ImmunologíaLEC2 PROF VER

Immunología: LEC #2
Estructura del anticuerpo y la generación de

diversidad de las células B
Harry Alices-Villanueva, Ph.D.

Universidad Interamericana de Puerto Rico
Recinto de Aguadilla
Departamento de Ciencias & Tecnología
04/09/09 Harry Alices-Villanueva, Ph.D. 1

Anticuerpos
• Son proteínas variables específicas
a antígeno producida por los
linfocitos B del sistema inmune en
respuesta a una infección.

Anticuerpos
• Circulan como componente
principal del plasma en la sangre y
linfa.

Anticuerpos
• Se enlazan a microorganismos
patógenos y sus toxinas cuando
estos se encuentran en los espacios
extracelulares del cuerpo.

Anticuerpos
Cuando el anticuerpo se enlaza al
patógeno lo incapacita y lo hace
susceptible de ser atacado por
otros componentes del sistema
inmunitario.

Anticuerpos
• Anticuerpos individuales son
específicos: cada anticuerpo se enlaza
a solo uno o a un número bien pequeño
de diferentes antígenos.

Anticuerpos
• Los anticuerpos exhiben diversidad en
sus especifidades respectivas a
antígenos.

Anticuerpos
• Repertorio de anticuerpos: el número
de diferentes y especificos anticuerpos
que pueden ser hechos por un
individuo (~1016)

Anticuerpos
• Anticuerpos son la forma secretada de
proteínas conocidas con el nombre de
inmnoglobulinas (Ig).

Anticuerpos
• Antes de enfrentar antígeno, una célula
B madura expresa inmunoglobulinas
enlazadas a la membrana y en donde
funcionan como receptores de
antígeno.

Anticuerpos
• Cuando el receptor enlaza antígeno, la
célula B es estimulada a diferenciarse
en la célula plasmática.

Anticuerpos
• La célula plasmática secreta
anticuerpos de la misma especificidad
que las inmunoglobulinas en la
membrana.

Anticuerpos
• Secreción de anticuerpos es la única
función efectora de los linfocitos B del
sistema inmune.

Anticuerpos: función
• La función de una molécula de
anticuerpo en la defensa es reconocer
y enlazar su correspondiente antígeno
y enfrentar al antígeno a otros
componentes del sistema inmune.

Inmunoglobulinas
Existen cinco clases que se clasifican de acuerdo a
diferencias estructurales en regiones constantes
de la molécula y diferentes funciones efectoras:
• IgA
• IgD
• IgE
• IgG
• IgM
Inmunoglobulinas
• Son glicoproteínas
compuestas por cuatro
cadenas polipéptidas:
– Dos cadenas pesadas o
heavy.
– Dos cadenas livianas o
light.
– IgG pesa 150 kD

Inmunoglobulinas
• Varián en
secuencias de
aminoácidos en la
región amino-
terminal de cada
tipo de cadena.

Diferencias en las regiones constantes de las cadenas pesadas
definen 5 isotipos o clases de inmunoglobulinas con diferentes
funciones en la respuesta inmune. Las cadenas pesadas se
nombran α, δ, ε, λ µ, respectivamente a IgA, IgD, IgE, IgG, IgM.
Carbohidratos enlazados a grupos amino (N)

Los anticuerpos se pueden
romper en fragmentos definidos
de anticuerpos utilizando
proteasas

Cadenas livianas
• Solo dos clases: kappa: κ y lambda: λ
• No hay diferencia funcional entre
inmunoglobulinas con cadenas livianas κ ó
λ.

Cadenas livianas
• Se encuentran asociadas a las cinco Ig pero
cada anticuerpo contiene cadenas livianas
solo κ ó λ.
• La abundancia relativa varía con la especie;
en humanos 2/3 de las moléculas de
anticuerpos son κ y 1/3 λ.

Las cadenas polipéptidas
de las inmunoglobulinas
se doblan en
dominios proteícos
compactos y estables.

