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Corso di Fisiologia

Docente:
maristella gussoni
Facoltà di medicina e
chirurgia
Dipartimento di
scienze e tecnologie
biomediche
1) Silverthorn DU, Fisiologia, un approccio integrato. Casa Editrice
Ambrosiana
2) Stanfield C. L., Germann W, Fisiologia. III edizione Casa Editrice:
Edises
3) Gussoni, Monticelli, Vezzoli, Dallo stimolo alla sensazione: Fisiologia
degli organi di senso. Casa Editrice Ambrosiana

Le slide del corso


con opportuni
commenti

Testi
consigliati
• L'esame consisterà nel
Modalità di esame superamento di due
prove in itinere, il cui
esito sarà valido fino al
completamento
dell'appello estivo, o
una prova complessiva
finale.
• Le prove consisteranno
in DOMANDE APERTE.
• A queste prove potrà
seguire un colloquio
orale 1) su indicazioni
del docente o 2) su
richiesta dello
studente, nel caso
intenda modificare la
valutazione conseguita.
Plan of the talk

Organizzazione del corso e argomenti

lezione 1
1. Basi della fisiologia:
1. omeostasi
2. La cellula e la membrana. proprietà
Starting point
BIOLOGY = SCIENCE of LIFE

(from Greek,
bios = life, living, + -ology = study of)
DEFINING "LIFE”

• Difficult to define,
many exceptions
• Possible to
“characterize.”
CHARACTERISTICS
of living things

1. Organization
– Maintenance of boundaries

2. Metabolism
– Take in & use energy and material
– Responsiveness to stimuli
– Movement
– Growth
– Reproduction (DNA, RNA)
– Adaptability
• short-term = acclimation, homeostasis
• long-term = adaptation, evolution
Organization

• Life organized in
hierarchy of levels
– Smaller levels
included within
larger
– Certain
phenomena
unique to each
level
Levels of
Organization
Levels of Organization
The human body is the sum of its parts and
these parts can be studied at a variety of
levels of organization.
1. Atoms are the simplest level.
2. Molecules =2 or more atoms joined
together.
3. Macromolecules =large, biologically
important molecules inside cells
(proteins, lipids, carbohydrates,
nucleic acids).
4. Organelles =macromolecules joined
together to carry out a specific
function in the cell.
Levels of Organization (cont)
.

5. Cells are the basic living unit.


6. Tissues are groups of cells
functioning together.
7. Organs = groups of tissues
working together to perform a
certain function.
8. Organ Systems = groups of
organs working together
to perform certain functions.
9. Organism = organ systems
functioning together to support life
Metabolism: 10 Characteristics of Life

• These are the fundamental characteristics (traits) shared by all


organisms.

Taken together, these 10


characteristics constitute
metabolism.
• 10 Characteristics of life:

1. Movement (internal or gross)


2. Responsiveness (reaction to internal or
external change)
3. Growth (increase in size without change
in shape)
4. Reproduction (new organisms or new
cells)
5. Respiration (intake of oxygen; removal of
CO2)
6. Digestion (breakdown of food into simpler forms)
7. Absorption (movement of substances through
membranes and into fluids)
8. Circulation (movement within body fluids)
9. Assimilation (changing nutrients into chemically
different forms)
10. Excretion (removal of metabolic wastes)
Quali discipline
studiano la vita e la
sua organizzazione?
ANATOMY
(ana- apart, + tom- to cut)

• 1. Study of structures of organisms and


relationships among structures.
• 2. syn. Morphology
– (morph- shape, + ology study)
PHYSIOLOGY
(physi- nature, + -ology study)

• Study of functional "nature" of organisms


• 1. Branch of biology dealing with
processes, activities, & phenomena of
living organisms, organs, tissues, and
cells.
• 2. Normal function of an organism or cell.
Anatomy and Physiology

• Anatomy deals with the structure (morphology) of


the body and its parts, in other words, what are
things called?

• Physiology studies the functions of these parts or


asks the question, “how do they work?

• The two disciplines are closely interrelated because


the functional role of a part depends on how it is
constructed.
Ambito di pertinenza della fisiologia
Cosa studia la fisiologia?

Partendo dal dato sperimentale, la


Fisiologia si basa sulla definizione di
modelli
messi a punto utilizzando le
leggi della fisica classica

importanza della rappresentazione grafica!


