INDICE

Visin general: concepto y funcin

Caractersticas.
Estructura del CYP450
Localizacin
Nomenclatura y distribucin
Clasificacin : familias y subfamilias
Mecanismo enzimtico
Conceptos de biotransformacion y xenobioticos
Funcin biolgica : metabolismo de xenob. Y sust. Endgenas.
Ejemplos del metabolismo de xenobioticos
Ejemplos del metabolismo de comp. endgenos
Factores moduladores de la actividad de CYP450
Induccin enzimtica de CYP450
Bibliografa

VISION GENERAL
El termino citocromo P450 se refiere a una familia de hemoprotenas
(mas de 2000 isoformas ) presentes en bacterias, hongos, insectos,
plantas, peces, mamiferos y primates, que pueden ser consideradas
como oxigenasas universales (enzimas que utilizan oxigeno) debido
a la gran variedad de Rx que cataliza.

Las protenas citocromo P450 estan codificadas por una superfamilia
gnica que contiene centenares de genes.




Algunas ,en su mayora, estn encargadas del metabolismo
de xenobiticos y otras de la biosntesis de compuestos
endgenos.


VISION GENERAL
Los sustratos de estos sistemas enzimaticos incluyen :
Colesterol
Hormonas
esteroideas
Acidos grasos
Compuestos
sintetizados
endgenos
Frmacos
Aditivos alimentarios
Pesticidas
Humo de cigarro
Comp. industriales
Compuestos
exgenos
(XENOBIOTICOS)
CARACTERISTICA ESPECTRAL
La designacin de esta protena
como citocromo P450 se origino a
partir de su funcin espectroscpica,
antes que se conociera su funcin
cataltica.
La forma reducida de esta
hemoproteina se une al monxido de
carbono (CO) para dar lugar a un
espectro de absorbancia con un pico
aprox. a los 450nm, de aqu el
nombre referido a un pigmento.



CARACTERISTICAS
Estn clasificadas como OXIDOREDUCTASAS (E.C.
1.14.14.1).
Asociados a otros componentes de la menbrana del
reticulo endoplasmatico liso como citocromo p450-
reductasa y citocromo b5.
Versatilidad funcional y elevado numero de sustratos
capaz de metabolizar.
Poseen baja especificidad de sustrato.
Actividad monooxigenasa y dependientes de NADPH.
Los citocromos P450 activan OXIGENO MOLECULAR
para catalizar la oxidacin de hidrocarburos inactivados
mediante la siguiente reaccin (el ciclo cataltico se ver
mas adelante).
ESTRUCTURA
En las estructuras cristalinas de la enzima libre,
disponibles hasta el momento, se observa un grupo
hemo , en el cual el hierro se encuentra unido a un
grupo tiol (-SH) de una cisteina y a una molcula de
agua.

Grupo
hemo del
Cit P450
ESTRUCTURA
Estructura
secundaria y
terciaria de las
protenas P450.
Representacin
de CYP2C5. El
grupo hemo se
representa en
naranja y el
sustrato en
amarillo.
ESTRUCUTRA
La molcula de la enzima est constituida por una
combinacin de regiones a-hlice y de hojas (laminas
beta), principalmente en la regin de la protena que
rodea al grupo hemo.

La enzima permanece anclada a la membrana a travs
de una hlice hidrofbica cercana al extremo N-terminal,
por lo que la mayor parte de la protena se sita en la
cara citoslica de la membrana.

La alta conservacin de la regin del hemo, que se
corresponde con el centro cataltico del enzima, refleja
un mecanismo comn de transferencia de electrones ,
protones y de activacin de oxgeno.
Human CYP1A2 top and side view, J. Biol. Chem., Vol. 282,
14348-14355, May 11, 2007
LOCALIZACIN DEL CITOCROMO P450
CLASE I

En los organismos eucariotas los
p450 de clase I se encuentran
asociado a membrana interna de
mitocondria.

