ESTERILIZACION

CONCEPTO
Procedimiento por el cual se destruyen los microorganismos y sus formas
resistentes, mediante el uso de agentes fsicos y qumicos.
Esto se produce en funcin al tiempo de exposicin.
Cuando se grafica la proporcin de grmenes supervivientes a un agente
letal en funcin al tiempo de exposicin se obtiene la curva de
supervivencia que generalmente es exponencial. Ejem. Curva de
supervivencia a la accin de la radiacin ultra violeta, de algn
desinfectante.
La curva de supervivencia se da de acuerdo a cada tipo de germen
dependiendo del grado de susceptibilidad de cada microorganismo.
La forma de la curva esta dada por la distribucin de susceptibilidad de
cada microorganismo, siendo esta inversamente proporcional al tiempo en
que este sobrevive a la accin de agente letal.
Del proceso de esterilizacin depende el xito el estudio del
microorganismo al estado de pureza, esto garantiza la validez del Dx.

METODOS DE ESTERILIZACIN
Se realiza mediante el uso de agentes fsicos y qumicos.
AGENTES FISICOS.- Actan, el calor, filtracin, centrifugacin, radiacin.
Esterilizacin por Calor.- El calor se transmite de un cuerpo de mayor
temperatura a otro de menor grado calrico, mediante 3 mtodos
conduccin, convencin, radiacin.
Por conduccin .- Cuando el calor se transmite a travs de la materia sin
movimiento aparente de la misma estando en contacto el mas caliente
con el mas fri. El calor se propaga de molcula a molcula.
Por convencin.-El calor se propaga a travs de la materia en movimiento.
Ejem. Masas liquidas o masas areas (gases)
Por radiacin.- Cuando el calor se transmite sin materia intermedia y en
forma de ondas. Ejem Los focos estn al vaci, esto permite el paso de
radiacin que siempre va en lnea recta y a la misma velocidad de la luz.


MECANISMOS DE ESTERILIZACION
Esterilizacin por accin del flameado.- En este caso el material a
esterilizar se somete a la accin directa de la llama del mechero, sin
deterioro. Mediante este mtodo podemos esterilizar asas de siembra,
bocas de tubos de ensayo, matraces ( usa calor por conduccin).
Esterilizacin por calor seco.- Se hace actuar aire caliente sobre el material
a esterilizar . Ejem material de vidrio placas petri protegidas
El aire es mal conductor del calor sin embargo se le hace actuar en
caliente por tiempo prolongado, As:
160 C por una hora y media a dos
170 C por una hora
180 C Por media hora a 3/4.
En este caso el calor se inicia por conduccin y se propaga por convencin.
Usan este sistema los hornos Pateur y las estufas de aire caliente.


MODELOS DE HORNOS

Esterilizacin por calor hmedo.-
Acta coagulando las protenas del protoplasma del microbio en menor
tiempo que en la esterilizacin por aire caliente. El calor se propaga por
convencin.
Ebullicin .- En este caso el material es sometido a la accin del agua
hirviente a la temperatura de 100 C.
Por este mtodo puede esterilizarse: jeringas guantes de goma, sondas,
ropa etc. Por 40 a 60 minutos.
La temperatura puede elevarse por adicin de ciertas sustancias como
carbonato de calcio, nitrato de calcio, etc.
Vapor fluente.-Cuando se hace actuar un chorro continuo de vapor sobre
el material a esterilizar por 30 minutos a una hora.
Tindalizacin.- El calor acta en forma fraccionada por 3 das consecutivos
a 100 C durante 30 a 40 minutos. En el primer da se destruirn las
formas vegetativas, en el segundo las formas germinadas de las esporas y
el tercer da las formas esporuladas.


