PRESENTA

EQUIPO 5
Qu es la electroforesis?

Tcnica de separacin que se basa en la diferente
movilidad o velocidad de migracin de partculas
cargadas debido a la accin de un campo elctrico

SEPARACIN DE LOS ELEMENTOS DE UNA MEZCLA

Separa los diferentes elementos que componen una mezcla compleja
en funcin de la carga elctrica de los mismos


VELOCIDAD DE LAS PARTICULAS


Depende de ...


La carga de las mismas
La intensidad del campo elctrico y
Del coeficiente de friccin de las molculas con el medio

APLICACIN DE LA ELECTROFORESIS

Fraccionamiento de las hemoglobinas
Diferenciacin de la hemoglobina fetal
Diagnstico de talasemias, anemias falciformes, etc
Protenas sricas
Protenas urinarias
Lipoprotenas
cidos nucleicos
Enzimas
Inmunoelectroforesis
Etc.
fundamento
Cuando una mezcla de molculas ionizadas y
con carga neta son colocadas en un campo
elctrico, estas experimentan una fuerza de
atraccin hacia el polo que posee carga
opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las
molculas cargadas positivamente se
desplazaran hacia el ctodo (el polo negativo)
y aquellas cargadas positivamente se
desplazaran hacia el nodo (el polo positivo).

El movimiento de las molculas esta gobernado
tambin por dos fuerzas adicionales; inicialmente
la friccin con el solvente dificultar este
movimiento originando una fuerza que se opone ,
por otro lado las molculas tienen que moverse en
forma aleatoria o movimiento browniano debido a
que poseen energa cintica propia
denominado difusin. La energa cintica de las
molculas aumenta con la temperatura, por
ello a mayor temperatura mayor difusin.
La suma de todas estas fuerzas provoca que las molculas no migren de una
manera homognea, de tal manera que, si las molculas son colocadas en un
cierto lugar de solucin, los iones comenzaran a moverse formando un
frente cuya anchura aumentara con el tiempo.
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las
molculas empleando un medio que oponga mas resistencia a dicho
movimiento. Una forma comn de hacer esto es formar un gel. El gel
consiste de un polmero soluble de muy alto peso molecular que atrapa
molculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los
solutos, consecuentemente, la migracin electrofortica de las molculas
ser mas lenta, pero el ensanchamiento del frente se vera reducido tambin.

electro migracin
Mucha gente cree que la electro migracin es la
"migracin de electrones" pero en realidad es el
material que "migra" por causa de un flujo de
electrones, por eso se llama electro-migracin
La electro migracin es un fenmeno que depende
de la temperatura
Tipos de electroforesis

Las separaciones electroforticas se llevan a cabo habitualmente en dos
modalidades que difieren notablemente: electroforesis convencional y
electroforesis capilar.
La primera es la metodologa clsica que ha sido utilizada durante muchos aos
para separar especies complejas, de elevado peso molecular, de inters biolgico y
bioqumico. Las separaciones convencionales se llevan a cabo sobre una capa
delgada y plana o placa de un gel poroso que contiene un tampon acuoso en el
interior de sus poros.
Normalmente, esta placa tiene unas dimensiones de unos pocos centmetros de
lado, y al igual que las placas de cromatografca en capa fina, es capaz de separar
varias muestras simultneamente. Las muestras se disponen como manchas o
bandas sobre la placa, y se aplica el potencial de corriente continua, a travs de la
placa, durante un perodo de tiempo fijo. Cuando se juzga que las separaciones se
han completado, se interrumpe el paso de la corriente, y las especies separadas se
detienen para visualizarse de modo similar
La electroforesis convencional es, actualmente, la tcnica de separacion ms
ampliamente utilizada por bilogos y bioqumicos.

FUNDAMENTO DE LAS SEPARACIONES ELECTROFORETICAS

La velocidad de migracin de un ion, v, en centmetros por segundo, en el seno
de un campo elctrico, es igual al producto de la intensidad del campo
elctrico E (V cm
-1
) por la movilidad electrofortica
e
(cm
2
V
-1
s
-1
), esto es:
v =
e
E


La movilidad electrofortica es directamente proporcional a la carga elctrica
del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por
rozamiento. El campo elctrico acta solamente sobre los iones. Si dos
especies difieren bien en la carga o en las fuerzas de rozamiento, se movern a
travs del tampn y se separan. Las especies neutras no se separan
ELECTROFORESIS CAPILAR

La electroforesis convencional ha sido y continua siendo de gran utilidad; sin
embargo este tipo de separacin electrofortica es lenta, laboriosa y difcil de
automatizar, y adems no proporciona resultados cuantitativos precisos. La
investigacin y la aplicacin de la electroforesis llevada a cabo en capilares
tuvo un crecimiento explosivo durante la segunda mitad de la dcada de los
ochenta, ello unido a la aparicin de varios instrumentos comerciales.