En los mamferos estos p450
catalizan diversos pasos de la
biosntesis de hormonas
esteroideas y vitamina D
3

CLASE II

La localizacin de la
enzima de clase II son
las mas abundantes en
eucariotas

Los P-450s y las NADPH-
citocromo P-450
reductasas no estn
asociados y ambos estn
anclados de forma
independiente en la cara
externa de la membrana
del retculo endoplsmico
mediante la regin
hidrofbica del extremo
amino-terminal.

LOCALIZACIN DEL CITOCROMO P450
DISTRIBUCION DEL CITOCROMO P450

REINO MONERA.
Citocromo P450 lpido
hidroxilasa de Bacillus
megaterium.las
hidroxilaciones de cidos
grasos en bacterias capaz
de catalizar la
monooxigenacin de cidos
grasos saturados de cadena
larga, alcoholes y amidas.
REINO FUNGI
El verstil REINO de los
hongos es ilustrado por su
capacidad para oxidar
xenobiticos al igual que por
su facilidad para sintetizar
metabolitos secundarios tales
como antibiticos, toxinas o
esteroides.
REINO VEGETAL.
Intervienen en los procesos
de sntesis y catabolismo de
hormonas, la oxidacin de
cidos grasos, las rutas
metablicas que conducen a
la lignificacin y la sntesis
de pigmentos y compuestos
de defensa (antioxidantes,
fitoestrgenos, aromas)
REINO ANIMAL. enzimas
que catalizan el metabolismo
de sustancias endgenas y
de substratos exgenos
Nomenclatura y Terminologa













Termino CYP (citocromo) y P450.


Familia 40%
Subfamilia 55%
CYP especifico


CPY
A 2
CPYA2
Nomenclatura y Terminologa
Nomenclatura y Terminologa
CPY 1 CPY 2 CPY 3 CPY 4 CPY
11
CPY
17
CPY
19
CPY
21
CPY
26
CPY
51
1A1
1A2
1B1
2 A6
2 A7
2 A13
2B6
2C8
2C9
2C18
2C19
2D6
2E1
3 A4
3 A5
3 A7
4 A1
4B1
4F2
4F3
4F8
11 A1
11B1
11B2
17 19 21 A2 26 A1
26B1
51
Clasificacin de las enzimas del
CYP 450
De acuerdo al modo en que se liberan los electrones
en el sitio cataltico procedente del NADPH
Clase I: Como donadores de electrones requieren
tanto de NADPH reductasa como de la redoxina
hierro-azufre.
Clase II: Necesitan nicamente P-450 reductasa y
FAD/FMN para la transferencia de electrones.
Son las ms comunes en eucariotas.
Clase III: No precisan de ningn donador de
electrones, son autosuficientes.
Clase IV: Reciben los electrones directamente del
NADPH.
Familias del CYP humano
Familia Funcin Miembros Nombres
CYP1
Metabolismo de drogas y
esteroides (especialmente
estrgenos)
3 subfamilias, 3 genes,
1 pseudogen
CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1
CYP2
Metabolismo de drogas y
esteroides
13 subfamilias, 16
genes, 16
pseudogenes
CYP2A6, CYP2A7, CYP2A13, CYP2B6,
CYP2C8, CYP2C9, CYP2C18, CYP2C19,
CYP2D6, CYP2E1, CYP2F1, CYP2J2,
CYP2R1, CYP2S1, CYP2U1, CYP2W1
CYP3
Metabolismo de drogas y
esteroides (incluyendo
testosterona)
1 subfamilia, 4 genes,
2 pseudogenes
CYP3A4, CYP3A5, CYP3A7, CYP3A43
CYP4
Metabolismo del cido
araquidnico
6 subfamilias, 11
genes, 10
pseudogenes
CYP4A11, CYP4A22, CYP4B1, CYP4F2,
CYP4F3, CYP4F8, CYP4F11, CYP4F12,
CYP4F22, CYP4V2, CYP4X1, CYP4Z1
CYP5 Tromboxano A
2
sintetasa 1 subfamilia, 1 gen CYP5A1
CYP7
Biosntesis de las sales biliares
(7-alpha hidroxilasa del ncleo
esteroideo)
2 subfamilias, 2 genes CYP7A1, CYP7B1
CYP8 Variada 2 subfamilias, 2 genes
CYP8A1 (prostaciclin sintetasa),
CYP8B1 (biosntesis de sales biliares)
CYP11 Biosntesis de esteroides
2 subfamilias, 3
genes
CYP11A1, CYP11B1, CYP11B2
CYP17
Biosntesis de esteroides 17-
alfa hidroxilasa
1-subfamilia, 1 gen CYP17A1
CYP19 Biosntesis de esteroides 1 subfamilia, 1 gen CYP19A1
CYP20 Desconocida 1 subfamilias, 1 gen CYP20A1
CYP21 Biosntesis de esteroides
2 subfamilias, 2
genes, 1 pseudogen
CYP21A2
CYP24 Degradacin de la Vitamina D 1 subfamilia, 1 gen CYP24A1
CYP26 Hidroxilasa del cido retinico
3 subfamilias, 3
genes
CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1
CYP27 Variada
3 subfamilias, 3
genes
CYP27A1 (biosntesis de sales biliares),
CYP27B1 (vitamina D3 1-alfa hydroxylase),
CYP27C1 (funcin desconocida)
CYP39
7-alfa hidroxilacin del 24-
hidroxicolesterol
1 subfamilia, 1 gen CYP39A1
CYP46 Colesterol 24-hidroxilasa 1 subfamilia, 1 gen CYP46A1
CYP51 Biosntesis del colesterol
1 subfamilia, 1 gen, 3
pseudogenes
CYP51A1 (lanosterol 14-alfa demetilasa)
Familia CYP1
Incluye dos subfamilias, 1A y 1B; a su vez 1A
presenta dos citocromos muy parecidos, CYP1A1
y CYP1A2. La subfamilia 1B solamente el
CYP1B1.

