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Genotecas
Coleccin de Genes
ADN cADN
Tipos
Genmica Expresin
Vectores
Bacteriofagos Plasmidos
Fago Lambda
Plasmidos
Genoteca de Expresin
Genoteca de Expresin
Purificar mARN maduro (Cromatografia de Afinidad) Sintesis de la Primera Cadena de ADN
Primer oligo dT y Transcriptasa Reversa Degradacin ARN (Alcali o Enzima) Adicion de poliG Adicion primer poliC ADN polimerasa
Proteger con EcoRI metilasa Adicionar EcoRI linkers (ligadores) Cortar con EcoRI
Purificar mARN
Cromatografa de Afinidad
EcoRI Linkers
Enzimas de Restriccin
Enzimas de Restriccin
Enzimas de Restriccin
Corte y Ligacin
Fosfatasa Alcalina
cADN
Ligasa
B-Galactosidasa
Promotor lac
cDNA
Protena Fusin
EcoRI
EcoRI
Corte y Ligacin
Infeccin a E. coli
Tubo que
contiene fagos y la
bacteria E. coli
Infeccin a E. coli
Siembra en Agar LB
IPTG + X-gal
Infeccin a E. coli
Incubacin
A 37 C.
Lambda gt11
Cuestionario
Que es una genoteca de expresin?
Por que el material de partida debe ser mARN? Como se sintetiza el cADN:
La primera cadena? La segunda cadena? Que se usa como polimerasa y como primer en cada reaccin de sntesis Adems de polimerasa y primer que otras sustancias cree Ud deben estar en los tubos donde se realizan las sntesis?
Cuestionario
Para que se metila? Que son los linkers? Por que se digieren con EcoRI? Que es un empaquetamiento in vitro?
Caractersticas de un Plsmido
Sitio de Restriccin
Corte Enzimtico
Plsmidos Cortados
Ligacin
Ligacin
ADN Recombinante
Plsmidos Recombinantes
Transformacin
Tubo que contiene Plsmidos y la Bacteria E. coli
Transformacin
Seleccin
Siembra en LB-Agar ms Ampicilina
Siembra
Siembra en Caja
Incubacin
Incubacin a 37C
Transformacin
Seleccin
Seleccin
Plsmido Replicado
Colonias Bacterianas
Clonacin
Colonias Celulares
Librera Genmica
Librera Genmica
Corte y Ligacin