ENZIMAS

FUNES BIOLGICAS

REAES QUMICAS
Aceleram a velocidade das reaes

ENZIMAS = catalizadores biolgicos

PROPRIEDADES DAS ENZIMAS

Catalizadores proticos Aumentam a velocidade das reao e no so consumidas nesta reao
Enzima + Substrato => Enzima + Produto

A seguir propriedades importantes das enzimas:

Stios ativos
Bolso ou fenda especial Contm aminocidos cujas cadeias laterais criam um encaixe perfeito ao substrato Substrato liga-se ao stio ativo => complexo enzimasubstrato (ES) ES => convertido a enzima-produto (EP)

E+S

ES

E+P

Eficincia cataltica
Reaes altamente eficientes Mais de 100x mais rpido que reaes no catalizadas 1 segundo: 1 molcula de enzima capaz de transformar 100 a 1000 molculas de substrato em produto. Nmero de turnover: n de molculas de substrato convertidas em produto por uma molcula de enzima por segundo.

Especificidade
Altamente especficas

Interagem com substratos especficos

Catalizam somente um tipo de reao qumica

Cofatores
Algumas enzimas necessitam de cofatores no-proteicos para atividade
ons metlicos (Zn+2, Fe+2) Coenzimas - molculas orgnicas derivadas de vitaminas (NAD+, FAD)

Holoenzima: enzima + cofator Apoenzima: poro protica da holoenzima Grupo prosttico: poro no-protica da holoenzima Ausncia de cofator => apoenzima no tem atividade

Poro protica APOENZIMA

on Cofator Coenzima

HOLOENZIMA Grupamento prosttico

MECANISMO DE AO ENZIMTICA

Alteraes de energia que ocorrem durante a reao

Enzima fornece rota de energia favorvel para que acontea a reao diferente da reao no catalizada No altera equilbrio da reao

Alteraes de energia
Energia livre de ativao: Barreira energtica que separa os reagentes do produto Durante a formao do produto formase um intermedirio de alta energia (estado de transio T*) S T* P Para reagirem molculas devem superar a barreira de energia no estado T*

 ENZIMA: fornece rota de reao alternativa com uma menor energia livre de ativao. Reaes catalizadas por enzimas: rpidas (G) Reaes no-catalizadas: lentas (G)

T*

FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE REAO ENZIMTICA

Velocidade de reao (V): n de molculas de substrato convertidas em produto por unidade de tempo. (micromoles/mim) Fatores
Concentrao de substrato Temperatura pH

Concentrao de substrato
Velocidade aumenta com o aumento da concentrao do substrato at atingir velocidade mxima (Vmx) Saturao de todos os stios de ligao da enzima Curva hiperblica
*grfico

Efeito da concentrao de substrato na atividade enzimtica

Temperatura
Velocidade aumenta com aumento da temperatura at pico de velocidade Elevao adicional da temperatura: reduz velocidade pela desnaturao da enzima pelo calor

Efeito da temperatura na atividade enzimtica

pH
Concentrao de H+:
Protonao e desprotonao de grupos qumicos do stio ativo (atividade cataltica) pH extremos: desnaturao da enzima (carter inico das cadeias laterais de aa estrutura)

Efeito do pH sobre atividade enzimtica

pH
pH timo: atividade mxima
Diferente para cada enzima (maioria faixa 6,8 a 7,4) Reflete a [H+] que enzima funciona no corpo Ex: pepsina: atividade mx. pH=2

EQUAO DE MICHAELIS-MENTEN Modelo de reao enzimtica

K1 K2

E+S

ES E + P

K = constantes de velocidade Equao: descreve como a velocidade de reao varia com a [S]:
Vo = Vmax[S] Km + [S]

V
Vmx
Vmax/2 2

Km

[S]

Enzima seguindo a cintica de Michaelis-Menten

Efeito da concentrao do substrato na velocidade de reao

Cintica de Michaelis-Menten
Km: Reflete a afinidade da enzima a um substrato especfico, ou seja, Existe Km para cada enzima Numericamente = a [S] na qual a velocidade de reao igual a metade da Vmax (Vmax/2) No varia com a [E]

 Km: afinidade elevada da enzima ao substrato (baixa [S] necessria para saturar a enzima em 50%) Km: baixa afinidade da enzima ao substrato ([S] elevada necessria para saturar a enzima em 50%)

Ordem de reao
Em baixas concentraes de substrato a velocidade de reao de primeira ordem isto , proporcional a concentrao de substrato Em altas concentraes de substrato, a velocidade da reao de ordem zero isto , constante e independente da concentrao de substrato

[S]

INIBIO DA ATIVIDADE ENZIMTICA INIBIDOR: qualquer substncia que possa diminuir a velocidade de uma reao catalizada por enzima.