CYP1A2 se encarga de inactivar las
metilxantinas, varios antidepresivos y la
clozapina.

CYP1B1 es la principal enzima del metabolismo
de estrgenos carcinognicos y est involucrado
en la activacin metablica de procarcingenos
de hidrocarburos aromticos policclicos.

Familia CYP2
CYP2A: CYP2A6
5-10% del total CYP heptico microsomal.
Cumarina su principal sustrato. Tambien son la nicotina, metilterbutileter, N-
nitrosodietilamina, N-nitrosobenzilmetilamina

CYP2B: CYP2B6
Metabolismo de nicotina, bupropin, etc.
Los niveles en cerebro se encuentran elevados en fumadores y alcohlicos.

CYP2C:
CYP2C9: Metaboliza warfarina, fenitona y algunas sulfonilureas
CYP2C19: Metaboliza diazepan y propanolol.

CYP2D: CYP2D6
2% del total CYP heptico microsomal. Metaboliza 20-25% de los frmacos.
Metaboliza fluoxetina, codena y dextrometorfano.

CYP2E: CYP2E1
Participacin en el metabolismo del etanol
7% del total CYP heptico, se encuentra tambin en cerebro y pulmn.
Familia CYP3A
Presencia clnicamente relevante en la mucosa
intestinal.

El metabolismo gastrointestinal debido CYP3A
contribuye a la baja disponibilidad de muchos
frmacos por va oral.

CYP3A4:

Metaboliza el 55% de la drogas en uso.
30% del total CYP heptico.


MECANISMO ENZIMATICO
MECANISMO ENZIMATICO
Es preciso tener en cuenta que las oxidaciones catalizadas por el citocromo p450 son
reacciones de monooxigenacion dependientes de NADPH y para las que utiliza oxigeno
molecular
El centro cataltico de los P-450 es el tomo de hierro hexacoordinado (con los 4 anillos de la
protoporfirina IX, con el grupo tiol de un residuo de cistena de la cadena polipeptdica y con el solvente,
normalmente agua).

