Biologa Molecular en Endocrinologa

Gustavo F. Gonzales Septiembre 2005

Biologa Molecular

Es el estudio de la biologa a un nivel molecular. Su campo se superpone con otras reas de la biologa, particularmente la gentica y la bioqumica. Se refiere al entendimiento de las interacciones entre los varios sistemas de una clula, incluyendo la interrelacin del DNA, RNA y la sntesis de protenas y aprender como se regulan estas interacciones.

Biologa Molecular

Es el estudio cientfico de la base molecular del proceso de la vida, incluyendo la respiracin molecular, excrecin y reproducccin. El trmino Biologa Molecular fue acuado en 1938 por Warren Weaver, quien sera luego director del programa de Ciencias Naturales en la Fundacin Rockefeller. En 1950 W. T. Astbury de la Universidad de Leeds us el trmino en su acepcin actualmente aceptada: Para describir el rea de investigacin, muy cercanamente relacionada y a menudo superponindose a la Bioqumica, conducido por bilogos cuyo abordaje e inters en la biologa estn principalmente en el nivel molecular de organizacin.

Genoma humano
1953:

Watson y Crik decriben la estructura de doble hlice del DNA Junio del 2000: Borrador del genoma 30,000-40,000 genes 500,000- 1milln de protenas

Expression cloning

Una de las tcnicas ms bsicas de la biologa molecular para estudiar la funcin de las protenas es expression cloning. En esta tcnica, el DNA que codifica para un a proitena de inters es clonado (usando PCR y/o enzimas de restrictin) en plsmidos (conocidos como vectores de expresin). Este plsmido puede tener elementos promotores especiales que facilitarn la produccin de la protena de inters. Este plsmido puede ser insertado en clulas bacterianas o en clulas animales. La inoculacin de DNA en las clulas bacterianas se denomina transformacin

PLASMIDOS
Aunque

en general es adecuado decir que el genoma de los procariotas consta de un solo cromosoma, muchas bacterias poseen, adems, uno o varios elementos genticos accesorios extracromosmicos, a los que denominamos plsmidos.

The polymerase chain reaction (PCR)

Es una tcnica extremadamente verstil para copiar DNA. PCR permite que una secuencia simple de DNA sea copiada (millones de veces), o alterada de manera predeterminada. Por ejemplo, PCR puede ser usada para introducir sitiops de restriccin en enzimas, o para mutar (cambiar) bases particulares de DNA. PCR puede ser usado para determinar si un fragmento particular de DNA se encuentra en la cDNA library.

Estudio de las Funciones

Extirpacin

de rganos: Siglo XIX, Mitad de Siglo XX Extirpacin de Genes: Fines de Siglo XX, Siglo XXI

El ratn Knockout
A

mouse missing a single gene (that has been knocked out). Knockout mice are used in biomedical research. A mouse in which a single gene of choice is inactivated or "knocked-out" in a manner that leaves all other genes unaffected.

Cmo se prepara un gen Knock Out?

The gene to be "knocked out" is first isolated and genetically engineered to that it is inactive and carries genetic "tags" within it. This genetic construct is then introduced into special cells called embryonic stem cells. In a small number of cases, the inactivated gene will align with the correct gene, and then replace it. This event can be traced by the genetic tags introduced into the defective gene. Those embryonic stem cells carrying the inactivated gene can then be isolated and introduced (by injection) into a pre-embryonic structure called the blastocyst. The blastocyst can then be transplanted into a female mouse to develop to term. Some of the cells in the resultant mouse will contain the inactivated gene.

Homocigotes Knock out

El

blastocisto conteniendo el defecto en el gen es transplatado a una ratona hembra. Algunas de las clulas de los ratones resultantes (cras) contienen al gen inactivado. El apareo de un macho y una hembra cada uno conteniendo el gen inactivado produce un ratn o ratona homocigote.

Pakareinen T, Zhang FP, Nurmi L, Poutanen M, Huhtaniemi I: Knock out of luteinizing hormone receptor abolishes the effects of follicle stimulating hormone on pre-ovulatory maturation and ovulation of mouse Graafian follicles. Mol Endocrinology 2005. June

La

expresin del receptor de LH es esencial, adems de participar en la ovulacin, para la maduracin folicular en la progresin del estado antral al preovulatorio.

APOPTOSIS
Muerte

Celular Programada Marcadores: Caspasa 3

Apoptosis

Northen Blot y Western Blot

Evaluacin del RNA Evaluacin de anticuerpos anti-protenas

Biologa Molecular en Endocrinologa

Ejemplos

en la Literatura

Mantamadiotis T, Krets O, Ridder S, Bleckmann SC, Bock D, Grone HJ, Malaterre J, Dworkin S, Ramsay RG, Schutz G. Mol. Endocrinol. 2005. Sep

Hypothalamic

CREB loss causes anterior pituitary hypoplasia and dwarfism in mice

Pascual-Le Tallec L, Lombes M. Mol Endocrinol 2005. 19:2211-2221

The

mineralocorticoid receptor: a journey exploring its diversity and specificity of atcion.

Makridakis NM, Reichardt JK. J. Urol 2004; 171: S25-28

Molecular

epidemiology of androgenmetabolic loci in prostate cancer: predisposition and progression

Gonzales GF, Chung FA, Miranda S, Valdez LB, Zaobornyj T, Bustamante J, Boveris A. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2005; 288:H2568-2573

Heart

mitochondrial nitric oxide synthase is up-regulated in male rats exposed to high altitude (4,340 m)

Moeller LC, Dumitrescu AM, Refetoff S. Mol Endocrinol 2005. Jul

Cytosolic

action of thyroid hormone leads to induction of HIF-a (alpha) and glycolitic genes.

Tabb MM, Blumberg B. Mol Endocrinol 2005; Jul 21.

New

modes of action for endocrine disrupting chemicals

Chang CL, Roh J, Park JL, Klein C, Cushman N, Haberberger RV, Hsu SY. Mol. Endocrinol 2005, Jul
Intermedin

(IMD) functions as a pituitary paracrine factor regulating prolactin release.