Estructura de los Anticuerpos
• Anticuerpos funcionan en diferentes
ambientes extracelulares donde enfrentan
diferencias en pH, concentración de sales,
enzimas proteolíticas y otros factores
desestabilizantes.
• Su estructura les ayuda a soportar y
enfrentar tales condiciones.

Estructura de los Anticuerpos
• Las cadenas light y heavy consisten en una
serie de similar sequence motif.
• Un motif consiste de 100 – 110 aminoácidos
y se dobla o conforma en un dominio
proteíco compacto y estable llamado
dominio de inmunoglobulina.

Un sitio para enlazar antígeno
(antigen binding site) está
formado por las regiones
hipervariables en los dominios de
una cadena pesada y una liviana

Antigen-binding site
• Comparar los dominios VH y VL de cadenas
en diferentes moléculas de anticuerpo
muestra que las diferencias en secuencia de
aminoácidos están concentradas en regiones
particulares que reciben el nombre de
regiones hipervariables o regiones de
determinación de complementaridad que
están flanqueadas por regiones menos
variables llamadas framework regions.
La función de los anticuerpos es
enlazarse a microorganismos
y facilitar su destrucción o
expulsión del cuerpo.

Epitope
• La parte del antígeno a la cual un
anticuerpo se enlaza.
• Tambien se le llama el determinante
antigénico.
• Los epítopes están expuestos en la
superficie del antígeno.

Virus del polio
La cubierta del virus está
hecha de tres tipos
diferentes de proteínas
(azul, amarillo, rosa)
Los epítopes se ilustran
color blanco.
En azul, proteína VP1
doblada en su forma
original; incluye en sí
misma varios epítopes.
Epítopes
• Los más comunes son carbohidratos,
proteínas o ambos:
– Glicoproteínas
– Polisacáridos
– Glicolípidos
– Proteoglicanos

Los sitios para enlazar
antígenos en el anticuerpo
varián de acuerdo a
la forma y
tamaño del epítope

Enlace de Antígeno
• El enlace del antígeno al anticuerpo está basado en
fuerzas no-covalentes.
– Fuerzas electroestáticas
– Enlaces de hídrogeno
– Fuerzas de van der Waals
– Interacciones hidrofóbicas
• Los antigen binding sites de los anticuerpos son
ricos en aminoácidos aromáticos compatibles con
interacciones hidrofóbicas y fuerzas de van der
Waals.
Tipos de epítope
• Una antígeno multivalente contiene más
de un epítope o más de una copia del mismo
epítope.

Tipos de epítope: Multivalente

Tipos de epítope
• Un epítope lineal es
aquél donde el
anticuerpo enlaza
partes de una
molécula que están
adyacentes en una
secuencia linear.

Tipos de epítope
• Un epítope
conformacional o
descontinuo es
formado por partes de
una proteína que están
separadas en secuencia
de aminoácidos pero se
acercan cuando la
proteína se dobla para
asumir su
conformación.

Algunos anticuerpos catalizan
reacciones químicas que
envuelven al antígeno al cual se
enlazan: anticuerpos catalíticos.

Anticuerpos monoclonales
• Anticuerpos producidos por un solo clon de
células productoras de anticuerpos que por
lo tanto todas tienen antigen binding sites
idénticos y son idénticas en isotipo.
• En el laboratorio se derivan de células B
que se fusionan a una célula de un mieloma
(tumores de células plasmáticas)
produciendo un hibridoma.
Diferentes epítopes en el antígeno
generan divesidad de anticuerpos.
Drogas en el cultivo destruyen las

células del mieloma.

Parte II:
Generación de la Diversidad de
Inmunoglobulinas en las Células
B antes de Enfrentar Antígeno.

Diversidad de Ig
• No hay un gen que de por sí codifique cada
inmunoglobulina.
• Segmentos de genes arreglados
secuencialmente a lo largo del cromosoma
se unen para generar la Ig.
• Germline form o germline configuration.

Diversidad de Ig
• Para que un gen de Ig se exprese,
segmentos individuales de genes deben ser
rearreglados para formar un gen funcional.
• Eso ocurre solo en células B
desarrollándose a partir de sus precursores
en la mécula ósea.

