Enzimas

- Son protenas catalticas. - Aceleran la velocidad de las reacciones en un medio con temperatura y pH controlados. - No modifican la Keq.

Cmo modifican la cintica de las reacciones?

En la siguiente animacin,podemos ver graficado el efecto de una enzima en la cintica ( velocidad) de la reaccin.

Especificidad de las enzimas

Las enzimas interaccionan con los sustratos a travs de las numerosas interacciones dbiles, que se establecen por complementariedad estructural. Las enzimas son esteroespecficas El sitio de unin de la enzima con el sustrato se llama SITIO ACTIVO (S.A) El S.A es una pequea porcin de la enzima.

Ejemplo de estructura de una enzima: la quimotripsina , una enzima digestiva que hidroliza protenas.
La estructura primaria de esta enzima consta de 245 aminocidos. La estructura cuaternaria de consta de tres cadenas polipeptdicas: a, b y c. Los enlaces disulfuro unen las cadenas a,b y c entre s. Los aminocidos del Sitio Activo son tres: His, Asp y Ser. De 245 aminocidos totales, solamente los grupos R de tres de ellos conforman el sitio activo de esta enzima.

Modelo espacial de la Quimotripsina

La enzima tiene un aspecto globular, dado por el plegamiento de las subunidades a,b y c. El S.A se muestra en naranja. Esta enzima tiene un solo S.A. Las enzimas pueden tener un S.A por subunidad.

Modelo del esqueleto polipeptdico en forma de cinta

Lmina plegada

Los grupos funcionales que componen el S.A estn en rojo, y los puentes disulfuro en amarillo. Puede observarse en detalle las superestructuras secundarias en alfa hlice y lmina plegada.

a- hlice

Un acercamiento al sitio activo

En detalle pueden verse los grupos funcionales dela enzima que toman contacto con el sustrato de la reaccin En la siguiente animacin se ve un modelo de enzima en accin.

CLASIFICACION INTERNACIONAL DE ENZIMAS

Existen 6 categoras:
1- Oxidoreductasas: 2-Transferasas

3- Hidrolasas
4- Liasas 5- Isomerasas 6- Ligasas

Nomenclatura La nomenclatura internacional reconoce a las enzimas mediante 4 nmeros. Por ejemplo: Anhidrasa carbnica es la enzima 4.2.1.1

Cintica de saturacin: curva experimental.

La tangente de la curva en este punto es la V0

Normalmente hay ms sustrato que enzima en los sistemas de reaccin,lo que explica el efecto de saturacin observado en la curva de M.Menten. Ni siquiera una alta concentracin de sustrato influir en la Vmax de la reaccin. Este tipo de curvas se conocen como Cintica Michaeliana.

Ecuacin de Michaelis Menten

Este es el algoritmo de la curva experimental. La V0 es la velocidad instantnea, o aceleracin a tiempo cero segn la cantidad de enzima. La Km es una constante para cada enzima con un determinado sustrato, en condiciones de pH y tC fijas.

Qu pasa cuando la V0 es 1/2 de la Vmax?

Veamos qu ocurre con la ecuacin de M.Menten en este caso. Si V0 es 1/2 de la Vmax, entonces:

1/2 Vmax= Vmax. [S] / Km + [S]

Km + [S] = 2 [S]

Km = [S] Cuando V0 es 1/2 de la Vmax

La concentracin intracelular de los metabolitos estn en el orden de los valores de Km de sus enzimas.

Cundo se alcanza la Vmax?

La Vmax se alcanza para valores muy altos de sustrato. Veamos en el clculo. Si V0 es el 99% de Vmax, entonces: 0,99 Vmax = Vmax. [S] / Km + [S] 0,99 Km + 0,99 [S] = [S] 0,99 Km = 0,01 [S] [S]= 99 Km Las reacciones enzimticas generalmente no operan a su Vmax

La Km es una constante para cada tipo de sustrato

Grficamente puede verse que la mitad de la Vmax se alcanza con una determinada concentracin de sustrato, cuyo valor es el de la Km. La Km no cambia para distintas concentraciones de enzima,lo que evidencia una elevada aceleracin del proceso.

V inicial (V0) Moles/tiempo

E1

E2 E3

Km

Sustrato (moles)

Variacin de la velocidad en funcin de la concentracin de la enzima

Producto
E1

E2
E3

tiempo

La tangente de cada una de las curvas representa la velocidad inicial para cada concentracin de enzima. La condicin para obtener esta grfica, es que la enzima est saturada por el sustrato. A mayor cantidad de enzima para un mismo Dt,la variacin de velocidad es mayor.

Valores de Km de algunas enzimas

El valor deKm depende del sustrato, como puede verse por ejemplo para la enzima hexoquinasa.

