Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
GENTICA MOLECULAR
Antes del inicio de la transcripcin se necesitan toda una serie de factores de transcripcin que ejercen de factores de iniciacin, que se unen a secuencias especficas de ADN para reconocer el sitio donde la transcripcin ha de comenzar y se sintetice el ARN. Esta secuencia de ADN en la que se ensamblan los complejos de transcripcin se llama promotor.
Los promotores se localizan en los extremos 5'-terminales de los genes, antes del comienzo del gen, y a ellos se unen los factores de transcripcin mediante fuerzas de Van der Waals y enlaces de hidrgeno
TRANSCRIPCIN
27/08/2008
CUNDO OCURRE? G1 G2
27/08/2008
Dnde Ocurre?
Procariota
Eucariota
27/08/2008
REGLAS FUNDAMENTALES
Se realiza de forma complementaria a la cadena molde de DNA. Muy selectivo, por seales (Secuencias DNA). No necesita iniciador. Ocurre unidireccionalmente. La direccin de lectura es 3 5 La direccin de sntesis es 5
27/08/2008 7
1- MOLDE:
CADENA DE DNA DPLEX 2- SUSTRATOS: 4 RIBONUCLESIDOS TRIFOSFATADOS (ATP, GTP, CTP y UTP) 3- ENZIMA: RNA POLIMERASA DNA DEPENDIENTE (RNA POL)
27/08/2008 8
ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIN
- INICIACIN
3- ELONGACIN 4- TERMINACIN 5
27/08/2008
10
~19 pb
GENERAL TGTTGACA
REGIN -35
~7 pb
TATAAT ...
REGIN -10 SITIO DE INICIACIN
27/08/2008
11
5GCTATAATGTGTGGAGCATTG 3 -10 -5 +1 +5
5-TATAAT-3 LA CAJA PRIBNOW (6n)
27/08/2008
12
INICIACIN
1.
5. Deslizamiento de la RNA Pol sobre el DNA hasta llegar a la 1ra. base que ser copiada (+1).
27/08/2008
13
1.
Entra el primer ribonuclesido trifosfatado (+1) que ser el extremo 5 del RNA (ATP o GTP).
ELONGACIN
1.
3. Movimiento de la enzima a lo largo del DNA. (Desenrollando por delante y re-enrollando por detrs- DNA Topoisomerasas I y II.) 4. Se alarga el RNA con la entrada sucesiva de los dems nucletidos hasta alcanzar la seal de terminacin.
27/08/2008 15
Terminacin:
La terminacin est sealizada por la informacin contenida en sitios de la secuencia del ADN que se est transcribiendo, por lo que la ARN polimerasa se detiene al transcribir algunas secuencias especiales del ADN.
Estas secuencias son ricas en guanina y citosina, situadas en el extremo de los genes, seguidas de secuencias ricas en timina, formando secuencias palindrmicas, que cuando se transcriben el ARN recin sintetizado adopta una estructura en horquilla que desestabiliza el complejo ARN-ADN, obligando a separarse de la ARN polimerasa, renaturalizndose la burbuja de transcripcin.
A A A A A A A A
A G C C C G U U U U U U U U C G
G
G C G
Factor rho () Protena 6 sub-unidades. Se une al RNA, hidroliza ATP y la energa liberada es capaz de moverlo a lo largo del RNA que se est sintetizando en direccin de la burbuja de transcripcin.
Cuando llega a dicha burbuja, el factor rho disocia el hbrido DNA-RNA por un mecanismo desconocido, liberando el RNA al citoplasma.
POSTTERMINACIN O MADURACIN
Todos los RNAr y RNAt en procariotas sufren modificaciones hasta ser totalmente funcionales.
RNAt Modificacin
de bases por metilacin, desaminacin o reduccin, formndose bases raras.
RNAr a partir de un nico precursor (30S) se forman los RNA precursores largos de los RNAr. RNAr 5.8s, 16s y 23s.