Inibidores reversveis
Inibidores irreversveis
Dois tipos mais comuns de inibio:

Inibio competitiva
Inibidor liga-se, reversivelmente, ao mesmo stio do substrato Compete com o substrato pelo mesmo stio

Inibio competitiva
Reverso: [S] atinge Vmax Km aparente necessrio mais substrato na presena do inibidor competitivo para atingir 50% Vmax

Angiotensinognio
Renina

Angiotensina I
ECA

INIBE

CAPTOPRIL

Angiotensina II
Inibidor competitivo da ECA (enzima conversora de angiotensina

Vasoconstrio Reteno sdio e gua

Aumento da presso arterial

Inibio no-competitiva
Inibidor e substrato ligam-se em diferentes stios da enzima Inibidor pode ligar-se:
Enzima livre Complexo ES

Impede reao

Inibio no-competitiva
Vmax (no adianta [S]) Km no se altera (no interferem na ligao da enzima ao substrato)

Intoxicao pelo chumbo

CHUMBO Forma ligaes covalentes irreversveis com enzimas por inibio nocompetitiva Inibe:
Ferroquelatase: enzima que cataliza a insero do Fe+2 a protoporfirina (porfirias)

ENZIMAS NO DIAGNSTICO CLNICO

ENZIMAS PLASMTICAS
Secretadas pelos rgos
Liberadas pelas clulas durante metabolismo normal

Quantidades constantes e pequenas no plasma indivduos saudveis

Aumento da atividade enzimtica plasmtica

DOENAS

Liberao aumentada de enzimas intracelulares

Leso tecidual

ENZIMAS SO ESPECFICAS TECIDOS

ATIVIDADE AUMENTADA NO PLASMA LESO NO TECIDO CORRESPONDENTE

Ex.: ALT (alanina aminotranferase) abundante no fgado

Aumento plasmtico da atividade de enzimas de distribuio tecidual ampla => falta de especificidade ao tecido lesionado (valor diagnstico limitado)

DOENAS PANCRETICAS
AMILASE Normalmente secretada pelo pncreas no duodeno onde hidrolisa carboidratos Leses das clulas ou obstruo ducto pancretico: atinge capilares. Pancreatite; carcinoma pancretico No muito especfica

DOENAS PANCRETICAS
LIPASE Normalmente secretada pelo pncreas no duodeno onde hidrolisa triglicerdios Leses das clulas ou obstruo ducto pancretico: atinge capilares. Pancreatite; carcinoma pancretico Sensvel e especfica

DOENAS HEPTICAS
ALANINA AMINOTRANSFERASE (ALT, TGP)
Predomina no fgado (mas encontrada tambm nos rins, corao e msculos) Citoplasma (90%) e nas mitocndrias (10%) da clula heptica Leso heptica a libera para a corrente sangnea
Hepatites virais Leso hepatocelular induzida por drogas, etc

DOENAS HEPTICAS
ASPARTATO AMINOTRANSFERASE (AST, TGO) Encontrada em altas concentraes: msculos, corao, fgado (rins e pncreas) Clulas hepticas: 60% nas mitocndrias e 40% no citoplasma Leses: aumentam nveis sricos Acompanhamento do IAM: junto com outras enzimas

DOENAS PANCRETICAS
Relao AST/ALT > 1: hepatites crnicas, carcinomas hepticos, cirrose alcolica. < 1: hepatites agudas, mononucleose infecciosa

DOENAS HEPTICAS
FOSFATASE ALCALINA (FAL) Vrios tecidos (fgado, epitlio trato biliar, osso) Isoenzimas (diferenciar tecido origem) Obstruo do trato biliar e cirroses Doenas sseas (tumores)

DOENAS HEPTICAS
GAMAGLUTAMIL TRANFERASE (GGT)

Predomina nos hepatcitos Leso hepatocelular aguda Obstruo trato biliar (muito til para dignstico de colestases porque no se altera em doenas sseas) GGT normal e FAL alta: doena ssea GGT alta e FAL normal: doena heptica Alcoolismo

DOENAS CARDACAS
CREATINOQUINASE (CK) Msculo cardaco, esqueltico e crebro IAM: aumento em 65 a 100% casos (mas apresenta muitos inconvenientes) Leso muscular aguda; esforo intenso

DOENAS CARDACAS
CREATINOQUINASE (CK) Isoenzimas
CK-BB: crebro (incomum aumento) CK-MM: msculos esqueltico (exerccios intensos, traumatismos...) CK-MB: msculo cardaco (bastante especfica para diagnstico IAM)
Aumenta em 3-6 h aps infarto Valor mximo 12-24 h Retorna ao normal em 24-48 h (no ocorrendo novo infarto)

DOENAS CARDACAS
DESIDROGENASE LTICA (DHL) Vrios tecidos (corao, msculos, hemcias, rins, crebro, pulmo) LDH total elevada: vrias condies clnicas. Em associao com outras enzimas ou as isoenzimas especficas melhor uso clnica

DOENAS DA PRSTATA
FOSFATASE CIDA PROSTTICA Prstata e vrios outros tecidos Auxilia no diagnstico e monitorizao do tratamento de cncer de prstata Altas concentraes

DOENAS DA PRSTATA
ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO (PSA) Produzido somente pelo tecido prosttico Tecido prosttico canceroso produz 10x mais que o normal Associado ao toque retal altamente sensvel e especfico no diagnstico cncer de prstata.