- Quantidades de Ag solvel so adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac.
Precipitado visvel Reao de precipitao - A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado tambm aumenta at um mximo, para depois diminuir.
Precipitao em soluo Precipitao em gel Imunodifuso Radial Precipitao em gel Imunodifuso Dupla Reagentes marcados - Enzimas, fluorocromos, istopos - Tipos: RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting
Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioistopos para quantificar os ensaios. Vantagens: Alta sensibilidade Permite medidas rpidas e precisas Desvantagens: Custo Vida mdia dos reagentes Risco operacional (radiao) ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) - Baseia-se na quantificao de uma reao enzimtica associada com complexos imunes.
Imunofluorescncia - Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a molculas reveladoras chamadas fluorocromos.
- Visualizao em microscpio de fluorescncia Isotiocianato de fluorescena (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA Imunofluorescncia Direta Aplicaes: - Deteco direta de microrganismos (secrees, urina, cortes de tecidos); - Identificao de subpopulaes de linfcitos; - Fenotipagem de clulas tumorais Ex.: Deteco de Chlamydia trachomatis em secreo uretral Ex.: Deteco de Ac anti- T. cruzi Aplicaes: - Deteco de anticorpos especficos contra diversos microrganismos; - Diagnstico de doenas auto-imunes; Deteco de Ac anti-nuclear Imunofluorescncia Indireta Citometria de fluxo - Detecta, separa e quantifica clulas contendo um antgeno particular, marcadas com um fluorocromo; - Cada anticorpo marcado com um fluorocromo diferente; - As clulas so ento analizadas no citmetro de fluxo. - As clulas saem de uma clula de fluxo e so iluminadas por um raio laser; Citometria de fluxo - A quantidade de raios laser que dispersa para fora das clulas durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informao a respeito do tamanho das clulas. - O laser pode tambm excitar o fluorocromo nas clulas e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores. Aplicaes:
-Caracterizao de populaes celulares;
- Contagem de microrganismos;
- Separao de populaes celulares de acordo com a densidade dos antgenos, tamanho e granulosidade das clulas;
- Anlise de proliferao celular. CD4 CD8 CD19 Western Blot Ensaios imunocromatogrficos Teste rpido de HIV (Ac anti-HIV) Diagnstico de gravidez ( deteco de beta HCG) Tcnicas de Biologia Molecular Reao da Polimerase em Cadeia Amostra + Reagentes RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) Termociclador Deteco da Amplificao Produto (PCR ou RT-PCR) Eletroforese em gel de poliacrilamida 1. Qual a principal diferena entre os mtodos de ELISA e imunofluorescncia?
2. Em uma tipagem sangunea houve aglutinao ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguneo e faa um esquema explicando a reao ocorrida.
3. Quais as caractersticas do anticorpo que podem influenciar a sua ligao ao antgeno?
4. Ao realizar os exames pr-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como voc interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reao ocorrida.
5. Qual imunoensaio voc escolheria para o acompanhar o prognstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta. Relatrio