Biosntesis de aminocidos en

Escherichia coli

Seminario - Taller

CICLO DE KREBS

INTERMEDIARIO DEL CICLO DE KREBS

TRANSAMINA CIN

REACCIONES DE TRANSAMINACIN UTILIZANDO INTERMEDIARIOS DEL CICLO DE KREBS

En un experimento realizado para investigar las vas de la biosntesis de aminocidos, un cultivo de E. coli que creca exponencialmente en un medio de glucosa con sales fue dividido en dieciocho cultivos separados.

Se aadi a cada cultivo, glucosa marcada con 14C y un sustrato carbonado o un aminocido no radioactivo. Los sustratos carbonados y aminocidos no radioactivos aadidos se encuentran en la columna de la izquierda en la Tabla N1.

Glucosa 14C

Glucosa 14C acetato

Glucosa 14C alanina

Glucosa 14C arginina Cultivo 4

Glucosa 14C glicina Cultivo 8

Cultivo 1 (control) Cultivo 2

Glucosa 14C aspartato Cultivo 5 Glucosa 14C glutamato

Cultivo 3

Cultivo 6

Glucosa 14C Semialdehido glutmico Cultivo 7

Glucosa 14C Glucosa 14C Glucosa 14C Glucosa 14C isoleucina leucina a-cetoglutarato homoserina Cultivo 9 Cultivo 10 Cultivo 11 Cultivo 12 Glucosa 14C oxalacetato Cultivo 13 Glucosa 14C prolina Glucosa 14C piruvato Glucosa 14C serina Cultivo 16

Cultivo 14 Cultivo 15 Glucosa 14C Glucosa 14C valina treonins Cultivo 18

Cultivo 17

Despus de crecer por una generacin, los organismos fueron lisados, aislando luego fracciones de lpidos, cidos nucleicos y protenas residuales. Las fracciones proteicas fueron hidrolizadas y los aminocidos en el hidrolizado fueron separados por cromatografa bidimensional.

Coloracin con ninhidrina:

Los aminocidos separados fueron eludos individualmente, determinndose su concentracin y midindose la radioactividad en una alcuota de la muestra.

La actividad especfica de los aminocidos se encuentra en la Tabla I.

Qu informacin puede usted obtener de estos resultados, en cuanto a las vas de biosntesis de aminocidos en E. coli?

NOTAS

1 La actividad especfica de cada aminocido debera calcularse como un porcentaje del valor control, encontrando de esta manera el porcentaje de inhibicin de cada uno de los aminocidos y sustratos carbonados no radioactivos sobre la glucosa marcada.

2
Del conocimiento que posee sobre el metabolismo de la glucosa construya una va de la ruta tomada por el marcador, usando los sustratos carbonados que se encuentran en la columna de la izquierda en la Tabla I.

Postule las reacciones de transaminacin que puedan llevarse a cabo.

4 Hay aminocidos que afectan la cantidad de radioactividad en sus propias manchas y no en otras? Estos aminocidos terminan una va.

5 Seleccione los aminocidos que afectan la cantidad de radioactividad en ellos mismos y en otros aminocidos. Por lo general, mientras ms temprano se encuentra una sustancia en la va biosinttica, mayor nmero de aminocidos podrn ser sintetizados a partir de esta.

Elabore una tabla del efecto inhibitorio de los aminocidos competidores sobre la incorporacin de 14C proveniente de la glucosa en la sntesis de aminocidos de protenas.

Agrupe estos aminocidos en familias y ordnelos dentro de las familias.

8 Construya un mapa total utilizando la informacin obtenida desarrollando los puntos anteriores.

Ordenando la familia del cido asprtico: a) La adicin de cido asprtico no marcado afecta la radioactividad en asp, ile lys, met, thr. b) El cido glutmico y la prolina tambin son afectados ligeramente como resultado de la transaminacin del cido asprtico, dando lugar a alfa - cetoglutarato y la transaminacin de este cetocido da cido glutmico.

c) La adicin de homoserina afecta a los aminocidos ile, met y thr, pero no a asp o lys. d) La adicin de treonina afecta a ile y thr, mas no afecta a asp, met o lys.