ENZIMAS

CONCEPTO Y CLASIFICACION COENZIMAS Y COFACTORES. ESPECIFICIDAD ENZIMATICA. PROENZIMAS E ISOENZIMAS.

FACTORES QUE MODIFICAN LA

ACTIVIDAD ENZIMATICA. INHIBICION Y REGULACION ENZIMATICA.

ENZIMAS
Las enzimas son biocatalizadores excelentes, mas eficaces y especficos que dirigen y regulan reacciones de los sistemas biolgicos. Todas las enzimas tienen las siguientes propiedades qumicas: * Aumentan la velocidad de una reaccin al disminuir la energa de activacin. * No se consume ni sufre cambios en sus estructura durante el proceso cataltico. * Acta sobre una molcula orgnica denominada sustrato, transformndola en un producto o productos. * Son reguladas por una gran variedad de controles celulares, genticos y alostricos.

CLASIFICACION ENZIMATICA
CLASE 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de transferencia de electrones y/o protones de un sustrato a otro; es decir reacciones de oxido-reduccin. * Deshidrogenasas * Oxidasas * Oxigenasas * Reductasas * Peroxidasas * Hidroxilasas

LACTATO DESHIDROGENASA

LACTATO

PIRUVATO

CLASE 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupos funcionales entre donadores y aceptores. Los grupos que son transferidos frecuentemente son: fosfato, amino, glucosilo.

* Quinasas

* Transaminasas

* Transmetilasas

GLUCOSA

ADENOSIN TRIFOSFATO

GLUCOCINASA

GLUCOSA-6-FOSFATO

ADENOSIN DIFOSFATO

CLASE 3: HIDROLASAS
Estas reacciones implican la ruptura hidroltica de enlaces C-O, C-N, O-P y C-S. Se les puede considerar como como una clase especial de transferasas en las que el sustrato es escindido siendo sus fragmentos transferidos a los componentes del agua (OH y H). * Lipasas * Glucosidasas * Esterasas * Peptidasas

LACTOSA

LACTASA

GALACTOSA

GLUCOSA

LIPASA

TRIGLICERIDO

CIDOS GRASOS LIBRES

GLICEROL

CLASE 4: LIASAS
Catalizan reacciones en la que se rompen enlaces C-C, C-N y C-O, sin intervencin de agua y con prdida de grupos funcionales simultnea a la aparicin de dobles enlaces. * Descarboxilasas * Desaminasas

PIRUVATO DESCARBOXILASA
DIOXIDO DE CARBONO
PIRUVATO ACETALDEHIDO

CLASE 5: ISOMERASAS
Catalizan reacciones de isomerizacion de cualquier tipo, pticos, geomtricos o de posicin. * Epimerasa * Racemasa * Mutasa

ALANINA RACEMASA

L-ALANINA

D-ALANINA

CLASE 6: LIGASAS
Participan en reacciones en las que se unen dos molculas a expensas de un enlace fosfato de alta energa procedente del ATP. El termino sintetasa se reserva para este grupo de enzimas. * Tiocinasa * Sintetasa
Oxalacetato Citrato
CITRATO SINTASA

GLUTAMINA SINTETASA

GLUTAMATO

GLUTAMINA

NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS

La mayora de las enzimas (Apoenzimas) son de naturaleza proteica (90%). Algunas enzimas requieren de un componente adicional (cofactor o coenzima) para su funcionamiento. Estos se unen por medio de enlaces dbiles no covalentes. Las Coenzimas son molculas orgnicas, generalmente derivan de las vitaminas (NAD, FAD, Biotina, Tiamina). Los Cofactores son iones inorgnicos (Mg+2, Cu+2, Fe+2, Zn+2).
Cofactor Coenzima

Apoenzima

HOLOENZIMA

NADH

+
ENZIMA SUSTRATO OXIDADO

+
NAD

+
SUSTRATO REDUCIDO

COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO

ENZIMA

Glucosa

Fructosa

Sitio cataltico Enzima (sacarasa)

Productos son liberados

Sustrato (sacarosa)

Enzima disponible con sitio ctaltico vaco

3 Sustrato es convertido a productos

Sustrato se une a la enzima por encaje inducido

SITIO CATALITICO

El sitio cataltico o centro de fijacin del sustrato, es una pequea grieta o hendidura en una molcula proteica grande, donde se fija el sustrato. La estructura terciaria de la enzima est plegada de tal manera que se origina una regin con las dimensiones moleculares idneas para acomodar un sustrato especfico.

sitio cataltico de carboxipeptidasa

ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

La especificidad reside en una regin determinada de la superficie enzimtica, el centro de fijacin del sustrato. Pueden presentar especificidad ptica absoluta para al menos, una porcin de la molcula del sustrato o a la totalidad de dicha molcula.

PROENZIMAS
Tambin denominados Zimgenos, se sintetizan como precursores inactivos en un determinado tejido u rgano. Para poder transformarse a su forma activa (enzimas) se debe producir una ruptura proteoltica de un segmento de aminocidos, este proceso se tiene que realizar en un tejido diferente del cual fueron originados.

