UN NUEVO MTODO PARA LA IDENTIFICACIN QUMICA, BASADA EN SEPARACIN ORTOGONALES PARALELA CROMATOGRAFIA LIQUIDA Y CONFIRMACION EXACTA DE PESO MOLECULAR

INTEGRANTES: HUERTA HERNNDEZ CHRISTIAN JHOANA

OLIVEROS ILIANA
RANGEL VEGA AGUSTN ROSALES CRDENAS EMANUEL SALGADO BAUTISTA DANIEL ALFONSO

RESUMEN

Metodo eficaz para la identificacion quimica, especialmente de los compuestos de estructura similar.

Sistema de separacion ortogonal que consiste de 3 columnas: C18, OGE y CD.

82 flavonoides como referencias para construir una biblioteca. Y almacenar datos como tiempo de retencin obtenidos en cada columna y PM en la biblioteca y utilizarlos como etiquetas. Validacion se utilizaron mezclas complejas: fracciones de Dalbergia odorifera T. Chen y Scutellaria baicalensis Georgi. Nueve compuestos fueron identificados de forma univoca por tr y PM.

Introduccin
o Anlisis y estrategias (IR) y (UV) o Cromatografa de Gases (CG) o Espectroscopia de masas (SM). o Cromatografa de Lquidos identificacin de muestras complejas. 1D-CL 2D-CL

TRES COLUMNAS

MATERIALES Y REACTIVOS

C18 (150 mm x 2.1 mm) OEG (150 mm x 4.6 mm) CD (150 mm x 4.6 mm)

ACETONITRILO HPLC
ACIDO FORMICO FORMIATO DE AMONIO

EL PROCEDIMIENTO SE LLEVO ACABO EN UN SISTEMA DE AGUAS ALIAZA HPLC LA ADQUISICION Y PROCESAMIENTO DE DATOS, EN AGUAS DE SOFWARE EMPOWER

CONDICIONES

TIEMPO DE EQUILIBRIO DE 15 MIN

TEMPERATURA 30 C

LOS EXPERIMENTOS SE REALIZARON EN UN SISTEMA DE AGUAS MICROMASS QTOF

LAS CONDICIONES SON LAS SIGUIENTES:

ES OPERADO EN MODO DE IONES POSITIVOS Y NEGATIVOS CAPILAR 2 KV CONO DE TENSIONES 20 V TEMPERATURA DESOLVATACION 300 C TEMPERATURA DELA FUENTE 100 C GAS DEL CONO 50 L/h DESOLVATACION DE GAS 1000 L/h

PREPARACION DE LA MUESTRA

SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI Y DALBERGIA ODORIFERA T. CHEN

100 g de S. baicalensis Georgi (D. odorifera T. Chen) se extrajo en el agua dos veces con tiempos de reflujo de 2 h y 1.5. Las decocciones se combinaron y luego se concentr con un secador por aspersin. El resultado de 1.5 g de polvo fino se disuelve en 4.5 ml de agua, y luego 10 ml de etanol al 95% y se reposo durante 24 h. El sobrenadante se concentr hasta 1.5 ml, y entonces la solucin se extrajo en 5 ml y 2.5 ml de acetato de etilo continuamente. La fraccin de acetato de etilo se recogen y se secan con un secador por aspersin. Para el anlisis, las dos fracciones de acetato de etilo fueron cada uno disuelto en metanol hasta aproximadamente 1mgml-1. El volumen de inyeccin de ambas fracciones fue de 5 L de la columna de la OEG y la columna de CD, y L-1 para la columna de C18.

SOFTWARE Y COFIGUARACION DE INTERVALO

El software utilizado fue desarrollado en el local con Microsoft Visual Basic 6.0 y se ejecuta en Windows XP Professional en una computadora personal. Los datos de las referencias y las incgnitas se ha importado a este software para crear una biblioteca de bsqueda. Varios parmetros se establecieron tambin, incluidos los umbrales tiempo de retencin de la columna C18, columna OEG y la columna de CD, as como un umbral para el peso molecular . En este estudio, los umbrales de tiempo de retencin de las columnas C18, OEG y CD se fijaron en 0.10 min, 0.3 y 0.10 minutos. El intervalo exacto de peso molecular fue fijado en 20 ppm.