Diversidad de Ig
• El segmento de genes que codifica el
péptido lider y la región constante consiste
de introns y exons.

Diversidad de Ig
• Las regiones V están codificadas por dos

segmentos de genes VL o tres segmentos VH
que requieren rearreglo para producir un
exon que se pueda transcribir.

Diversidad de Ig
• La región V de la cadena light está
codificada por dos segmentos de genes
llamados variable (V) y joining (J).

Diversidad de Ig
• El loccus de la cadena pesada incluye un
conjunto adicional de genes llamado
diversity (D) que queda entre los segmentos
V y J.

(2 Mb) (6 bp)

Recombinación aleatoria de los
segmentos de genes produce la
diversidad en los sitios de enlazar
antígeno de las inmunoglobulinas.

Recombinación somática
• Durante el desarrollo de las células B los
arreglos de los segmentos V, D, J se cortan
(spliced) por recombinación de DNA (VDJ
Recombination).
• Este proceso está ocurriendo en células
somáticas y no en las germinales.
• Un segmento de cada tipo se enlaza para
formar una secuencia de DNA que codifica
para la región variable de una inmuglobulina.
• Para cadenas
livianas ocurre una
sola recombinación
entre los segmentos
VL y JL.

• Para las cadenas

pesadas se requieren
dos recombinaciones:
– La primera enlaza un
segmento D a uno JH.
– La segunda enlaza el
segmento DJ a uno
VH.
– Los segmentos V, D y
J que se enlazan se
seleccionan al azar en
ambos casos.

Recombination Signal Sequences
• Secuencias donde las enzimas cortan y
unen segmentos de DNA.
– Lado 3’del segmento V
– Ambos lados del segmento D
– Lado 5’del segmento J
– Hay dos tipos de RSS: un heptamero y un
nonámero separado por 12 nd y otro
separado por 23 nd. Recombinación solo
puede ocurrir entre estos dos tipos.

RSS RSS

Diversidad adicional
• Enzimas de recombinación introducen
nucleótidos adicionales durante la formación de
los enlaces entre los segmentos: junctional
diversity.
– P nucleotides: reacción de recombinación genera
secuencias palindrómicas en los extremos del DNA
cortado.
– N nucleotides: non-template nucleotides
introducidos por la enzima terminal deoxynucleotide
transferase (TdT).
– Contribuyen un factor de 3 x 107 de diversidad
adicional.

Cleavage, Polyadenilation and Splicing
Alternative RNA Splicing

Procesamiento de RNA = Mecanismo de regulación
Receptor de la Célula B
• Las interacciones Ag-Ab en el exterior de la
célula B se comunican al interior de la
célula por acción de dos proteínas
transmembranosas Igα y Igβ.
• Estas proteínas no varían en secuencia.
• Forman y completan el receptor funcional
de la célula B.

Cada célula B produce
inmunoglobulinas de una sola
especificidad hacia antígeno.

Exclusión alélica
• En una célula B en desarrollo, el proceso de
recombiannción somática está regulado y
controlado de tal forma que solo una
cadena pesada y una cadena liviana se
expresan finalmente: exclusión alélica.
• Esto asegura que cada célula B produzca
inmunoglobulinas de una sola y singular
especificidad antigénica.
Parte III
Diversificación de anticuerpos
luego que las células
B enfrentan antígeno.

Diversificación de anticuerpos luego
que las células B enfrentan antígeno.
• Rearreglo de genes en una célula B

inmadura conduce a la expresión de
cadenas light y heavy funcionales y a la
produción de IgM y IgD enlazadas a la
membrana en la célula B ya madura.
• Luego de enfrentar antígenos, estos isotipos
se secretan (mucho IgM y poca IgD).

Diversificación de anticuerpos luego
que las células B enfrentan antígeno.
• Todas las inmunoglobulinas existen en dos

formas: solubles (anticuerpos) y enlazadas a
la membrana de la célula B.
• La célula plasmática secreta la forma
soluble de las inmunoglobulinas.

