MTODOS DE MEDICIN

ESTERILIZACIN
ESTERILIZACIN
Es el proceso de destruir todas las
formas de vida microbiana.
Un objeto esterilizado en el sentido
microbiolgico esta libre de
microorganismos vivos y sus
esporas
Concepto absoluto

La actividad metablica de un
organismo es el resultado de la
suma de todas las reacciones
qumicas y como estas son
influenciadas por la temperatura, en
consecuencia el proceso vital
tambin lo esta.

Todos los microorganismos
dependen del agua, su masa es en
su mayora agua y todas sus
actividades se realizan en medios
acuosos.
PUNTO TRMICO
LETAL
Temperatura
mas baja a la
cual una
suspensin de
microorganism
os mueren en
10 minutos.

TIEMPO
TRMICO
LETAL
Tiempo mas
corto necesario
para matar una
suspensin de
microorganism
os o esporas a
una
temperatura
determinada y
bajo
condiciones
especificas.

REDUCCIN
DECIMAL
DE
TIEMPO

Tiempo en
minutos
para matar
al 90% de
la
poblacin.
CALOR HUMEDO
Esterilizacin

Vapor a presin:
autoclave 121 C
a 15 lb/in

Desinfeccin:
agua fluyente y
pasteurizacin.
CALOR SECO
Esterilizacin
con aire caliente
por 2 horas a
160C
incinerizacin.
BAJAS TEMPERATURAS
No se usan para esterilizar ni
desinfectar. Son tiles para para
preservar cultivos de:
Bacterias
Levaduras
Hongos
De 4 a 7C
PRESIN OSMTICA
En la mayora de los microorganismos a
concentraciones elevadas de sal (10 a 15%)
y de azcar (50 a 70%) se inhiben, las
clulas son deshidratadas y as no son
capaces de metabolizar y crecer, se mueren
o permanecen vivas pero en condiciones
estticas.
RADIACIONES
Ionizantes: para esterilizar material
quirrgico sensible al calor y otros
materiales mdicos.
EQUIPO
IONIZANTE
FILTRACIN
FILTROS DE MEMBRANA
Para esterilizar lquidos biolgicos (suero,
solucin de enzimas, vitaminas o
antibiticos) sensibles al calor. Membrana
con porosidades de 0.01 a 10m.
CULTIVO MIXTO
Se utiliza en el estudio de las poblaciones
mixtas de microorganismos en hbitats
diversos, para determinar a los microbios
especficos, se requieren muy diversas
condiciones fsicas y medios de cultivo, por
ejemplo:
Suelo
Agua
Lecheetc.
CULTIVO PURO
Se emplea para separar distintas especies
de microorganismos ya que un cultivo puro
esta formado de poblaciones de clulas
derivadas de una sola clula.
CULTIVO DE AMBIENTE CONTROLADO
Se relaciona con el estudio de los
cultivos puros para mantenerlos
viables por lapsos largos de
tiempo, se les denomina cultivos
tipo, con el fin de tener
perfectamente identificado el
microorganismo de los cultivos
puros listos para usarse en
laboratorios, procesos
especficos industriales e
investigacin.



CONTROL DEL CRECIMIENTO:

MTODOS DE CONSERVACIN
Estos cultivos industrialmente se
emplean:
Para probar la efectividad de
agentes quimioteraputicos nuevos
y potencialmente efectivos.
Como agentes de ensayo para
antibiticos y vitaminas.
Como cultivos de referencia que
citan en las patentes de las
compaas.
Para estudios taxonmicos.
TIEMPO DE CONSERVACIN
En cada poblacin de microorganismos en
cultivo puro se determina su tiempo de
desarrollo en condiciones optimas, sin
embargo este tiempo debe prolongarse si
es posible para lograr su mantenimiento
viable por varios periodos.
MTODOS DE CONSERVACIN Y
VIABILIDAD
1. RESIEMBRA PERIODICA A MEDIOS FRESCOS
Se consideran 3 aspectos importantes: medio de cultivo
apropiado, la temperatura apropiada y el tiempo necesario
para la resiembra.