Otra forma de representar la cintica enzimtica. Ecuacin de Linneweaver-Burke

Qu factores afectan la actividad de una enzima?

Los factores que afectan la actividad de las enzimas en general son: pH temperatura concentracin salina ( osmolaridad) concentracin de sustrato y producto Sustancias inhibidoras a) reversibles: competitivas y no competitivas. b) irreversibles como muchos frmacos y agroqumicos

Efecto del pH en la actividad enzimtica

La grfica muestra la respuesta de una enzima digestiva en respuesta al pH. La Pepsina es una hidrolas de protenas ( proteasa), y su accin ocurre fuera de las clulas que la producen ( es una enzima extracelular).

Otro caso de respuesta de la actividad enzimtica frente al pH

Esta enzima es una esterasa ( hidroliza enlaces ster). La reaccin que cataliza es la siguiente:
Glucosa-6-P + H2O Glucosa + fosfato

Glucosa 6-fosfatasa

Los inhibidores competitivos de las enzimas, son estructuralmente semejantes a los sustratos

Inhibicin competitiva

Los inhibidores no competitivos de las enzimas, no se parecen estructuralmente a los sustratos

Inhibicin no competitiva

Representacin grfica de la accin de inhibidores reversibles competitivos y no competitivos

Competitiva, cambia la Km

No competitiva, cambia la Vmax

La pareja Enzima-Coenzima o EnzimaCofactor.

En algunos tipos de Enzimas, no basta el componente proteico para que sean reactivas. Necesitan la ayuda de otras especies que deben actuar junto con la enzima, y que pueden ser: Orgnicas: como el NAD, FAD, CoA, ATP.Generalmente contienen vitaminas en su estructura, o son vitaminas. Organometlicas: grupo Hemo ( porfirina ms Fe) Iones: Fe, K+, Mg2+, Ca2+, Mo ,Zn, Cu. La interaccin E-coenzima y E-cofactor es de tipo Reversible y No covalente.

Enzimas reguladoras
Estas enzimas pueden ser reguladas por:
Concentracin del producto final de una va metablica. Concentracon inicial del sustrato Concentracin de algn intermediario de la va metablica en la que participa. Por hormonas Por todos los factores mencionados Entre las enzimas reguladoras, el grupo de las Enzimas alostricas, es el de las que son modificadas por la accin reversible y no covalente de una molcula seal, que acta en el Sitio Alostrico.

Las enzimas alostricas responden a la accin de efectores positivos y negativos, respondiendo a modelos cinticos No-Michaelianos como el del siguiente grfico:
Las curvas tienen forma sigmoidal que indican un efecto cooperativo del sustrato. La respuesta al efector positivo, acerca la cintica al modelo Michaeliano. El modelo sigmoidal permite que la enzima sea activa en un rango de [S] ms acotado que en el modelo Michaeliano. Para cada efector, debe existir un sitio alostrico.

Ejemplo de regulacin alostrica por la Carga Energtica del sistema

Algunas enzimas alostricas del metabolismo responden a la Carga Energtica (CE) del Sistema. Las del Catabolismo se inhiben con CE por encima de 0,8. Las del Anabolismo se activan con CE por encima de 0,8. En estado de homeostasis las enzimas operan a un 50% de su Vmax

% de Vmax Catablicas

Anablicas

0 ,8

0,9

1,0

Carga energtica

REGULACION CELULAR DE LAS ENZIMAS

Modificacin covalente de las enzimas reguladoras: la actividad de las enzimas se modifica por cambios covalente reversibles en las cadenas laterales de determinados aminocidos de la enzima. Por ejemplo: a) fosforilacin defosforilacin de grupos hidroxilo; b) reduccin de grupos disulfuro. Activacin por ruptura proteoltica: algunas enzimas son sintetizadas inicialmente en forma inactiva y deben ser modificadas para adquirir actividad. Las formas inactivas se denominan Zimgenos. Regulacin por isoenzimas: son diferentes formas moleculares de enzimas que catalizan la misma reaccin, y poseen diferentes patrones cinticos.

La actividad enzimtica no se expresa en todos los tejidos por igual

El patrn proteico de cada clula, e incluso de cada compartimiento celular, depende de la expresin de los genes. Las enzimas son protenas, y la expresin de los genes que las codifican est regulada a nivel de la transcripcin. La forma ms efectiva de modificar la actividad de una enzima, es provocando su sntesis o inhibindola, de modo de hacer que est presente o no, en el sistema. Otra forma de modificar la actividad la actividad es mediante la regulacin del proceso de degradacin de la enzima ( aumentar la velocidad de recambio).