Principio base della fisiologia:
Omeostasi o costanza del mezzo interno
Omeostasi e variabile regolata

Per garantire l’omeostasi, le variabili


devono essere regolate
L’analogia con il termostato di casa è corretta?

SET
POINT
Regolazione della temperatura corporea

Risposta:No!!!!
Feedback o retro-azione

La regolazione avviene attraverso meccanismi di feedback


Feedback significa riportare in ingresso la variabile in uscita
Il parto: raro esempio di feedback positivo
I confini della fisiologia: Omeostasi e patologia
Cellule organi e apparati
Fisiologia cellulare
Presupposto moderna biologia cellulare:

tutti i sistemi biologici

replicazione di moduli elementari

Organismi viventi: cellula Materia: atomo

 unità fondamentale, strutturale e funzionale


 organismo completo
varie parti
insieme organizzato e coordinato.
La cellula: l’unità più piccola della materia vivente

Diversi tipi di cellule


Elementi costitutivi di una cellula

Membrana cellulare
Elemento di
separazione tra liquido
intracellulare ed
extracellulare
Di che cosa siamo fatti?
Acqua (molecola
polare)
Ioni (Na+, Cl-, K+,
Ca++)
Proteine (An-)

+
H

O2-

+H

Compartimenti cellulari
I compartimenti cellulari

Sostanza Liquido Liquido


(mEq/L) extracellulare intracellulare
Na+ 140 14
K+ 4 120
Ca2+ 2,5 10–4
Cl– 105 10
HCO3– 24 10
pH 7.4 7.1
Osmolarità 290 290
(mOsm/L)

Le differenze tra liquido intracellulare e interstiziale sono molto più


importanti delle analogie

I soluti sono presenti in concentrazione molto diversa dentro


rispetto a fuori la cellula
La membrana cellulare e la presenza dei lipidi
Elemento separatore tra
I due compartimenti
I lipidi
I tre tipi di lipidi
Le membrane sono tri-stratificate di membrana:
e costituite da lipidi e proteine
testa idrofilica

coda idrofobica
Fosfolipidi
(70%)

Colesterolo
(15%)

Glicolipidi
permeabile a sostanze liposolubili (O2, CO2) (10%)
impermeabile acqua, ioni, zuccheri
Il problema posto dall’esistenza della
membrana
comporta lo studio dei
meccanismi di trasporto attraverso la
membrana
Inzialmente si pensava..

Diffusione o passaggio diretto: sostanze liposolubili: gas respiratori (O2,


CO2, alcool)

Esistenza di pori idrofili per cui passaggio delle sostanze avveniva in


funzione del rapporto tra il diametro della sostanza da trasportare e il
diametro del poro

Per le sostanze con diametro maggiore del diametro del poro: trasporto
legato ad un trasportatore o carrier
Le proteine delle membrane cellulari (1:50)
classificazione

attaccate con legami non


covalenti con altre proteine Superficie cellulare esterna
o lipidi di membrana,
fuoriescono soltanto sulla
faccia esterna o su quella
interna

Estrinseche
o Periferiche
Citoplasma

Intrinseche o Integrali

attraversano entrambi gli strati


il modo in cui una
fosfolipidici una (single pass)
proteina di membrana si
o più volte (multiplepass transmembrane)
associa con il doppio
possiedono regioni idrofobiche situate
strato lipidico, riflette la
all'interno della regione lipidica del doppio
funzione della proteina.
strato fosfolipidico
Funzione delle proteine transmembrana: canali o carrier
single pass multiple pass
dominio polare

dominio polare
Molecola anfipatica: α-elica α-eliche attraverso la
idrofobica nella membrana. membrana e domini
Domini polari su entrambi i idrofobici multipli
lati della membrana

Soltanto le proteine transmembrana


possono funzionare su entrambi i
lati del doppio strato lipidico o
trasportare molecole attraverso di
essa. Proteine di trasporto: due
categorie: canali o carrier
Le proteine intrinseche di membrana possono formare
CANALI che attraversano la membrana cellulare

Il canale è costituito da proteine,


con le catene laterali arrangiate in
modo che i lati idrofobi sono rivolti
verso lo strato lipidico, quelli
idrofili verso l' interno del poro per
interagire con le molecole
idrofiliche trasportate.

