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Casi todos los procariotas están rodeados por una pared celular
que da a la célula su forma característica. En algunos casos, la
pared es flexible pero, en general, es rígida.
La pared celular de cada uno de los dos linajes procariotas tiene
una composición particular que es, a su vez, distinta de la que
poseen los eucariotas.
El tipo de tinción celular, como resultado del uso de ciertos
colorantes, es uno de los caracteres fenotípicos utilizados para la
identificación de las bacterias. La coloración de Gram es de
uso prácticamente universal para la identificación de eubacterias
y refleja una diferencia fundamental en la arquitectura de la
pared celular de las eubacterias.
Tinción de Gram
Es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la
visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe
su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la
técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la
morfología celular bacteriana como para poder realizar una
primera aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se
visualizan de color violeta y Bacteria Gram negativa a las que se
visualizan de color rosa.
(http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram)
¿Cómo se hace?
Un toque del asa sobre la colonia bacteriana se debe disolver sobre
una gota de agua y extender como una capa fina sobre un
portaobjetos. Se deja secar la preparación, se fija al calor suave y se
trata como sigue (Figuras 2 y 3) :
Paso 1. Tinción con cristal violeta.
Paso 2. Fijación con una solución de yodo. Estabiliza el cristal violeta,
todas las bacterias en la preparación permanecen de color púrpura o
azul.
Paso 3. Extracción con alcohol u otro solvente. Decolora algunas
bacterias (las Gram negativas) y no otras (las Gram positivas).
Paso 4. Tinción de contraste con safranina. Las bacterias gram
positivas ya están teñidas con cristal violeta y permanecen de color
púrpura. Las bacterias gram negativas se tiñen de color rosa.
La pared celular de las bacterias
Gram positivas posee una gruesa
capa de peptidoglucano, además de
dos clases de ácidos teicoicos:
Anclado en la cara interna de la pared
celular y unido a la membrana
plasmática, se encuentra el ácido
lipoteicoico, y más en la superficie, el
ácido teicoico que está anclado
solamente en el peptidoglucano
(también conocido como mureína)
Por el contrario, la capa
de peptidoglucano de
las Gram negativas es
delgada, y se encuentra
unida a una segunda
membrana plasmática
exterior (de
composición distinta a
la interna) por medio de
lipoproteínas. Tiene una
capa delgada de
peptidoglicano unida a
una membrana exterior
por lipoproteínas. La
membrana exterior está
hecha de proteína,
fosfolípido y
lipopolisacárido.
¿Cuál es la explicación para esto?
La diferencia en la tinción de los dos tipos bacterianos, se debe a que en
las bacterias gram negativas la capa de peptidoglucano es demasiado
delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que
se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa,
perdiéndose la coloración azul-violácea. Al revés de esto, las bacterias
Gram positivas, poseen una pared celular más resistente debido a la
mayor proporción de peptidoglicanos y no son susceptibles a la acción
del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros
cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal
violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.