El primer paso del proceso cataltico consiste en la unin del substrato y el desplazamiento del solvente
en la sexta posicin de coordinacin del tomo de hierro.

En el segundo paso se produce la reduccin del complejo hemoprotena-substrato al estado ferroso
(el Fe3+ del grupo hemo pasa a Fe2+) gracias al aporte de un electrn (citocromop450 reductasa).

El tercer paso es la unin del oxgeno molecular para formar un complejo superxido y en el cuarto
paso se produce el aporte de un segundo electrn con la formacin de una especie activada de oxgeno.

El resultado final sera la liberacin de uno de los tomos de oxgeno en forma de una molcula de
agua y la incorporacin del otro en el substrato.
Ruta del flujo electrnico
Fuente: DEVLIN T.H. Bioquimica. Libro de texto con aplicaciones clnicas
4 Ed. 2004
5
Fuente: Koolman, Color Atlas of Biochemistry.2nd edition.2005
XENOBIOTICOS
Los compuestos qumicos que no forman parte
de la composicin habitual del cuerpo humano,
pero que son capaces de acceder a su interior
se conocen con el nombre genrico de
xenobiticos.

Son compuestos de naturaleza qumica muy
variada, algunos de los cuales son de origen
natural o de sntesis.

Estos compuestos pueden acceder a nuestro
organismo mediante ingestin, inhalacin, por
va parenteral o a travs de la piel.
XENOBIOTICOS
Entre los mismos se incluyen frmacos,
cosmticos, aditivos alimentarios, pesticidas,
productos de uso domstico, derivados de la
combustin de carburantes, residuos procedentes
de la industria qumica, etc.

En general son compuestos de naturaleza lipoflica
que pueden atravesar con relativa facilidad las
membranas biolgicas.

Por tanto, su eliminacin del organismo es dificultosa,
dado que la excrecin de compuestos no voltiles se
realiza a travs de fluidos de naturaleza acuosa,
principalmente orina.
BIOTRANSFORMACION
La biotransformacin consiste en un
conjunto de reacciones encaminadas a
dotar a los xenobiticos, de la
hidrosolubilidad suficiente para ser
eliminados del organismo con mayor
facilidad.

Para ello se necesita la introduccin
de grupos funcionales en la molcula
que aumenten la polaridad de la
misma, lo que se consigue gracias a
las reacciones de Fase I o
Funcionalizacin.

BIOTRANSFORMACION
Esta etapa es crucial en la excrecin de las sustancia toxicas y tienen lugar en los siguientes tejidos:

Fraccin microsomal heptica (retculo endoplsmico liso de los hepatocitos). En mayor
proporcion.
SNC, rion, pulmn e intestino.


Funcion biologica: METABOLISMO DE
XENOBIOTICOS
METABOLISMO DE XENOBIOTICOS
Estos sustratos exgenos (extraos a la vida) son importantes sustratos para las
formas de citocromos p450. Los CYP450 son capaces de oxidar diversos
xenobioticos especialemte lipofilicos. La adicion de un grupo OH hace que el
compuesto sea mas polar y por tanto mas soluble en el ambiente celular.
Y para esto se lleva acabo la biotransformacion (visto antes), en cual se dividira
en 2 fases:
Fase 1 : son convertidos en productos mas hidrosolubles gracias a la aparicin de
grupos funcionales (amino, carboxilo, hidroxilo).
Fase 2: los metabolitos generados en la fase 1 se combinan con molculas
endgenas de carcter polar para formar productos de conjugacin que sean
rpidamente excretados.
En general , las enzimas de fase1 son capaces de transformar mltiples sustratos,
se trata de de protenas catalticas de naturaleza muy diversa:
monooxigenasa (citocromo p450)
Flavin-monooxigenasa
Oxidadas
Epxido hidrolasas .