Proprietà:
Selettività
Cancello (stati: aperto-chiuso)
apertura o chiusura regolata da :
♠ ligandi (canali regolati chimicamente)

♠ stato elettrico della cellula (canali voltaggio dipendenti)

♠ da una modificazione fisica (canali regolati


meccanicamente).
Apertura e chiusura dei canali
Proteina carrier Ma ne apro
Ho una
bocca da solo una
ciascuno dei alla volta!!!
due lati…

Proteina di
trasporto
Sostanza da
trasportare

La proteina ha due cancelli:


la molecola da trasportare si lega al carrier su un
lato della membrana I carriers mediano il
Il legame modifica la conformazione della trasporto di glucidi,
aminoacidi e
proteina:
nucleosidi
un cancello si apre e l’altro si chiude
Meccanismi di trasporto attraverso le membrane cellulari
Criteri classificazione:
permeabile: la molecola può attraversarla (presenza di
canali e proteine trasportatrici)
1) permeabilità
impermeabile: la membrana non permette il passaggio

passivo
no spesa di energia metabolica (diffusione semplice,
2) dispendio diffusione facilitata, trasporto attraverso canali proteici)
energetico
avviene lungo un gradiente (concentrazione o potenziale
elettrochimico) da maggiore a minore concentrazione.
attivo
costante apporto di energia (ATP)
contro gradiente (concentrazione potenziale elettrochimico).
Distinguiamo un trasporto attivo primario, che richiede un
apporto diretto di energia e un trasporto attivo secondario, che
utilizza una fonte energetica indiretta.
Meccanismi di trasporto di membrana
Diffusione esempio
Diffusione semplice
Se in una soluzione la concentrazione varia da una fase all’altra si crea un
flusso netto

M = - D grad [S ]
grad [S ] = ∆ S = SA -SB

Coefficiente di diffusione
(segno meno: direzione del
flusso opposta a gradiente)

Il processo di diffusione: continua fino


ad esaurimento gradiente di grad S = 0 S A = SB
concentrazione:
Diffusione e Legge di Fick
Legge di Fick della diffusione
Prima legge di Fick:
J: (moli/t) velocità di diffusione;
J = - D A dc/dx A: area;
dc/dx gradiente di concentrazione;

cm/sec: velocità
sostanza attraverso
la membrana

Tenendo conto dello spessore della membrana (δ ):

P=D/δ
a riposo: PK+ >> PNa +

La membrana presenta una permeabilità selettiva al passaggio


delle sostanze.
es: muscolo scheletrico anfibi: Pk = 10-6 cm /sec PNa = 10-8 cm / sec
Meccanismi di trasporto mediato
La sostanza attraversa la membrana grazie ad uno specifico trasportatore:

Meccanismi di trasporto Trasporto


no energia
facilitato Passivo
mediato: metabolica
(Glucosio)

Trasporto attivo Spesa metabolica (ATP, O2)


(Na+/K+ ATP-asi)
Differenze
tende ad equilibrare le sostanze
capace di pompare una ai lati della membrana
sostanza contro gradiente di sfruttando forme di energia
potenziale potenziale. Non risente di veleni
metabolici. Es: trasporto
glucosio mediato da insulina.

Proprietà

saturazione competizione
Il trasporto del glucosio mostra saturazione quando tutti I
carrier sono occupati
Pompa Na+- K+
1. Na+ citosolico 2. Il legame inizia idrolisi ATP
si lega al trasportatore ad ADP e fosforilazione del
trasportatore
7. pompa pronta per (legame Pi)
nuovo ciclo

Ciclo pompa
6. K rilasciato nel
+

citosol Na+-K+
3.legame Pi:
cambiamento conformazionale
rilascio Na+ extracellularmente

5.Legame K+ induce 4. I siti di binding


rilascio Pi e permette del K+ possono
nuovo cambiamento essere occupati
conformazionale
Pompa Na+-K+: esempio di trasporto attivo primario

Pompa 3 ioni Na+ fuori dalla cellula e 2 ioni K+ dentro


Mantiene i gradienti di concentrazione di Na+ e K+ a cavallo della
membrana
Usa 1 ATP per ogni ciclo: 100 cicli /sec
Usa ¼ dell’energia per la maggior parte delle cellule, ¾ per i neuroni

Spazio extracellulare

Interno della
cellula
Origine del potenziale di membrana
1) capacità delle sostanze di
A) attraversare la membrana:
• acqua e ioni diffondono attraverso i canali
secondo gradiente di concentrazione
• permeabilità selettiva di membrana: a riposo i
canali K+ e il Cl- sono per lo più aperti- i canali
Na+ sono per lo più chiusi.
B)
2) presenza anioni proteici confinati dentro la
cellula

3) pompa Na+- K+ elettrogenica

Possono sostanze distribuite in diversa concentrazione in


compartimenti diversi risultare in equilibrio?