Sitio de sntesis Estmago Pncreas Pncreas Pncreas Pncreas

Zimgeno Pepsingeno Quimotripsingeno Tripsingeno

Procarboxipeptidasa

Enzima Pepsina Quimotripsina Tripsina

Carboxipeptidasa

Proelastasa

Elastasa

ISOENZIMAS
Son enzimas que tienen diferente secuencia de aminocidos, es decir, son formas moleculares diferentes. pero catalizan la misma reaccin qumica. Estas isoformas son codificadas por genes diferentes y sintetizados en tejidos u rganos diferentes.

ISOENZIMAS DE CREATINA FOSFOQUINASA

MUSCULO ESQUELETICO

MUSCULO CARDIACO

CEREBRO Y RION

Su accin la realizan de forma intracelular por eso cuando se encuentran elevadas en el suero o plasma son de gran utilidad en el diagnostico de enfermedades.

ELECTROFORESIS

DENSITOGRAMA

ISOENZIMAS DE LACTATO DESHIDROGENASA

 Ribozimas.- son RNAs catalticos, estn constituidos por nucletidos, son importantes en la eliminacin de intrones y ensamblaje de exones, es decir en el mecanismo de maduracin del RNA Abzimas.- son anticuerpos catalticos de naturaleza proteica del tipo de las inmunoglobulinas (Ig), sirven como molculas de proteccin neutralizando sustancias extraas de daan las clulas. Sinsimas.- son enzimas de origen sinttico, se utilizan para el tratamiento de enfermedades, como las adicciones a drogas. Granzimas.- son proteasas que inducen o activan procesos de apoptosis, se sintetizan como zimgenos y se activan en lugares especficos de la clula.

Gen

Transcripcin

pre RNAm

Maduracin

RNA maduro

Clula normal

Apoptosis

Clula modificada

MODELOS ENZIMTICOS
MODELO DE LLAVE Y CERRADURA (E. Fischer). El sitio cataltico es una estructura rgida, por lo tanto el sustrato y la enzima se acoplan de forma estereoespecfica, de la misma manera que una llave se ajusta a su cerradura. MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO (D. Koshland). El sitio cataltico es una estructura dotada de flexibilidad, cuando el sustrato se une a la enzima, induce cambios conformacionales en esta molcula, para asegurar la ubicacin ms efectiva.

FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

CONCENTRACIN DEL SUSTRATO
Cuando aumenta la concentracin de sustrato, se produce un aumento en la velocidad de reaccin, al seguir aumentando la concentracin de sustrato la velocidad de reaccin se hace constante. Por lo tanto obtiene una velocidad mxima de reaccin. Esto nos sirve para obtener la velocidad mxima media, y por ende determinar el Km de la reaccin (constante de Michaelis-Menten)

Km = Afinidad

EFECTO DE LA TEMPERATURA En nuestro organismo la temperatura optima es de 37C promedio, cuando disminuye o aumenta esta temperatura la actividad enzimatica disminuye, la enzima sufre alteraciones en su estructura. Por debajo de la temperaura promedio la actividad de la enzima disminuye por que esta sufre un proceso de inactivacion (proceso reversible), pero si la temperatura aumenta por encima de la optima la actividad enzimatica tambien disminuye, pero a diferencia de la primera la enzima sufre un proceso de desnaturalizacin (proceso irreversible).
Temperatura ptima para una tpica enzima humana Temperatura ptima para enzima de termfila

Actividad

20

40

80

100

Temperatura (C)

Temperatura ptima para dos enzimas

EFECTO DEL PH
La mayoria de las enzimas tiene un pH ptimo que varia entre 6-8. Pero tambien va a depender del tejido o del organo para poder determinar el pH mas optimo para las enzimas. Los cambios de pH en el medio pueden afectar el estado de ionizacin de ciertos grupos funcionales en la enzima y tambin en la del sustrato. Tanto la disminucion, como el aumento del pH, afectan la actividad enzimatica por que producen la desnaturalizacion de la enzima.
ENZIMA Fosfatasa alcalina Lipasa pancretica Quimotripsina Tripsina Catalasa Carboxipeptidasa Amilasa salival Fosfatasa cida Pepsina pH 9.5 8.0 8.0 7.9 7.6 7.5 6.8 5.0 1.5
pH ptimo para pepsina (enzima del estmago)
pH ptimo para tripsina (enzima intestinal)

Actividad

3 4 0 2 1 pH ptimo para dos enzimas

INHIBICIN ENZIMTICA
Los inhibidores enzimticos son aquellos agentes que interfieren con la catlisis, disminuyendo o deteniendo la reaccin enzimtica. Se dividen en 2 grandes grupos: 1.- INHIBICIONES REVERSIBLES 2.- INHIBICION IREVERSIBLE Inhibicin no competitiva Inhibicin competitiva y Inhibicin acompetitiva INHIBICIN COMPETITIVA El inhibidor generalmente tiene una estructura quimica semejante al sustrato, por lo tanto puede combinarse con la enzima libre, de tal modo que compite con el sustrato especifico por el sitio cataltico. Una caracterstica de este tipo de inhibicin est dada por el hecho de que puede ser revertida aumentando la concentracin de sustrato.
Sustrato Inhibidor Competitivo

Inhibidor Competitivo

INHIBICIN NO COMPETITIVA

El inhibidor no tiene una estructura semejante a la del sustrato, por lo tanto se une a un sitio activo diferente al sitio catalitico de la enzima, deformndola de tal manera que no puedan formarse el complejo enzima-sustrato (ES).
No existe competencia por el sitio catalitico entre el sustrato y el inhibidor.