El citocromo p450 es ,sin duda, el miembro mas
destacado de este grupo de enzimas
Participacion relativa de diferentes enzimas de fase 1 en
el metabolismo xenobioticos
citocromo p450
flavin-
monooxigenasa
peroxidasas
reductasas
METABOLISMO DE DIAZEPAN
Metabolismo de
diazepan por los
citocromos P450
3A4 y 2C19.
El BENZO[]
PIRENO es
metabolizado por
P450 1A1, 1A2 Y
1B2.
El BENZO[]
PIRENO es un
compuesto
presente en humo
de cigarrillos y
constituye un
carcingeno para
el hombre.
METABOLISMO DE BENZO[] PIRENO
OTRAS REACCIONES OXIDATIVAS
Funcin biolgica: metabolismo de
compuestos Endgenos
Un ejemplo de la importancia de las reacciones catalizadas por el citocromo p450 es la
SINTESIS DE HORMONAS ESTEROIDEAS a partir del colesterol en la corteza adrenal y
en los organos sexuales.

Los citocromos p450 (mitocondrial y reticulo endoplasmatico) son necesarios
para convertir el colesterol en aldosterona y cortisol en la corteza adrenal. En
testosterona, en los testiculos y en estradiol en los ovarios. (fig. siguiente)

Formas citocromo p450 son responsables de varias etapas en la sntesis adrenal
de aldosterona , el mineralocorticoide encargado de la regulacion del equilibrio
hdrico y salino, y de cortisol, el glucocorticoide que gobierna el metabolismo de
protenas, glcidos y lpidos. (fig. siguiente)

Tambin se sintetiza androstenodiona, regulador de las caractersticas sexuales
secundarias y precursor de estrgenos y testosterona.



SINTESIS DE HORMONAS ESTEROIDEAS
EN LA CORTEZA ADRENAL
COLESTEROL
PREGNENOLONA
PROGESTERONA
11-DESOXICORTICOSTERONA
CORTICOSTERONA
18-OH-CORTICOSTERONA
ALDOSTERONA
17-OH-
PREGNENOLONA
17-OH-PROGESTERONA
11- DESOXICORTISOL
CORTISOL
ANDROSTENODIONA
CYP
17
CYP
17
CYP21
A2
CYP11
B1
CYP11
B2
CYP
17
CYP11
A1
ESTROGENO
S
TESTOSTERO
NA
El colesterol puede ser inducido por diferentes citocromos P450, lo que nos
da como resultado la formacin de diferentes metabolitos.
Edad



Sexo
Factores moduladores de la actividad
Fisiologa



Dieta




Xerobioticos









Extrnseco
Infecciones
Estilo de vida
Administracin de
frmacos
Salud/enfermedad
Intrnseco
Gnero
Polimorfismos
Grupo tnico
Desarrollo y
crecimiento
Factores moduladores de la actividad
Induccin del citocromo P450
Es la sntesis de nuevas molculas enzimticas (lo que incrementa
bruscamente su nmero en un tejido y momento dados) como
consecuencia de la transcripcin gnica.

Fenobarbital: induce fundamentalmente las subfamilias 2B y 2C
a travs del receptor CAR (Constitutive Androstane Receptor).

Rifampicina y glucocorticoides: activan fundamentalmente las
subfamilias 3A y 2C a travs del receptor PXR (Pregnane X
Receptor).

Fibratos: activan la familia CYP3A4 a travs del receptor PPAR
(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor). Ejemplo:
Hiperforina (Hierba de San Juan).

Etanol e isoniazida: Induce fundamentalmente la subfamilia 2E

Bibliografia
Omura, T. & Sato, R. (1964) The carbon monoxide-binding pigment of liver
microsomes. I. Evidence for its hemoprotein nature. J Biol Chem 239, 2370-2378.

DEVLIN, T.H. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas. 4 Ed. Revert.
Barcelona, 2004.

KOOLMAN, J. Y RHM, K.H. Bioqumica: Texto y Atlas. 3 Ed. Mdica
Panamericana. Buenos Aires. 2005.