Donnan
Il potenziale di membrana-grafico
Equilibrio di Gibbs-Donnan
Considerate due soluzioni a e b che riempiono due compartimenti separati da
una membrana semipermeabile, all’equilibrio:
1. Ciascuna soluzione sarà elettricamente neutra:
[cationi] a = [anioni]a [cationi] b = [anioni]b

2. [cationi diffusibili] a * [anioni diffusibili]a = [cationi diffusibili]b*[anioni


diffusibili]b

a b
[Na+]a = [Cl-]a + [X-]a; [Na+]b = [Cl-]b
8 Na+ Na+ 4 8 = 2 + 6 ; 4 = 4

2 Cl -
Cl -
4 [Na+]a * [Cl-]a = [ [Na+]b * [Cl-]b
8 * 2 = 4 * 4
6 X-
Ione indiffusibile [Na+]a > [Cl-]a; [Na+]a > [Na+]b; [Cl-]a > [Cl-]b
[Na+]a + [Cl-]a > [Na+]b + [Cl-]b
In presenza di uno ione indiffusibile

ci sono più ioni diffusibili nel compartimento che contiene X-


Può una cellula trovarsi in un equilibrio alla Donnan?

Se due soluzioni contengono ioni liberamente diffusibili, all’equilibrio,


si avrà una distribuzione simmetrica delle concentrazioni

Se sono presenti ioni indiffusibili la distribuzione all’equilibrio sarà asimmetrica

L’effetto Donnan è determinato dalla permeabilità selettiva e dal trasporto


passivo, ma può essere esaltato o inibito dal trasporto attivo

L’origine del potenziale di membrana ma non il suo mantenimento

OSMOSI conseguenza dell’asimmetria


Il mantenimento del volume cellulare
ingresso Se la pompa viene
H2O > bloccata con:
uscita •veleni metabolici
(uabaina)
•bassi livelli di O2

La cellula si
rigonfia
rompendosi
Equilibrio elettrochimico
a) Sostanza non dotata di carica:
Differenza di energia potenziale di
concentrazione Wc
C6H12 O6 C6H12 O6
Wc
lavoro necessario per trasportare
1mole dall’esterno all’interno
out in contro gradiente di concentrazione.

Wc WC = RT(log e[K+ ]i − loge[K+ ]e


K+
K + R: costante universale gas

+ WE - Equilibrio:
[out] = [in]
b) Ione: differenza di energia potenziale elettrica WE lavoro che deve essere
compiuto contro forze elettriche per trasportare 1 mole attraverso la membrana
WE = ZioneF εm ione diffusibile: la
F costante di faraday forza chimica può Equilibrio
ε m voltaggio elettrochimico
essere equilibrata
transmembrana
dalla forza elettrica
Potenziale elettrochimico e legge di Nernst
La differenza di potenziale elettrochimico (∆ µ ) è la somma della differenza di
energia elettrica e di concentrazione ai lati della membrana.
[K + ]i
∆µ K = Z K F ε m + RT loge +
[K ]e
All’equilibrio ∆ µ = 0 µ A = µ B equazione di Nernst valida per una qualunque
specie ionica in equilibrio fra ambiente extra- ed ambiente intra-cellulare.
Eq. Nernst per sodio e potassio
+
RT [K ]
εK = loge + e Na+
ZF [K ]i +
P IO Naout( 150mM) +61
S EM εNa = 61log + 
E  Nain( 15mM) 
potenziale di
equilibrio 61 log (10) = 61 mV
stabilisce quale 0
K+
valore deve avere il
+
 Kout
potenziale di ( 5mM)  -70 Resting
εK = 61log +  potential
membrana perché K
 in( 150mM )
lo ione sia in
 1
equilibrio 61log  = 61 ( −1.47)= −90mV -90
 30
Potenziale di riposo

cellula a
riposo:
non è in
equilibrio
ma in uno
‘stato
stazionario’
a spese di
energia
metabolica