporoquistes.
Ooquistes esporulados no son
vistos en heces frescas
Kinyoun.
Kinyoun. Post-tratamiento
I. belli
Material preservado en formalina. Epifluorescencia
I. belli
Variable Cyclospora Cryptosporidium I sopora
Tamao Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19
No. esporoquistes 2 Ninguno 2
No. esporozoitos 2 4 4
ZNm Variable Si Si
Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable
ACIDO-ALCOHOL
MODIFICADA (Kinyoun)
C. parvum C. cayetanensis
I. belli
SAFRANINA