BACTERIA MEDIO TIEMPO
DE
SIEMBR
A
INCUBACIO
N/TEMP. C
ALMACENAM
IENTO/TEMP.
C
Neisseria sp. Agar
cistina
tripticasa
1 mes 35 35
Bacilius sp. Agar
nutritivo
12
meses
28 10
Mycobacterium
sp.
Agar
glicerol
4 meses 30 10
2. CAPA DE ACEITE MINERAL
Se cubre el agar en que esta creciendo el
microorganismo con aceite mineral estril.
El tiempo de mantenimiento varia segn la
sp. pero generalmente es cuestin de
aos.
Tiene la ventaja de que se puede tomar
una muestra del desarrollo que esta abajo
del aceite e inocular medios frescos y aun
preservar el cultivo original.
Fcil y atractivo.
3. LIOFILIZACIN
Mtodo eficaz, muchas sp preservadas
por esta tcnica han permanecido
viables e invariables por mas de 20
aos.
Las clulas se secan rpidamente,
mientras son congeladas mediante las
siguientes etapas: la suspensin de la
clulas se pone en pequeos frascos
que se sumergen en una mezcla de
hielo seco y alcohol (-78C). Los
frascos se conectan inmediatamente a
una lnea de alto vacio y se sella.


Ventajas de la liofilizacin:
Gran longevidad
Baja oportunidad de
cambio en las
caractersticas del
cultivo
Fcil almacenamiento.

4. ALMACENAMIENTO A
TEMPERATURAS MUY BAJAS
Las clulas se congelan con un
agente protector (glicerol o dimetil
sulfoxido).
Los especmenes congelados se
guardan en refrigeradores con
nitrgeno lquido.
Todos los cultivos que pueden
mantenerse por liofilizacin pueden
mantenerse por este mtodo.
CEPARIOS
Tambin llamado cultivo tipo.
Conserva especies de
microorganismos que se
mantienen en el laboratorio para
diversos estudios.
CULTIVOS Y REACTORES

MICROBIANOS
CULTIVO DE SUPERFICIE
Medio base agar
Se utiliza para proporcionar una ventilacin
aumentada durante la incubacin de
microorganismos aerobios
Se recomienda para obtener organismos
aerobios en grandes cantidades
En frasco esttico se coloca el medio en capas
poco profundas en recipientes adecuados:
matraz de Fernbach, de Ckolle y las botellas de
Roux.
Matraz de
Fernbach
Botellas
de Roux
CULTIVO EN SUSPENSIN
MATRAZ AGITADO
En frasco rotatorio, los matraces se fijan a
una plataforma, la cual se mueve
circundantemente de manera que el medio
liquido se agita constantemente durante la
incubacin exponiendo de esta manera
mayor superficie del medio a la fase
gaseosa.
FERMENTADOR
Se emplea con el fin de obtener ciertos
productos del metabolismo anaerobio de los
microorganismos por lo que se requiere la
eliminacin del oxigeno y la abundancia de
bixido de carbono:
1. Sistemas de anaerobiosis GasPak
contiene hidrogeno mas un
generador de CO2 y catalizadores de
paladio a temperaturas de
laboratorio. Al sobre GasPak se le
agrega agua y se produce
hidrogeno, este reacciona con el
oxigeno en la superficie del
catalizador formando una tira
indicadora de anaerobiosis que
cambia de azul a incolora en
ausencia de oxigeno.