Inhibidor No competitivo

Sustrato

Sustrato Inhibidor No Competitivo

La sulfonamida (sulfametoxazol) es un inhibidor competitivo de la enzima Dihidropteroato Sintasa, una de las enzimas que regula la sntesis de acido tetrahidrofolico, coenzima importante para la sntesis de bases nitrogenadas, constituyentes de los nucletidos.

El PABA (acido para-aminobenzoico), es el sustrato que inicia la sntesis de acido flico. Observe la estructura qumica de los inhibidores.

INHIBICION ACOMPETITIVA El inhibidor no tiene ninguna semejanza estructural con el sustrato, se une a un sitio activo de la enzima, pero no se une a la enzima sola, este se une al complejo ES, formando de esta manera un complejo ESI.
Sustrato

Inhibidor Acompetitivo

Inhibidor Acompetitivo

INHIBICIN IRREVERSIBLE: El inhibidor produce un cambio permanente en la molcula de enzima, que resulta en un deterioro definitivo de su capacidad cataltica. Por lo general estos inhibidores modifican qumicamente residuos de aminocidos en la enzima que tienen funciones fundamentales en la catlisis. Ej. los gases nerviosos, como el fluorofosfato de diisopropilo (DIFP) que reaccionan con aminocido serina de la enzima acetilcolinesterasa, el cido iodoactico y iodoacetamida que reaccionan con cistena.

REGULACION O MODULACION ENZIMATICA

REGULACION ALOSTERICA

Los reguladores alostricos actan como co-sustratos, se unen a la enzima en un lugar

especifico denominado sitio alostricos. Efectores Positivos: se unen a la enzima, modificando el sitio cataltico para que se una el sustrato y asi pueda este transformarse en productos. Efectores Negativos: se unen a la enzima, modificando la estructura del sitio cataltico de tal manera que ya no se pueda unir al sustrato, por lo tanto no se forma los productos.
Sitio Sitio Cataltico Alostrico PRODUCTOS

Sitio Sitio Alostrico Cataltico

SUSTRATO

ENZIMA Efector Positivo PRODUCTOS SUSTRATO

ENZIMA Efector Negativo

NO FORMACIN DE PRODUCTOS ENZIMA EFECTOR POSITIVO ENZIMA EFECTOR NEGATIVO

REGULACION COVALENTE
Se produce cuando la enzima que regula el proceso sufre estados de fosforilacion, este proceso es llevado a cabo por enzimas denominadas quinasas. Estas enzimas modifican su actividad cataltica a travs de su unin a un grupo qumico de pequeo tamao (grupos fosfato). Estos grupos sern eliminados posteriormente de la enzima reguladora por enzimas denominadas fosfatasas. La enzima fosforilasa, se encuentra en el msculo en reposo en un estado inactivo de baja actividad llamada fosforilasa b, la cual es convertida en fosforilasa a activa, por adicin de restos fosfato que se unen al hidroxilo de residuos serina en la molcula de la enzima.
GLUCOSA-1-FOSFATO

QUINASA

FOSFATASA GLUCOGENO FOSFORILASA b (inactiva) GLUCOGENO FOSFORILASA a (activa)

MOLECULA DE GLUCOSA

CADENA DE GLUCOGENO (n)

GLUCOGENO FOSFORILASA a (activa)

CADENA DE GLUCOGENO (n-1)

REGULACION POR RETROALIMENTACION

Este tipo de modulacin se caracteriza por que la enzima clave en la ruta sinttica es inhibida por los productos finales, lo que da como resultado la interrupcin del proceso metablico.
Tambin se denomina regulacin por retroinhibicin (inhibicin feed-back), es decir el producto regula su propia sntesis.

VIA DE REUTILIZACION

CIDOS NUCLEICOS

VIA DE NOVO

IMPORTANCIA DE LAS ENZIMAS EN EL DIAGNOSTICO

Enzima srica Abreviatura Enfermedad

Aspartato aminotransferasa Alanina aminotransferasa Amilasa Creatinfosfocinasa Colinesterasa Fosfatasa cida Fosfatasa alcalina Glutamato descarboxilasa -Glutamil transferasa

AST ALT

Enfermedades hepticas Isquemia miocrdica Enfermedades hepticas Isquemia miocrdica Pancreatitis aguda

CPK CHE ACP AP GAD GT

Isquemia miocrdica Intoxicacin alcohlica aguda Carcinoma de Prstata Ictericia obstructiva. Tumores Diabetes mellitus(tipo I) Cirrosis alcohlica.

Lipasa

Pancreatitis aguda