Vapor de agua saturada a presin:
Este es uno de los mtodos mas seguros y efectivos. Permite una
esterilizacin completa de la mayora de medios cultivo y de soluciones
que no contienen sustancias de fcil desnaturalizacin. El vapor debe
actuar de 10 a 15 libras de presin o 1 a 1.5 atmsferas de presin
durante 15 a 20 minutos.
En este tipo de esterilizacin se emplea la AUTOCLAVE.
Esterilizacin en fri por filtracin.- Por este mtodo se esterilizan los
medios de cultivo lquidos o sustancias orgnicas que sufren alteraciones
de sus propiedades fsicas y qumicas por accin del calor. Este mtodo se
emplea para esterilizar suero sanguneo liquido ascitico, soluciones de
albmina, medios de carbohidratos, soluciones de antibiticos, etc.
El equipo completo consta de.
Bujas filtrantes, Kitasato, Bomba de vaci.
El fenmeno de filtracin se debe a que los microorganismos tienen carga
negativa y los filtros positivo. Siendo absorbidos por presin al vaci
MODELOS DE AUTOCLAVES

Esterilizacin por centrifugacin.
Mediante la fuerza centrifuga es posible a conseguir esterilizacin de
algunas sustancias o productos a grandes revoluciones por minuto, por un
tiempo prolongado. Juega un papel importante la tensin superficial del
liquido y la densidad de las partculas.
Hoy en da existen centrifugas refrigeradas que alcanzan velocidades de
15, 000 a 20,000 rpm.
Esterilizacin por accin de la Luz ultravioleta:
Corresponde al tiempo de radiacin de la luz solar en la que su corta
longitud de onda se emplea para esterilizar medios de cultivo a base de
minerales, ambientes para siembras bacterianas, salas de ciruga.
La longitud de onda que mejor acta esta entre 2.500 a 2,800 A. por dosis
de radiacin se destruye las clulas, y se retarda su desarrollo o se induce
a mutaciones.

Flujo Laminar
La atmsfera de un laboratorio debe tener el menor numero de
microorganismos, ya que los medios de cultivo son muy susceptibles a
contaminarse. El sistema de flujo laminar evita las turbulencias, regulando
la velocidad del aire a 0.5 m/seg.
El sistema de flujo laminar vertical el aire estril ingresa desde lo alto
hacia el lugar de trabajo, donde es aspirado.
En el sistema horizontal, el aire estril es impulsado desde el fondo hacia
el manipulador, pero no hay garanta del producto manipulado.
AGENTES QUIMICOS:
Se utilizan sustancias Antispticas que varan en formula y concentracin
segn su accin bactericida.
Los antibiticos y quimioterapicos no cumplen siempre un rol de completa
esterilizacin,
MEDIOS DE CULTIVO
Son sustancias nutritivas liquidas o slidas tiles para el crecimiento de
microorganismos, tratando de imitar a los sustratos naturales en los que
crecen normalmente. Bsicamente sus componentes deben satisfacer las
exigencias mnimas nutricionales, varan segn el tipo de bacteria.
Contienen agua, nutrientes como fuentes de nitrgeno, carbono y energa
y en ciertos casos factores de crecimiento.
Para el aislamiento de microorganismos heterotrficos los medios
empleados tiene que tener derivados de protenas, por digestin con
enzimas proteoliticas (pepsina, tripsina, papana) siendo los derivados
peptidos peptonas proteasas aminocidos, sales inorgnicas, que los
microorganismos lo utilizan como compuestos parcialmente degradados al
ser incapaces de hidrolizar protena completas.
CLASIFICACCION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Se clasifica en 2 grandes grupos:
A.- DE ACUERDO A SU NATURALEZA:
De origen animal
De origen vegetal (orgnico)
De origen mineral ( inorgnico)
B.- SEGN SU COMPOSICION Y OBJETIVOS:
1.- Medios comunes:
a.- Medios lquidos
b.- Medios slidos
c.- Medios semislidos
2.- Medios enriquecidos o suplementados
a.- Medios slidos
b.- Medios lquidos
3.- Medios sintticos definidos o qumicamente definidos:
a.- Sintticos simples
b.- Sintticos complejos.
CLASIFICACCION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
4.- MEDIOS ESPECIALES:
a.- Medios de enriquecimiento
b.- Medios selectivos
-altamente selectivos
-moderadamente selectivos
c .- Medios diferenciales.
SEGN SU COMPOSICION Y OBJETIVOS
1.- Medios comunes.- Contienen los mnimos componentes nutricionales
para organismos heterotrficos no exigentes. Pueden ser lquidos, slidos
o semislidos.
Medios lquidos: ejemplo caldo nutritivo, caldo peptonado, caldo triptosa,
caldo de carne y otros.
Medios slidos: Al medio liquido que tiene los nutrientes se le agrega
sustancia de poco o nulo valor nutritivo como el agar para dar al medio
consistencia de gel, ejem. Agar peptonado agar nutritivo. Tiene mucha
utilidad.
Medios semislidos.- Compuesto por cualquiera de los medios lquidos a
los que se agrega concentraciones de agar necesario para obtener un
estado de gel blando 5 %. Puede ser utilizado como cepario, para estudios
de motilidad, etc.