2. Sistema de anaerobiosis GasPak con
cajas de petri inoculadas, el sobre
generador GasPak y la tira indicadora de
anaerobiosis.
3. Mtodo mecnico de incubacin y
sustitucin.- el aire es expulsado mediante
el bombeo del recipiente el cual se limpia
varias veces con nitrgeno y finalmente se
llena con gas nitrgeno, o mezcla de
nitrgeno y bixido de carbono, mediante
un manmetro se puede medir el gas que
se saca o incorpora al sistema.
SISTEMA GAS-PACK
REACTOR CONTINUO
Mecanismo que se utiliza para
producir biocatalizadores (enzimas)
de manera continua o de uso repetido
controlado. Este principio se basa en
el cultivo continuo de
microorganismos mantenindolos en
fase exponencial de crecimiento con
ayuda del turbidiostato o quimiostato.
CUENTA DE MICROORGANISMOS
DESARROLLO
O MAGNITUD
DE LA
POBLACION
TOTAL
CUENTA
CELULAR
DIRECTAMENTE.-
microscopio o mediante un
contador electrnico de
partculas.
INDIRECTAMENTE.- cuenta
de colonias.
ACTIVIDAD
CELULAR
INDIRECTAMENTE.- relacionando
el grado de actividad bioqumica al
tamao de la poblacin
microbiolgica.
MASA CELULAR
DIRECTAMENTE.- pesando o
midiendo el contenido celular
de nitrgeno.
INDIRECTAMENTE.-
turbidimetra.
DETERMINACIN DEL NMERO DE CELULAS MEDIANTE
CUENTA DIRECTA AL MICROSCOPIO
A. Frotis teido + VOLUMEN (0.01 ml)+ rea
(1cm). Cuenta del nmero de clulas en
diferentes campos microscpicos al azar (# de
campos)(promedio del # de clulas en cada
campo)(100)= # de clulas por ml.
B. Cmara de petroff.- portaobjetos excavado y
cuadriculado.
C. La desventaja de estos mtodos es que no se
puede conocer si la clula es viable o no.
CONTEO POR FILTROS DE MEMBRANA
Uso practico y comn
Filtros moleculares o de membrana con
porosidad determinada y uniforme
Determina el numero de bacterias en grandes
volmenes de aire o agua
La membrana con las bacterias que detuvo se
pone en una almohadilla con medio
nutritivo(medios especiales y/o colorantes
especficos)
Se incuban y los microorganismos desarrollan
colonias que quedan en la superficie de la
membrana.
DETERMINACION DE LA DENSIDAD CELULAR
MEDIANTE TURBIDIMETRIA
La suspensin de clulas se deposita en una cmara
clara de dimetro conocido
El espectrofotmetro o colormetro mide la relacin de
intensidad de luz incidente con la intensidad del rayo
luminoso que sale de la cubeta, la densidad ptica del
cultivo es proporcional a la densidad celular
Se debe tener presente que tanto clulas vivas como
muertas contribuyen con la turbiedad.
DETERMINACIN DEL NMERO DE CELULAS QUE
PUEDEN MULTIPLICAR BAJO CIERTAS CONDICIENES
DEFINIDAS PARA LA CUENTA EN PLACA
A. Se basa en el principio de que cada organismo viable originara
una colonia.

SELECCIN DEL PROCEDIMIENTO PARA
MEDIR EL DESARROLLO MICROBIANO.
MTODO APLICACIONES
1. CONTEO
MICROSCOPICO
RECUENTO DE BACTERIAS EN LECHE Y VACUNAS.
2. CONTEO EN PLACA RECUENTO DE BACTERIAS EN LECHE, AGUA,
ALIMENTOS, SUELOS, CULTIVOS, ETC.
3. FILTROS DE MEMBRANA
O MOLECULARES
RECUENTO DE BACTERIAS EN LECHE, AGUA,
ALIMENTOS, SUELOS, CULTIVOS, ETC.
4. MEDICION POR
TURBIDIMETRIA
ENSAYOS MICROBIOLOGICOS, ESTIMACION DE
COSECHAS BACTERIANAS EN CALDO O SUSPENSION
ACUOSA.
5. DETERMINACION DE
NITROGENO
MEDICION DE LAS COSECHAS BACTERIANAS EN
SUSPENSIONES ESPESAS DE CULTIVOS PARA
INVESTIGACIONES DEL METABOLISMO.
6. DETERMINACION DEL
PESO
MEDICION DE LAS COSECHAS BACTERIANAS EN
SUSPENSIONES ESPESAS DE CULTIVOS PARA
INVESTIGACIONES DEL METABOLISMO.

7. DETERMINACION DE LA
ACTIVIDAD BIOQUIMICA
ENSAYOS MICROBIOLOGICOS.
IMPORTANCIA DE LA MEDICION
CUANTITATIVA DEL DESARROLLO
MICROBIANO
La medida cuantitativa es importante
para determinar las diferentes
respuestas de desarrollo bajo
diversas condiciones ambientales y
nutricionales dependiendo del inters
de nuestro estudio.