Tema Nº 1: Introducción, Historia,

Definiciones, Medios de Cultivo.

Biotecnología: Es una herramienta que hace posible el empleo de
materiales vivos o partes de ellos con el fin de obtener aplicaciones
prácticas.
• Cultivo de Tejidos Vegetales: se define como el cultivo in vitro
en condiciones asépticas de células, tejido u órganos vegetales.
Esta metodología tiene un gran potencial para estudios básicos y
aplicados a la micropropagación de especies económicamente
importantes y sirve como un modelo para estudios morfológicos,
fisiológicos, bioquímicos y genéticos .

• Micropropagación: Multiplicación miniaturizada in vitro y/o

regeneración del material vegetal bajo condiciones ambientales
controladas y asépticas.
 Totipotencia: Es la capacidad que tienen las células
provenientes de cualquier parte de la planta y dadas las
condiciones apropiadas de poder desarrollarse en una
planta completa.
 Breve reseña histórica del Cultivo in vitro de tejidos y células
vegetales

.- Hooke (1665): Primera descripción de una célula.

.- Schleiden (1838) y Schwann (1839): Las células individuales de un
organismo, tienen la capacidad de vida independiente.
.- Haberlandt (1902): Primer intento de hacer cultivo de tejidos de
plantas.
.- 1904-1907: Varios investigadores logran cultivar embriones.
.- Went (1926-1928): Descubrimiento de una sustancia que estimula el
crecimiento vegetal.
.- White (1934): Cultivo indefinido de raíces de tomate.
.- Kogl y col.(1935): Descubrimiento del AIA.
 Breve reseña histórica del Cultivo in vitro de tejidos y células
vegetales

.- Gautheret, White (1939): Uso de las auxinas para la inducción de

callo.
.- Van Oberbeek (1941): Cultivo in vitro de embriones de Datura.
.- Steward (1952): Emplea agua de coco en el cultivo de tejidos.
.- Muir y col. (1954): Lograron obtener la primera planta a partir de una
sola célula.
.- Skoog y col. (1955): Descubren las citoquininas.
.-Skoog y Miller (1957): Describen el papel que tiene el balance
hormonal auxina/cinetina en la diferenciación del callo.
Esquema del control de la diferenciación ejercido por la interacción de la
auxina con las citocininas.

[Figura modificada de Rost, T. et al. (1998). Plant Biology. Wadsworth Publishing Company].
 La proporción de auxinas decrece y la de citocininas aumenta en el medio de cultivo,
de derecha a izquierda

Organogénesis en kiwi In vitro, las citocininas promueven la formación de brotes.

 Breve reseña histórica del Cultivo in vitro de tejidos y células
vegetales
.- Steward (1958): Regenera embriones desde callo y
suspensiones celulares de zanahoria.
.-Gautheret (1959): Se publica el primer manual detallado de cultivo
in vitro de tejidos vegetales.
.-Morel y Martin (1960-1964): Propagación vegetativa de orquídeas
por cultivo de meristemas.
.- Murashige y Skoog (1962): Diseño del medio sales MS.
Historia del Cultivo de Tejidos Vegetales.
En Venezuela: Facultad. de Agronomía UCV (1958).
Facultad de Ciencias UCV (1962).
 Plantas Hortícolas

PIÑA
ESPARRAGO ÑAME
 ORQUIDEAS

PLANTAS
ORNAMENTALES
HELECHO
CRISANTEMO

GLOXINIA
PLANTAS MEDICINALES E INDUSTRIALES

TABACO HIERBAMORA
SISAL

SABILA
LLANTEN
PLANTAS HORTÍCOLAS

CAFÉ

papa
CONCEPTOS BÁSICOS EN CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

- Totipotencia
- Diferenciación
- Desdiferenciación
- Crecimiento
-Morfogénesis
-Inducción
-Competencia
-Determinación.
Crecimiento:

Es un proceso fisiológico, en el cual hay un

incremento irreversible en tamaño y volumen
acompañado por la biosíntesis de constituyentes
citoplasmáticos. Esto implica: alargamiento celular y
división celular.
Diferenciación celular:
- Es el aspecto cualitativo del desarrollo.

- Tiene lugar a continuación o simultáneamente con el

aumento de tamaño, comprende distintas clases de
especializaciones anatómicas y funcionales.