MEDIOS ENRIQUECIDOS O SUPLEMENTADOS
Contienen los requerimientos nutricionales para bacterias exigentes, se
componen de un medio base ordinario suplementado con factores de
crecimiento, como sangre suero sanguneo, liquido ascitico, extracto de
levadura, vitaminas, bases nitrogenadas, carbohidratos y sales minerales,
pueden ser:
Lquidos.- Caldo cerebro corazn (BHI) caldo tripticasa soya.
Slidos.- Agar sangre agar chocolate, agar extracto de levadura.
MEDIOS SINTETICOS O QUIMICAMENTE DEFINIDOS.
Preparados exclusivamente de sustancias qumica.
Simples.- Contienen carbono como fuente de energa (glucosa, lactosa);
una fuente inorgnica de nitrgeno (Cl NH4); fosfato o sulfato y otras sales
inorgnicas. Medio mnimo de Daris
Medios sintticos complejos.- incluyen aminocidos , purinas pirimidinas y
otros factores de crecimiento.
MEDIOS ESPECIALES
Estos medios contienen requerimientos nutricionales bsicos adems
sustancias inhibidoras con carcter de selectividad y compuestos
especficos o indicadores para poner de manifiesto caractersticas
bioqumicas para el dx especifico.
Dentro de las sustancias inhibidoras mas frecuentes esta las sales biliares,
antibiticos, colorantes etc.
1.- Medios de enriquecimiento.- Estos favorecen el crecimiento de un
grupo de bacterias, e inhiben el crecimiento de otros.
Ejemplo: Caldo selenito de Leifson para Salmonella o Shiguella caldo
tetrationato de Kauffman para grmenes entericos patgenos, caldo GN
etc.
2.- Medios selectivos.- Permiten obtener sepas puras, son medios slidos.
Ejemplo:
Altamente selectivos.- Para aislamiento de Staphylococus patgeno Agar
Chapman, Agar Manitol salado, Agar cetrimide para Pseudomona
aeruginosa, SS para Salmonella Shiguella.
Moderadamente selectivos.- Agar Mac conkey, EMB, Agar GN.

MEDIOS ESPECIALES
Mediante estos medios podemos detectar reacciones bioqumicas que nos
permite diferenciar los grupos gneros o especies de las bacterias. Es
posible que usando un solo medio se puede interpretar dos o mas pruebas
bioqumicas, ejemplo el Agar TSI permite interpretar fermentacin de tres
carbohidratos lactosa, sacarosa, glucosa y produccin o no de hidrogeno
sulfurado H2S
El medio de SLU permite interpretar varias pruebas: Fermentacin de
lactosa, produccin o no de H2S, produccin o no de ureasa, produccin o
no de indol, lectura de motilidad ( Entericos BGN) tenemos otros medios
de diferenciacin bioqumica, LIA, Citrato de Simmons, MIO, SIM etc.