La electroforesis capilar da lugar a separaciones con volmenes de muestra
extraordinariamente pequeos (de 0,1 a 10 nL, en contraste con la
electroforesis convencional en la cual se emplean volmenes de muestra del
orden de L) y con una elevada resolucin y rapidez. Adems, las especies
separadas eluyen de uno de los extremos del capilar
VELOCIDADES DE MIGRACION Y ALTURAS DE PLATO EN ELECTROFORESIS CAPILAR












Esta relacion indica que es necesario que se apliquen potenciales elevados para obtener
migraciones ionicas rpidas y una rpida separacion. Si bien es deseable que las separaciones
sean rpidas, es an ms importante obtener separaciones de alta resolucion. Por ello, se hace
necesario examinar los factores que determinan la resolucion en la electroforesis.
INTRODUCCION DE LA MUESTRA

En el mtodo de inyeccin electrocintica, se retiran del deposito del tampn uno de
los extremos del capilar y el correspondiente electrodo, y se colocan en un pequeo
recipiente donde est situada la muestra. Se aplica entonces un potencial durante un
tiempo determinado, lo que hace que la muestra penetre en el capilar debido a la
actuacin conjunta de los fenmenos de migracin inica y flujo electro osmtico. El
extremo del capilar y el electrodo vuelven a introducirse en la disolucin tampn,
donde se mantienen durante el resto del proceso de separacin. Esta tcnica de
inyeccin es discriminatoria al introducir mayor cantidad de los iones ms mviles
respecto a los ms lentos.

En el mtodo de inyeccin por presin, el extremo del capilar se coloca
momentneamente en un pequeo recipiente que contiene la muestra, y se utiliza una
diferencia de presin para conducir la muestra al interior del capilar. Esta diferencia de
presin proviene de aplicar vaco en el extremo del detector o de la aplicacin de
presin en el recipiente que contiene la muestra, o bien se consigue por elevacin del
extremo que contiene la muestra. La inyeccin por presin no diferencia los iones
segn su movilidad; sin embargo, no puede utilizarse en capilares rellenos de gel.

Fundamento de la
deteccin
Limite de deteccion (moles
detectados)
Espectrometra
Absorcin 10
-15
-10
-13

Fluorescencia
Derivatizacion pre
columna
10
-17
-10
-20

Derivatizacion en
columna
8 x 10
-16

Derivatizacion pos
columna
2 x 10
-17

Fluorescencia indirecta 5 x 10
-17

Lentes trmicas 4 x 10
-17

Raman
c
2 x 10
-15

Espectrometra de
masas
1 x 10
-17

Electroqumica
Conductividad
c
1 x 10
-16

Potenciometria No
Amperometria 7 x 10
-19

Radiometria
c
1 x 10
-19

modalidades de deteccin en electroforesis capilar'
APLICACIONES DE LA
ELECTROFORESIS CAPILAR


Las separaciones por electroforesis capilar se llevan a cabo de distintas
maneras, tambin llamadas modalidades. Es interesante destacar que estas
modalidades se emplearon en primer lugar en la electroforesis convencional, y
se adaptaron posteriormente a la electroforesis capilar. Estas modalidades son
la electroforesis capilar de zona (CZE), electroforesis capilar en gel (CGE),
isoelectroenfoque capilar (CIEF) e isotacoforesis capilar (CITP).
Mtodos electroforticos zonales.


Son los ms comunes, dada su alta aplicabilidad en diferentes campos.
Son tiles para lograr la separacin de mezclas complejas. Se aplican
pequeas cantidades de la disolucin de protenas a un soporte slido,
que se impregna con una solucin tampn. Los soportes son en general
polmeros y forman un gel poroso que restringe el movimiento de las
molculas a travs del medio durante la electroforesis y disminuyen los
flujos de conveccin del solvente.
Como soporte han sido utilizados papel (celulosa), almidn,
poliacrilamida, agarosa y acetato de celulosa, entre otros. Este mtodo
tiene gran poder resolutivo por que se aplica una cantidad pequea de
protena a una zona estrecha, mientras que la longitud del trayecto es
mucho mayor que la zona de aplicacin. El equipamiento requerido es
simple, fuente de poder, cubeta vertical u horizontal donde se colocan el
soporte y dos electrodos
Electroforesis en gel de poliacrilamida.

Los geles de poliacrilamida se forman por polimerizacin de la acrilamida
por accin de un agente entrecuzador, es qumicamente inerte, de
propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rpida y
reproducible. Forma, adems, geles transparentes con estabilidad
mecnica, insolubles en agua, relativamente no inicos y que permiten
buena visualizacin de las bandas durante un tiempo prolongado. Adems
tiene la ventaja de que variando la concentracin de polmeros, se puede
modificar de manera controlada en el tamao del poro, lamentablemente
cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad.


Se utiliza para la separacin de especies
anfteras como aminocidos y protenas que
presentan en su estructura un grupo
carboxlico y un grupo amino