27/08/2008
20
POSTTERMINACIN O MADURACIN
RNAm PROCARIOTAS
RNAm procariota Es funcional. RNAm Monocistrnico No necesita maduracin. Informacin para No se modifica. sntesis de una Corresponde al RNA protena. Transcrito Primario.
Transcripcin en procariotas
Ensamblaje de protena e inicio de transcripcin
Interactan con : DNA RNA sintetizado ribonucletidos Conforman el sitio cataltico de la enzima.
Regin Promotora
AT
TTGACA
-35
16-19pb
TATAAT
-10
5-9 pb
Purina
+1
Transcripcin
Cadena codificante:
5-- CTG CCA TAC GAT CTG CGC TGC --3 DNA
Cadena Molde:
--5
--3
RNAm
Elongacin
A 40 nucletidos x segundo
Terminacin
Rho Independiente Rho Dependiente
TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS
1- MOLDE CADENA DE DNA DPLEX 2- SUSTRATOS: 4 RIBONUCLESIDOS TRIFOSFATADOS (ATP, GTP, CTP y UTP) 3- ENZIMAS; 3 CLASES: RNA POLIMERASA I (RNA POL I) RNA POLIMERASA II (RNA POL II) RNA POLIMERASA III (RNA POL III)
27/08/2008 31
TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS
Proceso ms complejo que en procariotas. Participan numerosos factores de transcripcin. Todos los RNAm eucariotas son madurados.
27/08/2008
34
COLA DE POLI A 40 a 200 nucletidos de A en extremo 3 Ayuda a su estabilidad, facilita su salida del ncleo al citoplasma y lo protegen de la destruccin enzimtica.
27/08/2008
35
27/08/2008
36
EXONES
Las regiones de un gen que contienen la informacin para producir la protena codificada. Cada exn codifica una porcin especfica de la protena completa.
INTRONES
Regiones del DNA que separan los exones de un gen. No codifican protenas. Todava no se conoce su funcin. Deben ser eliminados del transcrito primario de RNA. Los intrones son comunes en todos los tipos de RNA eucariotas, RNAm. En algunos RNAt y RNAr de procariotas. Existen 4 tipos de intrones: Grupos I IV.
TRANSCRIPCIN EUCARIOTAS
27/08/2008
39
TRANSCRIPCIN: 1- Iniciacin: Una RNA-polimerasa comienza la sntesis del precursor del RNA a partir de unas seales de iniciacin "secuencias de consenso " que se encuentran en el DNA.
RNA polimerasa
T A
A U
A U
A U
C G
T A
T A
G C
C G
A U
C G
G C
G C
27/08/2008
40
TRANSCRIPCIN: 2. Alargamiento: La sntesis de la cadena contina en direccin 5'3'. Despus de 30 nucletidos se le aade al RNA una cabeza (caperuza o lder) de metil-GTP en el extremo 5 con funcin protectora.
RNA polimerasa
T A
A U
A U
A U
C G
T A
T A
G C
C G
A U
C G
G C
G C
m-GTP
27/08/2008 41
TRANSCRIPCIN: 3- Finalizacin: Una vez que la enzima (RNA polimerasa) llega a la regin terminadora del gen finaliza la sntesis del RNA. Entonces, una PoliA polimerasa aade una serie de nucletidos con adenina, la cola poliA, y el RNA, llamado ahora RNAm precursor, se libera.
PoliA polimerasa
m-GTP
G C
RNAm precursor
27/08/2008
42
4. Maduracin (cont.): El ARNm precursor contiene tanto exones como intrones. Se trata, por lo tanto, de un ARNm no apto para que la informacin que contiene sea traducida y se sintetice la correspondiente molcula proteica. En el proceso de maduracin un sistema enzimtico reconoce, corta y retira los intrones y las ARN-ligasas unen los exones, formndose el ARNm maduro.
Cabeza
AUG UAG
cola
AAAAAA
44