Alternative RNA Processing

Hipermutación somática
• Secuencias en las regiones V rearregladas
se diversifican más aún por hipermutación
somática:
– Aleatoriamente se introducen sustituciones de
un solo nucleótido a través de la región V de las
cadenas livianas y pesadas.
– Affinity maturation: anticuerpos de
progresivamente mayor afinidad al antígeno
inmunizante son producidos.

Isotype (class) Switching
• Produce inmunoglobulinas con diferentes
regiones Constantes (C) pero idéntica
especificidad al antígeno.
• Anticuerpos con diferentes regiones
constantes tienen diferentes funciones
efectoras.

Mecanismos para eliminar patógenos.
• Neutralización
– Inactivan directamente el patógeno o la
toxina previniendo que interactuén con la
célula humana.

Mecaninsmos para eliminar patógenos.
• Opsonización
– Se cubre el patógeno con proteínas del
sistema inmune, especialemnte
anticuerpos.
– Opsoninas son anticuerpos y proteínas
de complemento.
– Patogenos opsonizados son más
facílmente digeridos por fagocitos que
tienen receptores a Fc y a ciertas
proteínas del complemento.
Complemento
• Un conjunto de proteínas plasmáticas y en
superficies celulares (30) que actuán por
reacciones en cascadas para atacar formas
patógenas extracelulares.
• Como resultado de la activación del
complemento, los patógenos se cubren de
complemento que pueden o matar (destruir) al
patógeno directamente o causar su
engolfamiento y destrucción por fagocitos.

IgM
• Es el primer anticuerpo en ser secretado en
respuesta a un patógeno.
• Es hecha principalmente por células
plasmáticas residentes en los nódulos
linfáticos, bazo, y médula ósea y circula en
la sangre y la linfa.
• IgM existe como un pentamero proveyendo
así multiples sitios para enlazar antígeno
eficientemente.
IgM
• Cuándo enlaza antígeno, sitios expuestos en las
regiones constantes de IgM inician reacciones con
complemento que matan microorganismos
directamente para facilitar el ser fagocitados.
• Hipermutación somática conduce a la secreción de
anticuerpos de mayor afinidad por el antígeno y
entonces solo las dos antigen binding sites son
eventualmente suficientes para producir un enlace
fuerte.
• Subsecuente síntesis de IgM conduce a la síntesis
de IgG.

IgG
• IgG es el anticuerpo más abundante en los
fluídos corporales internos, incluyendo
sangre y linfa.
• IgG, igual que IgM, se hace principalmente
en los nódulos linfáticos, el bazo y la
médula ósea y circula en la linfa y la
sangre.

IgG
• IgG es más pequeña y flexible que IgM lo
que le da acceso más facíl a antígenos en
los espacios extracelulares de tejido dañado
o infectado.
• Durante la preñez, IgG se transmite al feto a
través de la placenta.

IgA
• Monomérica: hecha por células plasmáticas
en los nódulos linfáticos, bazo y médula
ósea.
• Dimérica: en los tejidos linfáticos bajo la
superficie mucosa y es el anticuerpo
secretado al lumen de las cavidades
intestinales.

IgA
• Anticuerpo principal en la leche, saliva,
sudor y lágrimas.
• IgA es el anticuerpo más abundante.

Biosíntesis de IgM en la superficie de las células B

IgE
• Altamente especializado en la activación de
los mastocitos que están presentes en
tejidos epiteliales.
• IgE se enlaza a receptores en los mastocitos
provocando fuertes reacciones inflamatorias
en presencia de su antígeno.

IgE
• Se cree envuelta en la expulsión de
lombrices y parásitos.
• Envuelto en reacciones alérgicas (contra
antígenos inofensivos).

¡Ayyyy Dios
Mío….!!!!!!
• Primer examen parcial próximo

LUNES 21 DE SEPT. DE 2009.
• Capítulos I y II
• Repaso: LUNES 14 DE SEPT DE

2009
¡Examen!

Próximo Tema:
• Reconocimiento
de antígeno por
los linfocitos T.
• ¡Leer..!

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• Para las cadenas

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• Rearreglo de genes en una célula B

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• Todas las inmunoglobulinas existen en dos

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