Los resultados fueron almacenados en una lista una vez que el proceso haba terminado.

3.3 SEPARACIN ORTOGONAL

La reproducibilidad de los tiempos de retencin es crtica para efectuar una biblioteca y es controlable bajo condiciones de operacin estrictamente definidas, como son la temperatura de la columna, aditivos contenidos en la fase mvil, pH, flujo y equilibrio de tiempo.

Once pares de referencias se eluyeron simultneamente en una columna C18 con un tr0.03 minutos, de manera separada en la columna OEG el tr0.40 minutos mientras que en la columna CD el tr0.49 minutos.
75-79, 17-28, 20-63, 38-39, 46-80, 26-60, 2-49, 42-72, 58-32, 12-77, 4-59 Cinco pares de referencia eluyeron simultneamente en la columna OEG con un tr0.03 minutos, pero en la columna C18 tr 0.50 mi9nutos y la columna CD tr0.43 minutos.
10-20, 38-82, 28-57, 2-36, 41-81

Similarmente, las referencias no resueltas en la columna CD pueden ser separadas en la columna C18 y la columna OEG, adems la columna CD es capaz de lograra una separacin quiral de los compuestos acorde a los estudios previos.

Cabe mencionar que estos 4 pares de referencias incluyen un par de isomeros, mostrando una conducta de retencin similar en la columna C18 tr0.03 minutos, pero que puede ser resuelta en la columna CD tr0.21 minutos; acerca de esta dilucin, las fases estacionarias con eficiencia qumica nos permiten diferenciar la selectividad, para as diferenciar los analitos con menores diferencias.
22-42, 51-52, 26-31, 6-80

Una identificacin de resultados veraz de los analitos en orden a la visualizacin de evaluar la ortogonalidad de este sistema de separacin la correlacin de coeficientes (r2), los factores de retencin (k) para las r2 con la referencia de las distintas columnas (C18, CD, OEG) son calculadas.

3.4 REPRODUCIBILIDAD DE LOS TIEMPOS DE RETENCIN

Todas las sustancias estudiadas (flavonoides) fueron analizadas con estos tres tipos de columnas bajo tres diferentes condiciones cromatogrficas con la simplificacin y optimizacin de procesos. Algunas referencias muestran el mismo tiempo de retencin de una columna, pero pueden ser diferentes en otras columnas.

Las muestras utilizadas fueron: 4, 39, 41, 54, 65, 76 se usan para evaluar la reproducibilidad de la columna C18 y la desviacin de tiempo mximo de retencin fue de 0.08 minutos basados en estos resultados el tiempo limite para esta columna puede ser hasta de 0.10 minutos

Mientras que las muestras 12, 41, 46, 54 tambin fueron usadas para evaluar la reproducibilidad de la columna CD, el tr fue de 0.09 minutos, el limite para la columna CD fue de 0.1 minutos.

Finalmente las muestras 4, 41, 43, 53, 54 fueron usadas para evaluar la reproducibilidad de la columna OEG y su tr fue de 0.27 minutos, entonces el limite entre la columna OEG es largo tanto que C18, este todava es tolerable, desde limites que son largos hasta un minuto

3.5 construccion de la biblioteca de retencion multiple LC-MS

Un juego de MS/MS para anlisis cualitativo.

Se tom referencias 47-75. Columna C18; tr=0.03min

Columna OEG; tr=0.05min

Columna CD; tr=0.02

PM(47)=561.1608 PM(75)=272.0685

Ejemplos:
Ismeros 4-42 y 15-16. tr(C18)0.07min, desviacin=0 ppm por medio de una columna C18 unidimensional con PM exacto. Se pueden resolver por columna OEG tr0.33min y columna CD tr 1.32min.

Tiempos de retencin fueron empleados como etiquetas y precisos PM de las referencias fueron almacenados en la biblioteca.

3.6 APLICACIN

Fracciones incgnitas :
Fraccion A: D. odorifera Chen T. Fraccion B: S. baicalensis Georgi Fraccion A se emplearon en columnas C18 y GEO

Fraccion b se utlizaron columna C18, GEO y CD.