Morfogénesis:
Es el origen y desarrollo de la forma, esta codificado
genéticamente y es modificado por el ambiente.
-.Desdiferenciación:
Es un cambio que involucra un regreso
progresivo a un estado meristemático o basal.
 Determinación, competencia, inducción

Competencia y Determinación en los procesos de regeneración “in

vitro”
Ocurren en respuesta a la manipulación con hormonas vegetales
Inducción: Proceso por el cual una señal actúa sobre células competentes
para alterar su destino en el desarrollo.
Competencia: Habilidad para reconocer hormonas que disparan una vía
particular de desarrollo.
Determinación: Proceso que inicia una vía específica de desarrollo escogida
de entre diferentes posibilidades para las cuales un sistema celular es
competente.
Procesos de regeneración in vitro de Plantas.

- Micropropagación: Multiplicación miniaturizada in vitro y/o

regeneración del material vegetal bajo condiciones ambientales controladas y
asépticas.

- Organogénesis.
- Embriogénesis Somática.
Tipos de cultivos in Vitro. (modificado a partir de Lindsey y Jones,
1989, en Plant biotechnology in agriculture. Open University Press,
Wiley, Chichester, p 59)
-.Composición química de los medios de cultivo: El
medio de cultivo usualmente incluye nutrientes
minerales, una fuente de carbono, vitaminas,
aminoácidos, reguladores de crecimiento, un agente
gelificante.

-.Componentes Inorgánicos: Los medios de cultivo

deben suministrar los macro y micronutrientes
esenciales para el crecimiento de plantas completas. Se
destacan las concentraciones relativamente altas de
nitrógeno y potasio. El hierro es necesario incorporarlo
con un agente quelante , lo que lo hace disponible en un
amplio intervalo de pH.
 -.Vitaminas: Son necesarias para llevar a cabo una
serie de reacciones catalíticas en el metabolismo y son
requeridas en pequeñas cantidades. De todas las
vitaminas que se incorporan a los medios de cultivo, la
tiamina (01-30 mg./l) parece ser la imprescindible para el
buen crecimiento de los cultivos.

-. Aminoácidos: los aminoácidos no son esenciales para el

crecimiento de los tejidos in vitro, sin embargo
proporcionan una fuente inmediata de nitrógeno y de
fácil asimilación por parte del tejido. Los más utilizado
son glutamina, asparagina, arginina, serina, cisteína
(agente reductor).
Mezclas de sustancias no definidas y otros componentes

Muchas preparaciones de composición indefinida han

sido empleadas para enriquecer los medios de cultivo,
cuando han fallado los medios definidos para establecer
algún cultivo.
-.Ejemplo:
-pulpa de plátano (150 g/l)
-agua de coco (10-20 %)
-extracto de malta (500 mg./l)
-hidrolizado de proteínas
-caseína, peptona (30-3000 mg./l)
-extracto de levadura (50-5000 mg./l)
Componentes Orgánicos:

-.Fuentes de carbono: La mayoría de cultivos in vitro

son heterótrofos y por ende necesitan el suministro de
una o más fuentes de carbono; que son usadas como
fuente de energía y/o reguladores osmóticos.

-La sacarosa 2 al 5 % es el azúcar más utilizado.

-La glucosa, maltosa, galactosa, lactosa, manosa se
usan en casos más específicos.
 Condiciones físicas del cultivo y de los medios

-.Medios de soporte: el agar es el material de soporte

más utilizado en el cultivo de tejidos, pues provee al
medio un excelente gel húmedo que sirve como soporte
al inóculo. Existen otros agentes gelificantes como son:
Gelrite, Agarosa, Poliacrilamida. Cuando el medio es
líquido generalmente se usa papel de cómo soporte.

-.Ventajas del uso de agar:

-Es estable a todas las temperaturas de incubación.
- No es alterado por las enzimas vegetales.
- No reacciona con los constituyentes del medio.
-No interfiere con la movilización de los
constituyentes del medio.
Medios sólidos y líquidos
Micropropagación de piña en medio líquido con soporte.
Micropropagación de piña en medio líquido en
agitación
 Algunas aplicaciones del Cultivo de Tejidos
Vegetales:

- Estudios básicos de fisiología, genética,

bioquímica.
- Propagación y multiplicación de plantas.
- Obtención de plantas libres de patógenos.
- Producción de metabolitos secundarios.
-Inducción a la variabilidad genética.
-Conservación e intercambio de germoplasma.
Embriogénesis somática en
clavel. (Karamy y col, 2006)
Propagadores
PIÑA
MUCHAS GRACIAS