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0
=
D
Recuerda !!! que s es
igual en todo el rango de
concentracin calibrado
HOMOCEDASTICIDAD
DEPARTAMENTO DE QUMICA Y CCMM
Prof. J.C. Vilchez Martn
TEMA 4 Calibraciones y regresin
Hemos definido LOD
Y
LOD
= Y
B
+ 3 S
Blanco
Tambin se utiliza LOQ
Y
LOQ
= Y
B
+ 10 S
Blanco
El criterio de utilizacin es puramente
arbitrario, pero hay que indicar el
mtodo utilizado
Interpolar en recta
calibrado para averiguar
concentraciones
LOD o LOQ
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
Recuerda!!! HOMOCEDASTICIDAD de residuos
Obtencin del valor de Y
Blanco
Podemos tomar el valor a (ordenada en el origen) de la calibracin
Podemos pasar 10 veces un disolucin blanco y realizar promedio de seal
Obtencin del valor de S
Blanco
S es igual en todo el rango de concentracin
calibrado
Podemos tomar S
Blanco
= S
y/x
de los puntos de calibracin
Podemos realizar la S de las 10 medidas de seal de blanco
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
Interpolar en recta
calibrado para
averiguar
concentraciones
LOD o LOQ
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
La adicin de patrn es apropiada cuando la composicin de la
muestra es desconocida o compleja y afecta a la seal analtica
No siempre podemos aislar el analito de
inters del resto de componentes que lo
acompaan en la muestra
Influirn en la seal del analito?
ICP
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
Influirn en la seal del analito?
La respuesta es posiblemente s
En funcin de
Tcnica analtica empleada
Naturaleza de componentes que acompaan
Concentracin de estos componentes
pueden influir en la seal del analito:
Interfiriendo directamente la seal de analito
Inhibiendo/activando el proceso fisico-
qumico que produce la seal
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
Si realizamos calibracin con disoluciones puras de Zn (II) en agua destilada
estaramos cometiendo un error ya que la relacin Seal/concentracin Zn(II) nada
tiene que ver el de las muestras reales (interferidas por Na
+
)
Queremos analizar Zn en agua de mar
Alrededor de 11000 ppm Na
+
Solucin
Reproduzcamos lo mejor posible
condiciones de salinidad de muestras
aadiendo 11000 ppm de Na
+
a cada patrn
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Ahora queremos analizar Zn en agua de ra
ppm Na
+
?
En funcin de las mareas y entrada de agua de mar a la ra
Rango desde unos pocos ppm hasta 11000 ppm
Solucin
Mtodo de adicin de patrn
No podemos realizar unas condiciones de calibracin que reproduzca
el nmero infinito de posibilidades de concentracin en Na
+
en
muestras a distinta salinidad
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En que consiste?
Adicin de cantidades conocidas (excepto a una)
de concentracin de analito de inters a
volmenes iguales de la muestra a analizar
Concentracin en
Zn de la muestra
analizada?
Extrapolar
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Extrapolacin
Sx
E
algo diferente a la expresin para una
calibracin normal por interpolacin
Cmo mejorar la precisin?
Aumentando en nmero de adiciones n (al menos n=6)
Maximizando (x
i
- x)
2
, Deben cubrir un intervalo suficientemente grande
Si No
Intervalo de confianza de la concentracin extrapolada (x
E
)
x
E
t
(n-2)
s
x
E
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Cantidad de muestra disponible grande
Cada muestra requiere su propia grfica de calibracin
La extrapolacin es menos precisa que interpolacin
Cmo comprobar si existe efecto matriz y si debemos realizar adicin patrn?
Se representa calibracin normal
(disoluciones de analito puro) y adicin
de patrn sobre una muestra
No hay efecto matriz
Pendientes iguales (lneas paralelas)
Hay efecto matriz
Pendientes desiguales
Desventajas de adicin de patrn
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til para la calibracin de impurezas de disolvente orgnico
Cromatografa de gases (GC)
Queremos calibrar las impureza DAA y otras de la acetona
Utilizamos patrones en acetona (idntica
matriz que muestras) aadiendo
concentraciones conocidas de DAA y dems
impurezas
Problema
No existe una acetona
perfectamente pura, siempre
tiene DAA y dems impurezas
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Obtendremos una curva de calibracin similar a las de
adicin de patrn (igual para resto de impurezas)
DAA
En este tipo de casos no hay mayor efecto
matriz una vez los patrones se preparan en
el propio disolvente
Misma pendiente de respuesta que si la
acetona para preparar patrones de
calibracin fuera totalmente pura
Se le descuenta la seal en el origen que
pertenece a la concentracin de DAA que
lleva la acetona con la que se prepararon los
patrones
DAA
y = a + bx
y = bx
Nos quedamos con el
factor de respuesta
instrumental respecto
a la DAA
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Heterocedstico
La desviacin estndar
aumenta con la concentracin
Los puntos de calibracin a baja concentracin
son ms de fiar que los de alta
Debemos darle ms peso en la calibracin
PONDERAR
Como lo haremos?
Aplicando un factor de peso
inversamente proporcional a
desviacin estndar de cada
punto
Necesitamos ms informacin (s en cada punto)
Clculos ms complicados
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Como cambian las parmetros de recta de calibracin?
Siendo ahora los valores del
centro de gravedad
Y el error de concentracin en la interpolacin sobre la recta de calibracin?
En la direccin y En la concentracin tras interpolacin
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
Los valores de centro gravedad en
calibracin ponderada ms prximos a
valores bajos
(x
w
, <
w
)
En la prctica para simular el
efecto de ponderacin en
regresiones no ponderadas se
suelen utilizar concentraciones
que no varan de forma
uniforme forzando la recta a
ajustarse a valores bajos de
concentracin
0
200
400
600
800
1000
1200
0 20 40 60 80 100 120
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Qu es un patrn interno?
Compuesto que no pertenece ningn componente de la muestra a analizar que se
aade siempre en la misma cantidad a todas los patrones y muestras a analizar
Patrn Interno
+ 10 ppm P.I.
Para qu?
Para corregir la fluctuacin de seal de respuesta del equipo,
especialmente en aquellas tcnicas con un S
y/x
alto
Errores aleatorios de detector
Errores de caudal de lquidos/gases portadores
Errores aleatorios de control de parmetros de equipo
Fluctuaciones de tensin elctrica, etc.
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Cmo?
El P.I. se aade siempre en la misma cantidad, debe dar siempre misma seal Y
Las variaciones de Y del P.I. sern las mismas que sufran las de nuestros analitos
Con esta informacin se realiza correccin
y = 20,3x + 6,5
R = 0,9932
0
100
200
300
400
500
600
700
0 5 10 15 20 25 30 35
ppm Analito Area pico
Pat 0 0 0
Pat 1 5 107
Pat 2 10 223
Pat 3 15 288
Pat 4 20 433
Pat 5 25 532
Pat 6 30 594
Mala calibracin debido a la mala precisin
de la seal del equipo?
Aadamos P.I. a cada patrn de calibracin
ppm analito
rea pico
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
ppm Analito Area pico Area P.I. A Pico/ A P.I.
Pat 0 0 0 101 0,00
Pat 1 5 107 105 1,02
Pat 2 10 223 115 1,94
Pat 3 15 288 95 3,03
Pat 4 20 433 108 4,01
Pat 5 25 532 109 4,88
Pat 6 30 594 98 6,06
y = 0.1998x - 0.0060
R = 0.9992
0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
7.00
0 5 10 15 20 25 30 35
rea pico Analito / rea P.I.
ppm analito
Se divide el rea de pico del analito por el
rea de pico del P.I. cancelndose
mutuamente las fluctuaciones del equipo
en un nuevo ndice libre de ellas
La precisin de la calibracin mejora
enormemente
Se procede igual para muestras
(aadiendo la misma cantidad de P.I.),
ahora la seal de interpolacin ser
rea analito muestra/ rea P.I.
+ 10 ppm P.I.
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TEMA 4 Calibraciones y regresin
Requisitos patrn interno
No debe ser un componente de la muestra
Zona de seal libre de interferencias de los componentes de la muestra
Con caractersticas fisico-qumicas similares a los analitos que se analizan
Deben sufrir con la misma intensidad las fluctuaciones de seal del equipo
En ocasiones se utilizan ms de 1 patrn interno para cubrir distintas zonas
del espectro o cromatograma
No reactivos con ninguno de los componentes de la muestra
Estables